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        자궁경부암 세포주들에서 리포좀을 이용한 아데노 연관 바이러스 종양억제 유전자 [pAAVCMVp53]의 직접 이입법에 의한 세포 성장 억제 효과

        김승조,이헌영,남궁성은,김수평,이준모,안웅식,이지영,김종국,박순희,박용석,한유진,양재명,서상용,김동재,조규남 대한산부인과학회 1999 Obstetrics & Gynecology Science Vol.42 No.5

        목적: 자궁경부암 유전자 치료를 위하여 자궁경부암 세포주들에 리포좀을 이용한 아데노 연관 바이러스 종양억제 유전자[pAAVCMVp53]의 직접 이입효과와 이를 통한 세포성장 억제효과를 보고자 하였다. 방법: 자궁암 세포주들 [CaSki, SiHa, HeLa, HeLaS3, C33A, HT3]은 각각 12well plate에 104/well, 96 well plate에 5×103/well수로 triplicate를 하였다. 또한, 대조군pAAVCMVp53, lipofectin, pAAVCMVp53/lipo fectin, pAAVCMV/리포펙틴이 함유되있는 것을 각12 well에 20 ㎕씩 96 well에는 10 ㎕씩을 투여한 다음 7일간 배양하였다. 세포수 측정, ELISA [neutral red] assay, MTT assay와 tritium thymidine incorporation assay등을 이용하여 세포성장과 세포 생육성을 측정하고 이를 one-way ANOVA F-test, multiple comparison Tukey method에 의해 차이를 비교하였다. 결과: p53 단백질의 발현은 배양 3일째 최고치를 나타냈으며, 이입율은 자궁경부암 세포들의 종류별로 약 10%∼37.5% 이었다. 도입 후 6일 기준으로 정상 대조군 세포와 비교한 결과 CaSki의 경우 세포수는 60.8%, Neutral red assay는 26.2%, MTT assay는 41.8%, tritium thymidine assay는 66.6%의 감소를 보였고, SiHa는 각각 58.5%, 32.4%, 51%, 88%, HeLa는 35.5%, 53.3%, 42.2%, 42.5%, HeLa S3는 67.4%, 24.5%, 21.6%, 71.1%, C33A는 53.1%, 44.2%, 36.8%, 76%, HT3는 86.9%, 50.4%, 6.3%, 26.5%의 감소를 보였다. 결론: 자궁경부암 세포주에 직접 이입법을 통한 p53 유전자 전달 후 세포의 성장은 유의하게 억제되었다. 이와같은 결과는 향후 자궁경부암 환자에 있어서 아데노 연관 바이러스를 이용한 억제 유전자의 직접 이 입법에 의한 유전자 치료를 실시할 수 있는 새로운 장으로 생각되어진다. Purpose: Cervical cancer is strongly associated with human papilloma virus [HPV] and the transforming viral genes E6 and E7 are steadily expressed by the tumor cells. To evaluate the transfection efficiency of pAAVCMVp53 by lipofectin and explore the growth inhibitory potential of an pAAVCMVp53 in various cervical cancer cell lines, we constructed pAAVCMVp53. Methods: CaSki, SiHa, HeLa, HeLaS3, C33A and HT3 cervical cancer cell lines were used for evaluate the growth inhibitory effect of pAAVCMVp53 transferred by lipofectin. These cells were cultured for 6 days, we divided transfection groups into five groups, control, pAAVCMVp53, lipofectin, pAAVCMVp53/lipofectin and pAAVCMV/lipofectin. Cell proliferation was checked by cell counting after Trypan blues staining, cell viability assay by ELISA method stained by neutral red, MTT assay and [3H] Thymidine incorporation assay. And Western blot was performed for confirming p53 gene expression after 1, 3, 5 days. For the statistical analysis one-way ANOVA F-test, multiple comparison Tukey method was used. Results: The third day after gene transfection showed the highest expression of p53 protein. Transfection efficiency was about 10%∼37.5%. pAAVCMVp53 inhibited cell growth with lipofection by cell counting after 6 day culture about 60.8% CaSki and 58.5% in SiHa cells, 35.5% in HeLa and 67.4% in HeLaS3, 53.1% in C33A and 86.9% in HT3 compared to control cells. Conclusion: These data suggest that transfection of cervical cancer cells with pAAVCMVp53 with lipofectin is a potential novel approach to the gene therapy of cervical cancer.

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        자궁경부암 세포주들에서 리포좀을 이용한 종양억제 유전자 [pRcCMVp53/liposome]의 직접 이입법에 의한 세포 성장 억제 효과

        김승조,이헌영,남궁성은,김수평,이준모,안웅식,김종국,박순희,박용석,김진철,한유진,양재명,신봉영,서상용,김동재 대한산부인과학회 1999 Obstetrics & Gynecology Science Vol.42 No.4

        목적: 자궁경부암 유전자 치료를 위하여 자궁경부암 세포주들에 리포좀을 이용한 종양억제 유전자[wild-type p53 gene]의 직접 이입을 통하여 세포성장 억제효과를 보고자 하였다. 방법: 자궁암세포주들 [CaSki, SiHa, HeLa, HeLaS3, C33A, HT3]을 12 well에 104, 96 well에 5×103의 수로 triplicate를 형성한 뒤 대조군, pRcCMVp53, lipofectin, pRcCMV/lipofectin, pRcCMVp53/lipofetin이 함유되있는 것 을 각기 12 well에 20 ㎕씩 96 well에는 10 ㎕씩을 투여한 다음 7일간 배양하였다. 세포수 측정, ELISA [neutral red] assay, MTT등을 이용하여 세포성장과 cell viability를 측정하고 이를 one-way ANOVA F-test, multiple comparison Tukey method에 의해 날짜별 서로 군의 차이를 비교 하였다. 결과: p53 유전자에 의한 자궁경부암 세포주의 성장억제를 확인하기 위하여 세포 수 측정, ELISA assay, MTT assay를 시행하였으며 각각의 assay에 대한 측정 마지막날인 6일째를 기준으로 정상대조군 세포와 비교한 결과 세 포수 측정에서는 CaSki[89%], SiHa[59.2%], HeLa[86%], HeLaS3[78%], C33A[91%] 그리고 HT3[74%] 성장억제를 나타냈다. 또한 Neutral red를 이용한 세포 viability assay 에서는 CaSki[70%], SiHa[93%], HeLa[73%], HeLaS3[50%], C33A[67%] 그리고 HT3[52%]에서 는 52%의 세포감소를 보여주었다. MTT assay를 통한 각각의 자궁경부암 세포주의 세포성장억제 결과는 CaSki[38%], SiHa[72%], HeLa[53%], HeLaS3[28%], C33A[33%]그리고 HT3[53%]였다. 결론: 자궁경부암 세포주에 직접 이입법을 통한 유전자 전달 후 세포성장 억제는 매우 유익하게 감소되었으며 이와같은 결과는 향후 유전자 직접 이입법에 의한 자궁경부암 환자에 있어서 유전자 치료를 실시할 수 있는 새로운 장으 로 생각이 되어진다. Purpose: We investigated cell growth inhibitory effect of the wild type p53 gene into the cervical cancer cells via the recombinant p53 plasmid, pRcCMVp53 with lipofectin. Method: Inhibition of the growth of cervical cells as determined by a cell count assay. The cells were inoculated at density of 104 cells/well in each 12 well plate, 24 hrs before infection. At each indicated point, cells in three wells on each well plate were trypsinized and counted. The mean cell counts of triplicated well after transfection at day 1~6 was checked. Inhibition of the growth of cervical cells were checked by ELISA assay, MTT assay. The cells inoculated at densities of 5×103/well in each 96 plate 24 hrs before infection. At each indicated point cells of three wells were transfected for 6 days, harvested and counted by liquid scintillation counter the mean cpm per triplicate wells were plated for ELISA and MTT assay. One-way ANOVA F-test and multiple comparison Tukey method was used for statistical analysis. Result: Inhibition of the growth of cervical cells in cell count showed CaSki[89%], SiHa[59.2%], HeLa[86%], HeLaS3[78%], C33A[91%] and HT3[74%]. ELISA assay showed CaSki[70%], SiHa[53%], HeLa[73%], HeLaS3[50%], C33A[67%] and HT3[73%]. MTT assay showed HeLa[33%], HeLaS3[28%], SiHa[75%], CaSki[38%], C33A[33%] and HT3[53%]. Conclusion: These results indicate that transfection of cervical cancer cells with the wild type p53 gene via pRcCMVp53 with lipofectin is a potential novel approach to the gene therapy of cervical cancer.

      • KCI등재

        20 주까지 진행된 파열성 자궁각임신 1 례

        신승주,이문희,김혜숙,김순희,서창식 대한산부인과학회 1994 Obstetrics & Gynecology Science Vol.37 No.1

        자궁각임신은 매우 드물고 해부학적인 특이성으로 인하여 파열전 조기진단이 중요함에도 불구하고 그것이 매우 어려운 것으로 알려져 왔다. 최근, 초음파의 발전으로 초음파를 이용한 자궁각임신의 조기 진단에 많은 심혈을 기울이고 있다. 본 저자들은 임신 20주까지 진행된, 파열성 자궁각임신 1례를 경험하였기에 문헌적 고찰과 함께 이를 보고하는 바이다. Cornual (Interstitial) pregnancy is a relatively uncommon but potentially catastrophic from of ectopic pregnancy, defined as implantation in the intramural portion of a fallopian tube. Its incidence is estimated to be between 2-4% of all tubal pregnancy. Because the greater distensibility and vascularity of this site lead to rupture at a latter gestational age and rapid intraperitoneal hemorrhage, interstitial pregnancy casues serious maternal mortality and morbidity. Although the diagnosis of this condition prior to rupture is difficult, early detection is essential to avoid a fatal outcome. We experienced a case of ruptured cornual pregnancy at 20 week gestation and so we present it with brief review of literature.

      • KCI등재

        융모성질환의 완치 후 차기임신에 관한 고찰

        김승조,배석년,남궁성은,최은아,김재훈,서천옥,송희영,박명재 대한산부인과학회 1997 Obstetrics & Gynecology Science Vol.40 No.8

        For evaluating the reproductive performances of GTD patients, we found 115 cases of GTD patients, 77 HM and 38 GTT, who became pregnant after the completion of treatments and follow-up period. Among GTD patients, them live births, premature deliveries, and stillborn deliveries were 89(77.4%), 3(2.6%), and 1(0.9%), respectively. Also, cases of spontaneous abortion, ectopic pregnancy, and congenital anomaly were 14(12.2%),1(0.9%), and 3(2.6%), respectively. However patients with repeat GTD was 5(4.3%), which is higher than the natural indence of GTD in Korea, at 0.2%. Patients who received chemotherapy for GTT showed no specific effects related to pregnancy. An especially important outcome was the ratio of congenital anomaly that did not increase in spite of teratogenic effects. In addition, 2nd pregnancies following the completion of treatments produced results that were similar to the results of the 1st pregnancies. There were also no specificity in complication of antepartum and postpartum, mode of delivery, indications of cesarean section, and distribution of neonatal sex and weight. The results of this study suggest subsequent pregnancies after the completion of treatments may promise normal reproductive outcomes regardless of the chemotherapy.

      • KCI등재

        만삭임신 시 조기파수 환자에서 진통유발을 위한 Prostaglandin E2의 평가

        조성남,서성진,이종진,조유진,문현창 대한산부인과학회 1999 Obstetrics & Gynecology Science Vol.42 No.7

        목적: 만삭임신에서 진통발현 전 자연파수 시 그 처치는 산과의에게 가장 어려운 문제점 중의 하나입니다. 이에 저자들은 만삭임신에서 조기파수 된 환자들에 대한 세가지 처치방법들을 후향적 비교 분석하고자 하였습니다. 연구방법: 본 연구에서는 1996년 1월 1일부터 1997년 12월 31일까지 전북대학교병원 산부인과를 방문한 임신 38주에서 41주사이의 두위의 단태임신으로 파막후 3시간까지 진통이 없는 건강한 140명의 산모를 대상으로 하여 무작위로 3군으로 분류하여 조사하였습니다. 결과: 분만경과시간은 프로스타글란딘E2를 사용한 군과 옥시토신을 사용한 군에서 대조군에 비해 짧았고[P$lt;0.05], 모성감염은 프로스타글란딘E2를 사용한 군에서 옥시토신을 사용한 군과 기대요법을 이용한 대조군에 비해 적었으며[P$lt;0.05], 제왕절개율은 3군에서 차이가 없었고, 또한 프로스타글란딘E2를 사용한 군에서 심한 부작용은 없었다. 결론: 프로스타글란딘E2를 이용한 만삭임신에서 조기파수 된 환자의 분만유도는 옥시토신을 사용하는 것보다 안전하고 간편하다고 볼 수 있다. Objective: The management of premature rupture of the membranes in healthy pregnancy women at term without uterine activity is a matter of debate. A retrospective study comparing three management methods for patients at term with premature rupture of membranes was performed. Methods: This study was undertaken to compare the effectiveness of intravaginal prostaglandin E2 [PGE2] of term labor with oxytocin induction and expectant management in healthy 140 pregnant women with spontaneous rupture of membranes before the onset of labor from Jan. 1, 1996 to Dec. 31, 1997 at the Department of Obstetrics and Gynecology, Chonbuk National University, Medical School. Results: The time interval to delivery was shorter in prostaglandin and oxytocin groups versus control group with statistical significance[P$lt;0.05]. The incidence of maternal infection was lowest in prostaglandin group versus oxytocin and control groups with statistical significance[P$lt;0.05]. Overall cesarean section rate was low in prostaglandin group versus oxytocin and control groups without statistical significance. No adverse effects were observed in prostaglandin group. Conclusion: Vaginal PGE2 suppository can be used successfully to induce labor after premature rupture of membranes at term with greater ease of adminstration when compared with oxytocin.

      • KCI등재

        임신중기 양수천자술에 의한 산전유전질환 진단

        전정희,서성숙,황혜란,전성숙,박숙자 대한산부인과학회 1993 Obstetrics & Gynecology Science Vol.36 No.9

        1990년 8월부터 1993년 3월말까지 일신기독병원에서 실시한 125예의 양수검사상 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 35세이상의 연령군이 25.6%로 대조군에 비해 현저히 높았다. 2. 산전유전질환 진단목적으로 시행한 양수검사의 적응증은 모체혈청 태아단백이상, 이전 염색체이 상아 출산기왕력 및 고령산모의 빈도순이었다. 3. 양수천자의 성공률은 97.6%이고 배양성공율은 88.7%이며 합병증의 빈도는 0.8%이었다. 4. 비정상적인 핵형 발견률은 3.4%이고 이중 임신중절이 절대적으로 필요한 경우는 0.8%이었다. One hundred twenty five3 women were attending the antenatal clinic of Il Sin Christian Hospital had a midtrimester amniocentesis between August 1990 and March 1993. The result were analized in reference to maternal age, indication of amnocentesis, sucess rate and pregnancy outcome. 25.6% were aged 35 and over significantly higher than overall 2.7% for this age group. The major indications was abnormal maternal serum alpha feto-protein 25.6%, previous chromosomal abnormality 22.4%, advanced maternal age 21.6% previous fetal anomaly 16.0%. The success rate of aspiration of amniotic fluid was 97.6%but culture rate of fetal cell case 88.7%. The abnormal karyotypes were found in 4cases(3.4%) that 3 cases of 9 inversion and 1 case of Truner syndrome. The complication rate of amniocentesis was 0.8% i.e. 1 spontaneous abortion 1 day after repeat aspiration. The pregnancy outcome was full-term delivery 87.7% premature delivery 1.3%, termination of pregnancy 5.5% and FDIU or spontaneous abortion 5.5%

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