8-hydroxyguanine이 전립선비대증 발생에 미치는 효과

이재원,이석영,이형래,이상철,김용태,김원재 충북대학교 의학연구소 2002 忠北醫大學術誌 Vol.12 No.2

연구목적: 전립선비대증은 노화현상에 의해 발생하는 질환으로서 임상적으로 주로 50세 이상에서 증상이 나타난다. 산소 라디칼은 DNA의 염기에 다양한 손상을 미칠 수 있다. 산소 라디칼에 의한 DNA의 변화에는 여러 가지 형태가 있으며 이러한 변화들 가운데서 guanine이 8-oxoguanine (8-hydroxyguanine, oh8Gua)으로의 수산화(hydroxylation) 반응은 가장 흔히 관찰되는 형태로서 노화 및 만성 퇴행성 질환, 기타 여러 질환의 중요한 병인으로 인식되고 있다. 세포에 유해한 영향을 주는 oh8Gua의 생성으로부터 유전자를 보호하는 수복효소 중 8-oxoguanine-DNA glycosylase (OGG1)가 주된 역할을 하는 것으로 알려져 있는데 이 효소를 생산하는 유전자인 hOGG1은 사람마다 유전자형이 다르다. 따라서 본 연구에서는 전립선비대증이 노화와 관련된 hOGG1 유전자형에 따라서 발생에 차이가 있는지를 조사하였다. 대상 및 방법: 충북대학교 병원에서 전립선비대증으로 진단 받고 입원하여 경요도전립선절제술을 받은 환자로 병리 조직학적으로 전립선비대증이 확인된 81명을 환자군으로 하였으며, 충청북도내 10개 군에서 50세 이상의 건강한 성인 남자 764명을 대상으로 실시한 전립선 무료검진에서 경직장 초음파 검사상 전립선 크기 20 gm 이하, 국제 전립선 증상 점수(IPSS) 7점 이하, 요속 10 ㎖/s 이상, 전립선 특이 항원(PSA) 4.0 ng/㎖ 이하인 81명을 대조군으로 설정하였다. 이들에서 채취한 혈액에서 genomic DNA를 얻은 후 PCR-SSCP (polymerase chain reaction-single stranded conformation polymorphism), 직접 염기서열분석(direct DNA sequencing) 및 RFLP (restriction fragment length polymorphism)를 통해서 두 군 사이의 hOGG1 유전자의 다형성을 분석하였다. 결과: 대조군에서 codon 326형은 Ser326Ser형이 12례(14.8%), Ser326Cys형이 51례(63.0%), Cys326Cys형이 18례(22.2%)였으며 전립선비대증 환자군에서는 Ser326Ser형이 15례(18.5%), Ser326Cys형이 34례(42.0%), Cys326Cys형이 32례(39.5%)로 두 군 사이에 통계적인 유의성이 관찰되었다(p=0.022). 또한 Cys326Cys형과 나머지(Ser326Ser, Ser326Cys)형으로 나누어 시행한 통계 분석에서도 대조군에서는 각각 18례(22.2%), 63례(77.8%)였으며 전립선비대증 환자군에서는 32례(39.5%), 49례(60.5%)로 통계적인 유의성이 관찰되었다(p=0.017, OR=2.286, 95% CI=1.149-4.546). 결론: hOGG1 유전자의 형태와 전립선비대증의 발생과는 밀접한 관련이 있었다. 즉 hOGG1 Cys326Cys형을 가진 사람에서 전립선비대증이 발생한 가능성이 높을 것으로 사료된다. Purpose: 8-oxoguanine DNA glycosylase (OSS1) rapairs DNA by removing 8-oxoguanine (oh8Gua), a highly mutagenic oxidative DNA adduct. Recently, the human gene for OGG1 (hOGG1) was cloned and several genotypes have been reported. However, the implications of such genotypes in benign prostatic lyperplasia have not been demonstrated. To assess the involvement of hOGG1 associated with the aging process on the developing of BPH, we analyzed the genetic polymorphisms of hOGG1. Materials and Methods: We studied the hOGG1 gene polymorphisms in 81 cases of BPH and 81 cases of normal controls. We performed the SSCP, PCR-based restriction fragment length polymorphism (RFLP) and direct sequencing to characterize the genetic polymorphisms of hOGG1 in both BPH patients and controls. Results: We found two polymorphic sites. A serine326/cysteine polymorphism at codon 326 (1a type) in exon 7 was associated with an exchange of amino acid. Another polymorphic site at codon 324 (1b type) in exon 6 was silent. We found that the distribution of hOGG1 genotypes in BPH patients (Ser326Ser type 18.5%, Ser326Cys type 42.0% and Cys326Cys type 39.5%) was significantly different from that in controls (14.8%, 63.0% and 22.2%, respectively) (p=0.022). Homozygosity for the Cys326Cys genotype significantly increased the risk of developing BPH, with the odds ratio (OR) being 2.286 (95% confidence interval [CI]=1.149-4.546) Conclusion: Our results suggest that the hOGG1 Cys326Cys genotype might play a important role in the development of BPH.

공기청정기의 일부 실내공기 오염물질 제거효율에 관한 연구

이태형,김윤신,홍승철,이철민,김종철,전형진,김중호 한국환경과학회 2005 한국환경과학회지 Vol.14 No.5

In this study, we investigated PM_(10), NO₂, and 1-hydroxypyrene(1-OHP) in urine at indoor environments which are 35 houses and 20 hospitals for using air cleaner and non-using air cleaner in Seoul metropolitan area and Kyoung-gi province from April, 2003 to February, 2004. Moreover, we examined effect of improvement for indoor air quality and health effect by concentration of 1-OHP also we investigated removal efficiency by air cleaner for PM_(10), NO₂, and 1-OHP that were 28.5%, 27.4%, and 42.1% respectively. Concentration of PM_(10), NO₂, and 1-OHP were 19.02±18.14μg/m³, 8.66±3.06ppb, and 0.19±0.18μg/g creatinine when air cleaner was no worked. The concentration for PM_(10), NO₂ and 1-OHP were 13.60+10.79μg/m³, 6.29±2.71ppb, and 0.11±0.10μg/g creatinine, respectively. It was significant statistically. Therefore, it is considered using the air cleaner to remove the partial pollutants in indoor environment and is positive effect for health.

폐내 기관지 낭종

이석열,이숭진,박형주,이철세,이길노,김윤정,나주옥 순천향의학연구소;Soonchunhyang Medical Research Institute 2004 Journal of Soonchunhyang Medical Science Vol.10 No.2

A 33-year-old female was admitted to our hospital due to removal of lung mass which indicentally detected Chest radiography. Chest computerized tomography revealed lung parenchymal cystic lesion. Open thoracotomy was done for diagnosis and therapy. Cystic lesion was communicated to bronchus and wedge resection including cystic lesion was done. Bronchogenic cyst is congenital disease and mainly locate in mediastinum. It is rare in lung parenchyme. Herein we report a case of intrapulmonary bronchogenic cyst.

부산·울산·경남지역 직업병 감시체계

김정일,김병권,김정원,채창호,이철호,강동묵,김지홍,김진하,김영욱,이영하,이지호,김정호,윤형렬,유철인,정백근,장태원,김운규,윤동영,강진욱,김종은,안진홍,이동준,장준호,이광영,송혜란,최영희,이용환,조병만,최홍렬,고상백,김은아,이유진,홍영습,정갑열,김정만,김준연 大韓産業醫學會 2004 대한직업환경의학회지 Vol.16 No.1

Objective: Occupational medicine specialists in the Busan, Ulsan and Kyung-Nam areas established an area-based occupational disease surveillance system and used this system to collected case information for the purpose of preventing occupational diseases Methods: l l hospital participated in this system. The authors selected five main diseases, which were hand-arm vibration syndrome (HAVS), work-related musculoskeletal disorder (WRMSD), occupational asthma, occupational skin disease and occupational and occupational lung cancer and established their case definitions. All cases were reported on the web, and real time analysis was conducted. Results: Between April 2001 and April 2003, 192 cases of HAVS, 118 cases of WRMSD, 33 cases of occupational asthma, 17 cases of occupational skin disease and 17 cases of occupational lung cancer (for a total of 377 cases of these five main diseases) were reported. most of the HAVS cases came from shipbuilding, and 172 of them (92.7%) were associated with grinding. Of the four main types of WRMSD, carpal tunnel syndrome (CTS) was the most prevalent with 46 cases and shipbuilding was also the main industry involved (83.9%). The ergonomic risk factors involved mainly associated with the hand. In 19 (57.6%) and 4 (12.1%) cases of occupational asthma, the agents involved. The causative agents of occupational lung cancer included Cr, welding fume, PAH, Ni, etc. 10(58.8%) of the cases were diagnosed as squamous cell carcinoma and 5(29.4%) as adenoma. Conclusion: This result showed that an area-based occupational disease surveillance system might provide an effective method of evaluating the prevalence of such diseases, however the Busan, Ulsan and Kyung-Nam provinces are too large to be treated as individual areas. Therefore, the authors suggest that each province should establish its own surveillance system.

국제전립선증상점수와 요류속도 및 전립선용적과의 상관성에 대한 고찰

이상철,이형래,김용태,김원 大韓泌尿器科學會 1998 Korean Journal of Urology Vol.39 No.4

腎臟組織에서 백강잠 抽出物의 抗酸化 作用에 關한 硏究

李武炯,尹哲浩,鄭智天 동국대학교 한의학연구소 1998 東國韓醫學硏究所論文集 Vol.7 No.1

白彊蠶 추출물이 신장조직에서 반응성 산소기들에 의한 지질의 과산화와 세포 손상을 방지하는지를 관찰하기 위하여 정상조직과 t-BHP를 처리한 조직에서 白彊蠶 추출물의 효과를 조사하였다. 지질의 과산화와 LDH 유출은 t-BHP의 농도에 비례하여 증가되었으나, 白彊蠶 추출물의 첨가로 유의하게 억제되었다. 그리고, t-BHP에 의한 지질의 과산화 및 LDH 유출은 白彊蠶 추출물의 농도에 비례하여 억제되었다. 또한, 白彊蠶 추출물은 oxidant를 처리하지 않은 정상조직에서도 지질의 과산화 및 LDH 유출을 유의성 있게 감소시켰다. 그리고, catalase 활성에는 영향이 없는 반면, 정상 조직과 t-BHP를 처리한 조직에서는 glutathione peroxidase 활성을 유의성 있게 증가시켰다. 한편, 반응성 산소기의 발생은 白彊蠶 추출물의 농도에 비례하예 억제되었다. 이러한 결과로 볼 때, 白彊蠶 추출물은 신장 조직내 항산화 효소의 활성을 증가시킴과 동시에 직접 반응성 산소기의 발생을 억제하므로 신장 조직에서 지질의 과산화와 세표손상을 방지하는 효과가 있을 것으로 여겨진다. This study was undertaken to determine whether Bombycis Corpus extract (Bom) has antioxidant action. Kidney tissues were exposed to t-butylhydroperoxide (t-BHP) to induce oxidative stress. Lillid peroxidation was estimated by measurimg rnalondialdehyde, a product of lipid peroxidation, and cell injury was estimated by measuring lactate dehydrogenase (LDH) release in rabbit renal cortical slices, t-BHP increased lipid peroxidation and LDH release in a dose-dependent manner over the concentration range of 0.1-1 mM. Such effects of t-BHP on lipid peroxidase and LDH release were prevented by 0.5% Bom. When tissues were treated with t-BHP in the presence of various concentration of Bom, lipid peroxidation and LDH release were dose-dependently inhibited by Bom. Bom at 1 and 2% concentrations inhibited lipid peroxidation and LDH release in normal tissues. Bom at 2% concentration increased glutathione peroxidase activity in tissues treated or untreated with 1.0 mM t-BHP. However, catalase activity was not altered by addition of Bom. Bom inhibited generation of reactive oxygen species. These results indicate that Born inhibits lipid peroxidation and cell injury in tissues treated with or without oxidant and effect is, at Ieast in part, attributed to increased activity of glutathione peroxidase and a direct sacvenging action.

부신피질 호산성 과립세포종 1예

이성진,이호권,박철영,정인경,홍은경,오기원,김현규,김두만,유재명,임성희,최문기,유형준,박성우 대한내분비학회 2004 Endocrinology and metabolism Vol.19 No.1

저자들은 건강검진에서 시행한 복부 초음파검사상 우연히 좌측 부신 종괴가 발견되어 복부 전산화 단층 촬영검사와 호르몬검사를 시행한 후 부신피질 악성종양과의 감별 진단을 위해 부신절제술과 전자현미경검사를 포함한 병리조직학적 검사를 시행하여 부신피질호산성 과립세포종으로 진단한 증례를 경험하였기에 문헌고찰과 함께 이를 보고하는 바이다. Oncocytomas are neoplasms, histologically are composed of epithelial cells, with abundant, acidophilic and granular cytoplasm. Electron microscopic studies of oncocytomas have shown that the cytoplasm of oncocytes is packed with mitochondria. The adrenal gland is a very rare anatomical site for oncocytomas, and to the best of our knowledge, only thirty-six cases of adrenal oncocytomas have been described. Herein, a case of a large adrenal mass in a forty-year-old man, which was incidentally detected by abdominal ultrasonography, is presented. This patient demonstrated no clinical manifestation associated with adrenal hyperfunction. Hormonal studies showed no abnormal findings, except for a mild elevation of the 24-hour urinary VMA level. Abdominal computed tomography with enhancement revealed a large, well-defined left adrenal mass, measuring 5.0×4.2 ×3.0 cm. The patient underwent a left adrenalectomy, and a light microscopic examination confirmed an adrenocortical oncocytoma, with characteristic oncocytes and polygonal, abundant, eosinophilic and granular cytoplasm. The tumor cells were positive for cytokeratin and vimentin as well as S-100, but negative for chromogranin on immunohistochemical staining. An electron microscopic examination demonstrated closely packed mitochondria, containing intramitochondrial inclusions. After surgery, there was no evidence of a recurrent or distant metastatic disease at the 5 month follow-up. In summary, an extremely rare case of a man with an adrenocortical oncocytoma is reported, which was confirmed by histological examinations, including electron microscopy (J Kor Soc Endocrinol 19:82∼89, 2004).

다중이용시설내 공기중 바이오에오로졸 농도분포 특성에 관한 연구

이철민,김윤신,이태형,박원석,홍승철 한국환경과학회 2004 한국환경과학회지 Vol.13 No.3

This study was conducted to evaluate the characterization of airborne bioaerosol in public facilities in Seoul. A total of 17 public facilities were investigated from December, 2002 to February, 2003. As results of the survey, the mean concentrations of bacteria and fungi in indoor air of public facilities were 378.08±296.33 CFU/m³ by RCS and 106.38±171.63 CFU/m³ and 347.46 ± 335.32 CFU/m³ and 95.23±62.61 CFU/m³, by Six-stage cascade air sampler respectively. The mean concentrations of bacteria in indoor air (by ventilation method) were 517.14± 343.93 CFU/m³ of natural ventilation and 215,83±100.71 CFU/m³ of mechanical ventilation. The mean concentrations of fungi in indoor air (by ventilation method) were 83.14±79.16 CFU/m³ of natural ventilation and 133.50±248.07 CFU/m³ of mechanical ventilation. The mean concentrations of bacteria in indoor air were 449.44 CFU/m³ for the ground and 217.50±103.68 CFU/m³ for the underground. The mean concentrations of fungi in indoor air were 63.89±77.66 CFU/m³ for the ground and 202.00±290.08 CFU/m³ for the underground.

40세 이하 관상동맥 질환자에서 장기적 임상 관찰

이승욱,정명호,박종철,박형욱,조상희,김원,김계훈,이상현,강경태,조장현,김남호,김건형,안영근,조정관,박종춘,강정채 全南大醫大 2001 전남의대학술지 Vol.37 No.2

백서 뇌하수체 성장호르몬 종양세포의 Chicken Lysozyme 유전자 갑상선호르몬 반응요소에서 갑상선호르몬 수용체 역동학에 미치는 T₃효과 분석

이성진,박철영,정인경,홍은경,최철수,김현규,김두만,유재명,임성희,최문기,유형준,박성우,Larsen, P. Reed 대한내분비학회 2003 Endocrinology and metabolism Vol.18 No.4

연구배경: 유전자 전사과정은 증강부위 (enhancer) 또는 억제부위(silencer)의 복합작용을 통하여 조절되며 chicken Iysozyme 유전자의 억제부위는 두 개의독립적인 전사인자 결합부위 (Fl과 F2)를 가지는데 Fl부위는 75~93 kD 크기의 NePl 단백질이 결합하는 위치인 반면 역위회문구조(inverted palindrome, InvPal)의 F2 부위는 갑상선호르몬 수용체가 결합하는 갑상선호르몬 반응요소인 동시에 갑상선호르몬 수용체에 대해 높은 친화력을 가지고 있다. 실험적으로 Fl부위 또는 F2 부위 (이하 F2-TRE 부위)를 각각 다량체화(multimerization) 하였을 때 전사억제효과가 증가하였다는 연구 결과는 Fl 부위와 F2-TRE 부위가 서로 독립적으로 기능하는 구조임을 시사하고 있으며chicken Iysozyme 유전자의 억제부위가 완전한 전사억제효과를 가지기 위해서는 Fl 부위와 F2-TRE 부위가 모두 필요함이 보고 되어 있다. 현재 갑상선호르몬에 의한 chicken Iysozyme 유전자 조절기전을 규명하기 위해 많은 연구가 이루어지고 있으나 73 자극 전 ·후 갑상선호르몬 수용체의 역동학에 대해서는 아직까지 거의 보고된 바 없으며 이와 관련하여 저자들은 치근 사람의 간암세포주인 HepG2 세포에서 T₃ 자극전 ·후 갑상선호르몬 반응요소인 IRE2 부위에 대한 갑상선호르몬 수용체의 결합이 교대로 이루어지고 있음을 염색체 면역침전법 (chromatin immunoprecipitation, ChIP) 및 정량적 중합효소연쇄반응을 이용하여 확인한 바 있다. 이에 저자들은 본 연구에서 F2-lRE 부위를 포함하는 백서 뇌하수체 종양세포주인 GC8 세포를대상으로 염색체 면역침전법과 중합효소연쇄반응을 이용하여 갑상선호르몬 자극 전 후 시간적 순서에 따라 F2-TRE 부위에 결합하는 갑상선호르몬 수용체의 결합양상 변화를 분석함으로써 갑상선호르몬 수용체의 역동학적 모델을 제시하여 보고자 하였다. 방법: thymidine kinase(TK) promoter의 5' 부위에 chicken Iysozyme silencer의 고친화력 갑상선호르몬 반응요소(F2-TRE 부위)가 삽입된 플라스미드,mouse TRα gene이 삽입된 플라스미드, neomycinresistance gene이 삽입된 플라스미드를 백서 뇌하수체성장호르몬 종양세포인 GC 세포에 각각 주입하여 제작한 GC8 세포주를 사용하였다. 100 αM T₃를 투여하기 전과 투여한 후 12시간 뒤 TRαl, TRβl, TRβ2 항체를 이용하여 염색체 면역침전법과 고식적 중합효소연쇄반응 및 정량적 중합효소연쇄반응을 시행하였다. 각 갑상선호르몬 수용체 항체의 양을 1.5μL에서 4.5μL로 바꾸어 첨가한 후 동일한 방법으로 염색체 면역침전법을 반복하여 시행하였다. 100nM T₃를 투여하기전과 투여한 후 20분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 8시간, 12시간 뒤 TRαl, TRβl, TRβ2 항체를 이용하여 염색체 면역침전법을 시행하였다. 100nM T₃를 투여하기 전과 투여한 후 12시간 뒤 TRαl, TRβl, TRβ2 단백질의 발현량을 알아보고자 Western blot을 시행하였다. 결과: 100 nM T₃를 투여하기 전과 투여한 후 12시간 뒤 염색체 면역침전법과 F2-TRE 시발체를 이용한 고식적 중합효소연쇄반응을 시행하였을 때 T₃를 투여한 후 12시간 뒤 TRα1과 TRβ2의 결합은 증가한 반면 TRβl의 결합은 감소하였다. 정량적 중합효소연쇄반응으로 갑상선호르몬 수용체의 결합량을 측정하였을 때TRα1은 T₃ 투여 전 1.01에서 T₃ 투여 후 2.73으로 유의하게 증가하였으며 TBβl은 T₃ 투여 전 4.59에서 T₃투여 후 2.06으로 유의하게 감소하였고 TRβ2는 T₃ 투여 전 2.53에서 T₃ 투여 후 2.98로 증가하는 경향을보였다(TRα1, Δ=+170.3%, p<0.05; TRαl, Δ=-55.1%, p<0.05; TRβ2, Δ=+17.8%). 정량적 중합효소연쇄반응으로 측정한 갑상선호르몬 수용체의 전체 결합량은 T₃ 투여 전 8.13에서 T₃ 투여 후 7.77로 감소하였으나 통계적으로 유의하지 않았다(Δ=-4.4%).100nM T₃ 투여 전 ·후 시간별로 염색체 면역침전법과 정량적 중합효소연쇄반응을 시행하였을 때 TRα1 결합량은 T₃ 투여 후 20분과 6시간 뒤 각각 증가하였으며 TRβ2 결합량은 T₃ 투여 후 20분 뒤 최고치까지 증가하였다가 2시간 뒤부터 감소하였다. 그러나 TRαl 결합량은 T₃ 투여 후 1시간 뒤 최저치까지 감소되었다가 이후 지속적으로 유지되는 경향을 보였다. 100 nM T₃ 투여 전과 투여 후 2시간 뒤 갑상선호르몬 수용체의 결합량을 비교하였을 때 TRα1은 219.8% (1.01→3.23), TRβ2는 9.9% (2.53→2.78) 증가하였으나 TRβ1은 52.9% (4.59-)2.16) 감소하였으며 결합량 변화의 방향은 100 naM T₃ 투여 후 4시간 뒤와 6시간 뒤 갑상선호르몬 수용체 결합량 변화의 방향과 일치하였다(TRα1, 2.89→4.09, Δ =+41.5%; TRβl, 2.33→2.04, Δ=-12.4%; TRβ2, 2.57→2.59, Δ=10.8%). 갑상선호르몬 수용체 항체를 1.5 μL 또는 4.5 μL 투여한 후 F2-TRE부위에 대한 염색체 면역침전법 및 정량적 중합효소연쇄반응을 각각 시행하였을 때 첨가한 갑상선호르몬 수용체 항체의 양에 따른 갑상선호르몬 수용체결합량의 유의한 차이는 없었다. 100 nM T₃를 투여하기 전과 투여한 후 12시간 뒤 Western blot을 시행하였을 때 갑상선호르몬 수용체 발현량의 유의한 차이는 관찰되지 않았다. 결론: 본 연구에서 관찰된 T₃ 자극 전 · 후 chickenIysozyme 유전자의 F2-TBtE 부위에 대한 갑상선호르몬 수용체 이성체의 교대현상 및 시간적 순서에 따른 갑상선호르몬 수용체 결합양상의 변화가 나타내는 의미에 대하여 추시 연구가 필요함은 물론 추가적으로 다른 유전자 또는 다른 종류의 세포주를 대상으로 T₃자극에 따른 갑상선호르몬 수용체 결합양상의 변화와유전자 발현을 검토하여야 할 것이다. 한편 본 연구 결과만으로는 갑상선호르몬 수용체 역동학에 대한 많은 의문점을 풀 수 없음에도 불구하고 아직까지 국내외적으로 갑상선호르몬 수용체의 역동학에 대한 연구 결과가 거의 없는 현실을 고려하여 볼 때 본 연구는 제한적이나마 일정한 농도의 갑상선호르몬 자극 전ㆍ후chicken Iysozyme 유전자의 F2-TRE 부위에서 갑상선호르몬 수용체의 교대현상을 재확인하였다는 점과 갑상선호르몬 자극 전 · 후 시간적 순서에 따른 갑상선호르몬 수용체의 역동학적 모델을 처음으로 제시하였다는 점에서 의의가 있을 것으로 생각된다. Background: The regulation of gene transcription can be controlled by both positive (enhancer) and negative (silencer) regulatory sequences. Several enhancer and silencer elements have been described in the 5' region of the chicken lysozyme gene. The silencer located at -2.4 kb upstream of the chicken lysozyme gene is composed of two separate modules (Fl and F2) that can function as silencers by themselves, but also show synergistic repression after multimerization. The F1 module is bound by a protein termed NePl and F2 module, a F2 thyroid hormone response element (F2-TRE), and can be bound by the thyroid hormone receptor (TR). F2-TRE has an inverted palindromic structure, with high affinity to TR. Although many current reported results have tried to explain the regulatory mechanism of chicken lysozyme gene expression due to the thyroid hormone, there have been few studies that clarify the TR dynamics in the F2-TRE of the chicken lysozyme gene, either with or without exposure of the thyroid hormone. Here, the changes in the TR binding patterns in the F2-TRE of the chicken lysozyme gene are described, both before and after T₃ stimulation over time. Methods: Using the stably transfected rat pituitary somatotroph tumor cell line, GC8 cells, with the F2-TRE inserted 5' to the thymidine kinase (TIC) promoter, together with a mouse TRα - expressing plasmid, a chromatin immunoprecipitation (ChIP) technique was employed to reveal the TR-TRE interaction before and after T₃ stimulation. Following the cross-linking and sonication of the cells, the immunoprecipitation was performed overnight, at 4℃, with TRαl, TRβl and TRβ2 antibodies, respectively. The binding patterns and amounts of TRαl, TRβ1 and TRβ2 to the F2-TRE, before and after 12 hours of 100nM T₃ stimulation, were analyzed using conventional and quantitative real-time polymerase chain reactions (RQ-PCR). The ChIP technique was used to give a basal value for 20 minutes and 1, 2, 4, 6, 8 and 12 hours after the 100nM T₃ stimulation, and RQ-PCR was then performed. Western blot with TRαl, TRβl and TRβ2 antibodies were also performed. Results: After 12 hours of 100 nM T₃ stimulation of the GC8 cells, the TRα1 and TRβ2 binding to the F2-TRE increased, but the TRβ1 binding to the F2-TRE decreased, by conventional PCR. Although all the TR isoforms were bound to the F2-TRE by RQ-PCR, the TRαl binding to the F2-TRE, after 12 hours of l00nM T₃ stimulation, was significantly increased (1.01→2.73, Δ =+170.3%, p<0.05), but the change in the amount of TW2 binding was not significant (2.53→2.98, Δ=+17.8%). The TRβl binding was significantly decreased compared with that of the basal level (4.59→2.06, Δ=-55.1%, p<0.05). The total TR bindings to the F2-TRE had a tendency to decrease after 12 hours of 100 nM T₃ stimulation (8.13→7.77, Δ=-4.4%). The binding patterns and amounts of TRαl, Tβl and Tβ2, both before and after the 100 nM T₃ stimulation, were also identified over time. While the TRβl bindings to the F2-TRE after 1 hour of l00nM T₃ stimulation were acutely reduced, those of the TRαl at 20 minutes and 6 hours were increased. The TRβ2 bindings showed a maximal increase at 20 minutes. The directions of the TR binding patterns, between the before and after 2 hours of 100nM T₃ stimulation, were identical to those for between 4 and 6 hours of T₃ stimulation. There was no significant difference in the TR bindings to the F2-TRE in relation to the amounts (1.5 vs. 4.5μ I) of TR antibodies used during the ChIP assays. The Western blots showed no significant change of the levels of each TR isoform proteins, either before or after 12 hours of exposure to 100nM T₃. Conclusion: These results show the dynamic binding patterns of the TR isoforms to the F2-TRE of the chicken lysozyme gene, both before and after T₃ stimulation, over time. Further investigation, however, will be needed to clarify the mechanisms of our observations. The ChIP technique may then be used to reveal the dynamic models of the cofactors, as well as TR isoforms, in the TR-regulated transcription machinery (J Kor SOC Endocrinol 18:379-391, 2003).