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고온내성 연료용 알코올 효모균주 Saccharomyces cerevisiae KNU5377에서 HSF1 유전자의 변이주 구축
김일섭,윤혜선,최혜진,손호용,유춘발,김종국,진익렬,Kim Il-Sup,Yun Hae-Sun,Choi Hye-Jin,Sohn Ho-Yong,Yu Choon-Bal,Kim Jong-Guk,Jin Ing-Nyol Korean Society of Life Science 2006 생명과학회지 Vol.16 No.3
출아효모인 Sacharomyces cerevisiae S288C균주를 이용한 효모의 게놈이 완성된 후 S. cerevisiae는 다양한 연구 모델로 이용되어져 왔다. 현재까지 효모를 이용한 기능 유전체학 측면에서의 연구는 laboratory strainin인 S288C 균주 또는 그 유래의 균주들이다. 그러나 자연에서 분리된 효모 또는 산업적으로 이용되어지고 있는 S. cerevisiae의 유전학 측면에서의 연구는 낮은 포자형성률 및 형질전환률, 그리고 S288C 균주와의 게놈상의 상이성 때문에 거의 이루어지지 않고 있다. 여기서 우리 연구진은 자연에서 분리된 Saccharomyces cerevisiae KNU5377 균주를 이용하여 random spore analysis를 통해 MATa 및 $MAT{\alpha}$ 타입의 각각의 haploid cell을 분리 후 이미 보고된 KanMX module를 가지고 round PCR기법에 의한 short flanking homology 기법을 이용하여 전사조절인자인 HSF1 유전자가 치환된 변이주를 구축할 수 있었다. 덧붙여, 모든 유전자에 이 기법을 적용할 수는 없다는 것을 확인하였다. 앞으로 이 변이주를 통해 기능 유전체학적인 측면에서 이 유전자의 스트레스와의 관련성을 연구하고자 한다. HSF1 is the heat shock transcription factor in Saccharomyces cerevisiae. S. cerevisiae KNU5377 can ferment at high temperature such as $40^{\b{o}}C$. We have been the subjects of intense study because Hsf1p mediates gene expression not only to heat shock, but to a variety of cellular and environmental stress challenges. Basing these facts, we firstly tried to construct the hsf1 gene-deleted mutant. PCR-method for fast production of gene disruption cassette was introduced in a thermotolerant yeast S. cerevisiae KNU5377, which allowed the addition of short flanking homology region as short as 45 bp suffice to mediate homologous recombination to kanMX module. Such a cassette is composed of linking genomic DNA of target gene to the selectable marker kanMX4 that confers geneticin (G418) resistance in yeast. That module is extensively used for PCR-based gene replacement of target gene in the laboratory strains. We describe here the generation of hsf1 gene disruption construction using PCR product of selectable marker with primers that provide homology to the hsf1 gene following separation of haploid strain in wild type yeast S. cerevisiae KNU5377. Yeast deletion overview containing replace cassette module, deletion mutant construction and strain confirmation in this study used Saccharomyces Genome Deletion Project (http:://www-sequence.standard.edu/group/yeast_deletion_project). This mutant by genetic manipulation of wild type yeast KNU5377 strain will provide a good system for analyzing the research of the molecular biology underlying their physiology and metabolic process under fermentation and improvement of their fermentative properties.
Increased Antioxidative Activities against Oxidative Stress in Saccharomyces cerevisiae KNU5377
Il-Sup Kim(김일섭),Hae-Sun Yun(윤혜선),Ji Young Yang(양지영),Oh-Seok Lee(이오석),Heui-Dong Park(박희동),Ingnyol Jin(진익렬),Ho-Sung Yoon(윤호성) 한국생명과학회 2009 생명과학회지 Vol.19 No.4
산화적 스트레스는 정상적인 대사 과정뿐만 아니라 외부적인 환경에 노출 되었을 때 일어나는 것으로 잘 알려져 있다. 이러한 스트레스를 극복하기 위해 생물체들은 각자의 시스템에 맞게 다양한 항산화 시스템을 진화 발전시켜 왔다. Saccharomyces cerevisiae KNU5377 균주는 고온뿐만 아니라 다양한 스트레스에 대해 내성을 가짐을 확인하였다. 대부분의 스트레스는 궁극적으로는 산화적 스트레스로 귀결된다. 이러한 측면에서 본 연구는 KNU5377 균주가 어떠한 시스템에 의해서 다른 균주보다 스트레스 내성을 가지는지를 밝히기 위해 접근하였다. 수행된 연구결과에서 KNU5377 균주는 항산화 시스템과 밀접하게 관련된 단백질(superoxide dismutase, thioredoxin system, heat shock proteins)과 항산화 관련 물질(trehalose)을 과발현함을 확인하였다. 그러나 이러한 단백질들이 어떠한 조절 시스템에 의해서 균주 특이적인 발현 양상을 보이는지는 현재까지 확인되지 않고 있다. 본 연구는 KNU5377 균주 그 자체의 중요성과 함께 균주 내의 스트레스 내성과 관련된 유용한 유전자를 탐색하여 더욱 우수한 유전자원을 발굴하는데 기여 할 것으로 보인다. Oxidative stress is a consequence of an imbalance of the defense system against cellular damage generated by reactive oxygen species (ROSs) such as superoxide anions (menadione; MD). Most organisms have evolved a variety of defense systems to protect cells from adverse conditions. In order to evaluate stress tolerance against oxidative stress generating MD, comparative analyses of antioxidant capacity, or free radical scavenger ability, were performed between S. cerevisiae KNU5377 (KNU5377) and three wild-type S. cerevisiae strains. In a medium containing 0.4 mM MD, the KNU5377 strain showed higher cell viability and antioxidant ability, and contained higher levels of trehalose, superoxide dismutase, thioredoxin system, glucose-6-phosphate dehydrogenase, and some heat shock proteins. The KNU5377 strain also produced a lower level of oxidative stress biomarker than the other three yeast strains. These results indicate that S. cerevisiae KNU5377 has a higher level of tolerance to oxidative stress due to the increased expression of cell rescue proteins and molecules, thus alleviating cellular damage more efficiently than other S. cerevisiae strains.
HBe항원 양성 산모에서 출생한 HBe항원 양성인 신생아의 추적관찰
박은숙,이해경,오창희,김성구,윤혜선,송원근,이영아,Park, Eun Sook,Lee, Hae Kyung,Oh, Chang Hee,Kim, Sung Ku,Yun, Hae Sun,Song, Won Keun,Lee, Young Ah 대한소아청소년과학회 2002 Clinical and Experimental Pediatrics (CEP) Vol.45 No.6
목 적 : HBsAg 양성이면서 HBeAg 양성인 산모에서 태어난 신생아에서 출생 직후 HBsAg은 음성이면서 HBeAg 양성이 어떤 의미가 있는 것인지에 대해 알아보았다. 방 법: 1996년 12월부터 1999년 3월까지 HBsAg과 HBeAg이 모두 양성인 산모로부터 출생한 신생아 중에서 HBsAg 음성이면서 HBeAg 양성인 신생아 22명을 대상으로 추적 관찰하였다. 결 과 : 1) 분만 산모의 총 수 4,338명 중 HBsAg 양성은 4.9%(213/4338), HBsAg 양성인 산모에서 HBeAg을 검사한 183례 중 HBeAg 양성은 41.5%(76/183)이었다. 2) HBeAg 양성인 산모에서 출생한 신생아에서 HBeAg 검사를 시행 받은 49례에서 HBsAg 음성이고 HBeAg 양성인 신생아는 36례로 73.5%이었다. 이중 추적관찰이 가능했던 22례에서 태반을 통해 전달된 HBeAg이 2개월 내에 소실된 경우가 7례(31.3%)로 가장 많았으며 90%이상이 12개월 내에 소실되었으며 결국 22례 모두에서 소실되는 소견을 보였다. 단 1례에서 HBeAg은 소실되었으나 6개월에 HBsAg이 양성이었다. 결 론: HBeAg이 양성인 간염 보균산모에서 신생아의 HBeAg은 감염이라기 보다는 태반을 통해 전달되는 산모의 HBeAg으로 일시적인 현상이며 임상적인 문제없이 소실되는 것으로 사료된다. Purpose : The objectives of this study are to evaluate the significance of HBeAg positivity in infants born to HBeAg and HBsAg positive mothers. Methods : The HBeAg status of 22 HBeAg positive, HBsAg negative infants born to HBeAg and HBsAg positive mothers from December 1996 to March 1999 were evaluated by enzyme immunoassay. Results : The number of HBsAg positive carrier mothers was 213(4.9%) out of 4,338 pregnant women. HBeAg was positive in 76(41.5%) out of 183 HBsAg positive mothers. Only 49 infants born to 76 HBeAg positive mothers could be evaluated; 36 infants were HBeAg positive and HBsAg negative. Laboratory follow up was possible in 22 infants. HBeAg disappeared in 7 cases within two months and in 20 cases within 12 months(over 90%). Ultimately, twenty-two babies who were HBsAg-negative and HBeAg-positive became negative for HBeAg, however, one showed HBsAg in follow up of 6 months of age. Conclusion : HBeAg positivity in infants born to HBeAg positive mothers may result from the maternofetal transmission and this HBeAg eventually disappeared without clinical significance.
소아의 직장에서 발생된 단일 선종성용종(isolated adenomatous polyp) 1례 -세관융모성 선종(tubulovillous adenoma)-
김제우,송준영,이해경,윤혜선,양익,심정원,정기섭,김호근,Kim, Je-Woo,Song, Jun-Young,Lee, Hae-Kyoung,Yun, He-Sun,Yang, Ik,Shim, Jung-Weon,Chung, Ki-Sup,Kim, Ho-Keon 대한소아소화기영양학회 1999 Pediatric gastroenterology, hepatology & nutrition Vol.2 No.2
Isolated rectal adenomatous polyp without genetic background is rarely found in children. A 4-year and 5 month-old girl was admitted for intermittent bloody stools lasting 4 months. A $1.5{\times}1.2\;cm$ sized rectal polyp was found by air contrast barium enema. Endoscopic polypectomy was performed without complications. In histopathologic examination, it was found to be a tubulovillous adenoma. Typical radiologic, colonoscopic, and pathological pictures are presented.
장중첩증의 임상양상을 보였던 영아의 중장 염전증(Midgut volvulus) 1례 -복부 초음파검사를 이용한 진단-
이해경,김제우,오필수,이영아,최하주,윤혜선,양익,이경원,이재정,Lee, Hae-Kyoung,Kim, Je-Woo,Oh, Phil-Soo,Lee, Young-Ah,Choi, Ha-Joo,Yun, Hea-Sun,Yang, Ik,Lee, Kyung-Won,Lee, Jae-Jung 대한소아소화기영양학회 1998 Pediatric gastroenterology, hepatology & nutrition Vol.1 No.1
Although midgut volvulus is clinically characterized by bilous vomiting and abdominal distention, plain abdominal X-ray is usually non-specific and therefore it can be misdiagnosed to other diseases. Upper gastrointestinal contrast study and computed tomography have been used as a routine diagnostic tool but it takes cost and time. Abdominal ultrasonography is a relatively good alternatives in diagnosing midgut volvulus and it relatively saves cost and time. But case presentation of midgut volvulus diagnosed with abdominal ultrasonography are rarely found in literature. We experienced a 6 month old girl who had come to our hospital with bilous vomiting and was diagnosed as midgut volvulus with ultrasonography. Thus we report this case with the presentation of typical ultrasonographic findings of midgut volvulus.