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재조함 인성장호르몬의 in vitro 풀림과 재접힘 과정의 구조변화 모니터링
조태훈,채영규,안상점,이은규,Cho, Tae-Hoon,Chai, Young-Kyu,Ahn, Sang-Jeom,Lee, Eun-Kyu 한국생물공학회 1999 KSBB Journal Vol.14 No.6
재조합 인성장호르몬을 사용하여 in vitro 재접힘 공정(풀림, 희석에 의한 공기 중 산화, 그리고 투석)을 수행하였다. 표면소수성이 풀림-재접힘 공정에 중요한 역할을 한다는 것을 형광값의 변화를 통하여 알 수 있었다. 변성제의 intermediate 농도는 Urea와 Gu-HCl 경우 하나의 peak로 SDS와 Sarkosyl의 경우 두개의 peak로 나타났다. 형광값의 변화 중 특이한 점은 Urea의 경우 공기 중 산화와 투석 중의 후반부에 형광값이 증가한다는 것이다. 따라서 공기 중 산화도중 형광값이 증가하기 전에 투석을 시킨 결과 형광값이 증가를 막을 수 있었다. 아직 이 원인에 대해 자세히 알 수 없지만 계속 실험 중에 있다. 이번 실험에서 표면소수성 변화와 연관시켜 fluorescence를 이황화결합에 의한 산화된 형태를 알아보기 위한 방법으로 RP-HPLC를 마지막으로 단백질의 2차원적인 구조를 알아 보기 위해 CD를 사용하였다. CD측정 결과 Gu-HCl보다 SDS의 경우 ${\alpha}$-helices의 파괴가 더 많음을 볼 수 있었다. 재접힘된 rhGH는 본래의 2차원적 구조의 90%이상을 얻을 수 있었다. 이 실험이 기지는 의의는 이 모든 실험결과를 토대로 단백질 재접힘을 모니터링 하였다는 점이다. 즉, 형광값의 변화를 통하여 형광값이 증가하는 것은 표면 소수성이 증가함을 보이는 것으로 단백질의 풀림이 일어난 것이고 3차원적 구조가 깨지고 2차원 구조를 알아 볼 수 있는 ${\alpha}$-helices의 감소를 의미하였다. 이와는 반대로 형광값이 감소하는 것을 통해 재접힘이 일어남을 알 수 있었고, 이러한 결과를 바탕으로 단백질의 재접힘 공정의 변화과정을 형광값을 통하여 모니터링 할 수 있었다. 또한 이 실험의 목적 단백질은 rhGH이지만 다른 단백질에 적용이 될 경우 단백질 재접힘 과정을 수시로 모니터링하고 상태를 예측할 수 있으므로 산업현장에서 소량의 sample로 재접힘 상태를 쉽고 빠르게 판단할 수 있을 것이다. 단백질 재접힘 과정에서 이러한 개념의 성공적 도입은 단백질 회수 수율을 높임으로써 생물분리공정 분야의 기술 발전에 이바지 하리라 사료된다. Using recombinant human growth hormone as a model protein, we carried out unfolding by adding a denaturant such as urea, guanidine HCl, or SDS followed by refolding by dilution and dialysis. The objectives were to monitor the structural changes during in vitro refolding process and, based on the results, to develop a quantitative method of refolding progress assessment. The changes in surface hydrophobicity were measured by fluorescence tagging of 1-anilinonaphthalene-8-sulfonate(1,8-ANS) to the hydrophobic portions, and those in the secondary structure were monitored by using far UV-CD(circular dichroism) spectroscopy. Also, we used RP-HPLC to separate and quantify the folded and unfolded proteins to correlate the result with the structure analysis. Our results indicate the surface hydrophobicity are well correlated with the formations of the secondary structure, primarily ${\alpha}$-helices, as well as the disulfide bridges. We expect this monitoring technique can be applied in industrial fields as a means to quantitatively assess the progress of in-vitro refolding of recombinant proteins.
과산화수소 증기를 이용한 다양한 쿠폰 표면의 Geobacillus Stearothermophilus 아포 제독조건
김상훈,정경화,김세계,채영규,김윤기,황현철,김민철,박명규,류삼곤,Kim, Sang Hoon,Jung, Kyoung Hwa,Kim, Se Kye,Chai, Young Gyu,Kim, Yun Ki,Hwang, Hyun Chul,Kim, Min Cheol,Park, Myung Kyu,Ryu, Sam Gon 한국군사과학기술학회 2013 한국군사과학기술학회지 Vol.16 No.4
Biological decontamination means the removal of microorganisms from the inanimate object such as building or equipment. In this study, hydrogen peroxide vapor efficacy test using VHP 1000ED system(Steris LifeSciences) were conducted for G. stearothermophilus spore with agent materials(aluminum, stainless steel, poly-carbonate, viton, silicone, kapton and glass). Total recovered spores exposed to hydrogen peroxide vapor(1.0 g/min) during 7, 15, 30, 60 min were calculated. As a result, all agent materials were totally decontaminated within 60 min at 1.0 g/min concentration with 35% hydrogen peroxide vapor. Finally, we could confirmed that hydrogen peroxide vapor possess sporicidal capacity of G. stearothermophilus and found the optimum decontamination conditions with VHP1000ED system.
한국인 알코올리즘과 Catechol-O-methyltransferase(COMT) 유전자 다형성의 연합
김민정,양병환,이정식,채영규,박택규,Kim, Min-Jung,Yang, Byung-Hwan,Lee, Jung-Sik,Chai, Young-Gyu,Park, Taek-Kyu 대한생물정신의학회 2001 생물정신의학 Vol.8 No.1
An association study with Korean alcoholic patients(n=50) and normal controls(n=53) was performed to find the relationship between catechol-O-methyltransferase(COMT) gene polymorphism and alcoholism using polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism. When we compared the allele and genotype frequencies of Nla III COMT gene polymorphism in alcoholism and normal controls, there was no significant difference between two groups. Our results do not support an association between the Nla III polymorphism of COMT gene and alcoholism.
박지윤 ( Ji Yoon Park ),김진규 ( Jin Kyu Kim ),채영규 ( Young Gyu Chai ) 한국환경생물학회 2005 환경생물 : 환경생물학회지 Vol.23 No.2
N/A Ionizing radiation is a well-known therapy factor for human carcinoma cells. Genotoxic stress mediates cell cycle control, transcription and cellular signaling. In this work, we have used a microarray hybridization approach to characterize the cell type-specific transcriptional response of human carcinoma MCF-7 and HeLa cell line to γ-radiation, such as 4 Gy 4 hr. We found that exposure to γ-ray alters by at least a loge factor of 1.0 the expression of known genes. Of the 27 genes affected by irradiation, 11 are down-regulated in MCF-7 cells and 2 genes induced by radiation, 15 are repressed in HeLa cells. Many genes were involved in known damage-response pathways for cell cycling, transcription factor and cellular signaling response. However, in MCF-7 cells, we observed gene expression pattern in chromatin, apoptosis, stress, differentiation, cytokine, metabolism, ribosome and calcium. In HeLa cells, it showed clearly the expression changes in adhesion and migration, lysosome, brain, genome instability and translation. These insights reveal new therapy directions for studying the human carcinoma cell response to radiation.
정신분열병과 Catechol-O-methyltransferase(COMT) 유전자 다형성의 연합
송은숙,양병환,박강규,이유상,안은숙,오동열,김종원,최인근,김길숙,채영규,Song, En-Sook,Yang, Byung-Hwan,Park, Kang-Kyu,Lee, Yu-Sang,An, Eun-Soog,Oh, Dong-Yul,Kim, Jong-Won,Choi, Ihn-Geun,Kim, Gil-Sook,Chai, Young-Gyu 대한생물정신의학회 1998 생물정신의학 Vol.5 No.2
An association study with Korean schizophrenic patients(N=84) and normal controls(N=87) was performed to find the relationship between catechol-O-methyltransferase(COMT) gene polymorphism and schizophrenia using polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism. When we compared the allele and genotype frequencies of Bgl I COMT gene polymorphism in schizophrenics and normal controls, there was no significant difference between two groups. Our results do not support an association between the Bgl I polymorphism of COMT gene and schizophrenia.
MCF-7 세포주의 γ선에 의한 DNA 손상 반응 유전자 발현 양상의 분석
박지윤 ( Ji Yoon Park ),황창일 ( Chang Il Hwang ),박웅양 ( Woong Yang Park ),김진규 ( Jin Kyu Kim ),채영규 ( Young Gyu Chai ) 한국환경생물학회 2005 환경생물 : 환경생물학회지 Vol.23 No.1
N/A Cell response to genotoxic agents is complex and involves the participation of different classes of genes including cell cycle control, DNA repair and apoptosis. In this report, we presented a approach to characterize the cellular functions associated with the altered transcript profiles of MCF-7 exposed to low-dose in vitro gamma-irradiation. We used the method of human 2.4 k cDNA microarrays containing apoptosis, cell cycle, chromatin, repair, stress and chromosome genes to analyze the differential gene expression characterization that were displayed by radiation-exposed cell, human breast carcinoma MCF-7 cell line, such as 4 Gy 4 hr, 8 Gy 4 hr, and 8 Gy 12 hr. Among these genes, 66 were up-regulated and 49 were down-regulated. Specific genes were concomitantly induced in the results. Cyclin dependent kinase 4 (Cdk4) is induced for starting the cell cycle. This regulation is required for a DNA damage-induced G1 arrest. In addition to, an apoptotic pathways gene Bcl- w was concomitantly induced. Mismatch repair protein homologue-1 (hMLH1), a necessary component of DNA mismatch protein repair (MMR), in G2-M cell cycle checkpoint arrest. The present study provides new information on the molecular mechanism underlying the cell response to genotoxic stress, with relevance to basic and clinical research.
정신분열병과 N-Methyl-D-Aspartate 수용체 유전자와 연관된 VNTR 표지자인 D9S158 다형성의 연합
김종원,채영규,정은기,김길숙,박강규,이영호,최인근,양병환,한진희 大韓神經精神醫學會 1998 신경정신의학 Vol.37 No.5
정신분열병과 NMDA 수용체와 연관된 D9S158 유전적 표지자와의 연관성을 알아보기 위해 75명의 정신분열병 환자군과 87명의 정상대조군을 대상으로 중합효소연쇄반응을 이용하여 연합연구를 시행하여 다음과 같은 결론을 얻었다. D9S158 유전좌위에는 모두 8개의 대립유전자가 있었고, 각 대립유전자는 cytosine-adenine염기가 반복되는 217염기쌍에서 233염기쌍의 형태였다. 먼저 정신분열병 환자와 정상대조군의 대립유전자의 빈도를 비교해 본 결과 통계적으로 유의한 차이를 보이지 않았다(p〉.05). 환자군을 좀 더 동질적으로 만들기 위해 정신분열병의 가족력 유무, 음성 및 양성증상, 연성신경학적 징후, DSM-IV 임상아형에 따라 환자군을 나누어 대립유전자의 빈도를 비교해 본 결과, 특정 임상양상과 관련이 있는 대립유전자를 발견하지 못하였다. 결론적으로 본 연구에서는 D9S158 유전좌위와 정신분열병의 연관성을 입증하지 못하였으나 NMDA 수용체 유전자주위의 다른 표지자나 좀 더 유전적으로 동질한 환자군을 대상으로 한 추후연구가 필요할 것으로 생각된다. An association study with Korean schizophrenic patients(N=75) and normal controls(N=87) was performed to find the relationship between D9S158 polymorphism and schizophrenia using polymerase chain reaction. Eight different alleles of a dinucleotide polymorphism on D9S158 locus were observed in both group. When we compared the frequencies of alleles between schizophrenics and normal controls, there was no significant difference between two groups. To increase homogeneity of schizophrenic group, we divided schizophrenic group by clinical phenotypes such as family history, negative and positive symptoms(PANSS), soft neurologic signs(NES-K) and DSM-IV diagnostic subtypes. Then we compared the frequencies of alleles among subgroups of clinical phenotypes, and there were no significant differences between subgroups(p〉.05). Although our findings fail to provide an evidence of association between schizophrenia and D9S158 locus, further investigation of other loci that are linked to NMDA receptor gene may be needed in genetically homogeneous subgroups of schizophrenia.