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The M142T Mutation Causes B3 Phenotype: Three Cases and an in vitro Expression Study
조덕,신동준,Mark Harris Yazer,임춘화,허영문,기승정,김수현,신명근,신종희,서순팔,양동욱 대한진단검사의학회 2010 Annals of Laboratory Medicine Vol.30 No.1
The B3 phenotype is the most common B subtype in Korea. The B305 allele (425 T>C, M142T) was first reported in 2 Chinese individuals; however, it has not yet been reported in the Koreans, and the impact of the M142T mutation on the expression of the B3 phenotype has also not been studied. To resolve an ABO discrepancy between a group O neonate and her group O father and A1B3 mother, blood samples from these individuals and other family members were referred to our laboratory for ABO gene analysis. The B305 allele was discovered in the neonate (B305/O01), her mother (A102/B305), and her maternal aunt (B305/O02), while her father was typed as O01/O02. Transient transfection experiments were performed in HeLa cells using the B305 allele synthesized by site-directed mutagenesis; flow cytometric analysis revealed that this transfect expressed 35.5% of the total B antigen produced by the B101 allele transfect. For comparison, Bx01 allele transfects were also created, and they expressed 11.4% of the total B antigen expressed on the surface of B101 transfects. These experiments demonstrate that the M142T (425 T>C) mutation is responsible for the B subtype phenotype produced by the B305 allele. (Korean J Lab Med 2010;30:65-9)
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조덕,최경란,전미정,김갑숙,서진영,신명근,김수현,기승정,서순팔,양동욱 대한진단검사의학회 2003 Annals of Laboratory Medicine Vol.23 No.6
배경 : 약-D형은 D 항원이 양적으로만 감소된 경우이지만, 부분-D형은 질적인 결손이 동반되므로 혈청에 항-D를 갖거나, 일부단클론성 항체에는 반응하지 않는다. 따라서, 단클론성 항-D 시약으로 헌혈자 RhD 검사를 시행하는 대부분의 적십자혈액원에서는이를 주의한다. 본 연구에서는 부분-D형 14예를 대상으로 4종류의 단클론성 항-D 시약을 사용하여 RhD 혈액형 검사 및 약-D검사의 반응 양상을 분석하였다.방법 : 2002년 10월부터 2003년 4월까지 헌혈자 201,847명의 검체를 대상으로 D 항원 검사 (monoclonal type, Bioscot, UK)를 혈액형 자동분석기(PK-7200, Olympus, Japan)에서 효소법(bro-melin)을 이용하여 분석하였다. 이중 음성인 649건에 대하여 수작업에 의한 튜브법으로 4종류의 시약을 이용하여 Rh 혈액형 검사및 약-D 검사를 시행하였고, 시약 간에 다른 반응양상을 보인 14예는 6종류의 단클론 항-D가 함유된‘ID-partial RhD-typing'(Diamed, Switzerland)로 확진 검사를 실시하였다.결과 : 부분-D형의 아형은 단클론 항체에 의한 반응 양상에 따라 92.9% (13/14)가 DFR 유형이었고, 7.1% (1/14)는 아형 구분이 불가능한 유형이었다. 4종류의 상용화된 단클론성 항-D 시약을 이용한 RhD 검사에서 부분-D형 14예는 모두 반응이 없었으나,추가로 실시한 약-D 검사에서는 Dade Behring (USA)사의 항-D에는 100% (14/14)에서 음성, Ortho-clinical diagnostic (USA)사의 항-D에는 92.9% (13/14)는 trace-1+ 양성, Bioscot (UK)사의 항-D에는 100%에서 trace-3+ 양성, 그리고 녹십자(Korea)사의 항-D는 100%에서 1+~3+ 양성이었다.
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대량 검체에서 ABO 유전형 분석시 Real-time PCR법의 적용
조덕,송혜림,원은정,신동준,신민호,권소영,조남선,신명근,양동욱,권순석 대한수혈학회 2011 大韓輸血學會誌 Vol.22 No.2
Background: For large-scale population screening, the method of ABO genotyping needs to be simple, accurate and cost-effective. The real-time PCR method has been introduced and it is suitable for dealing with large numbers of specimens. In this study, we examined the ABO genotyping of 1,700 residents of Jeollanam-do for an epidemiologic study by applying the real-time PCR method. Methods: Genomic DNA was extracted from the peripheral blood samples of 1,700 residents of Jeollanam-do between July 2004 and January 2006 and these samples were stored at −70oC. The ABO genotype in all the samples was determined by four-color real-time PCR using displacing probes and three cases that had an atypical real time PCR pattern were confirmed by direct sequencing and PCR-based cloning of exons 6&7 of the ABO gene. Results: The genotyping results of 1,700 samples included O/O (25.6%), A/A (9.1%), A/O (29.1%), B/B (4.5%),B/O (19.8%) and A/B (11.9%), and the allele frequencies of O, A and B were 50.1%, 29.5% and 20.4%,respectively. The frequency of the O allele was lower in the residents of Jeollanam-do than that previously reported for the residents of Kangwon-do (P=0.014), while the frequency of the A allele was higher in the residents of Jeollanam-do than that previously reported for the residents of Kangwon-do (P=0.003). The three cases with atypical results were revealed to be B101/O24, Bvar(296C>T)/O01 and B101/Ovar(801G>T). It takes 6 days to perform ABO genotyping on 1,700 samples by a calculation per test. Conclusion: ABO genotyping by real-time PCR using displacing probes can be useful for mass screening for ABO genotyping. In Korea, the frequency of the ABO allele was significantly different among different regions.
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K562 세포주와 IL-2를 이용하여 말초혈액 단핵구로부터 자연살세포의 선택적 증폭
조덕,신시원,박정선,강현규,김상기,Nguyen Pham,TNZhu XW,신명근,서순팔,양동욱,남종희,김영진,이제중 대한혈액학회 2006 Blood Research Vol.41 No.1
배경: NK 세포를 이용한 면역치료를 위해서 사람의 말초혈액 단핵구로부터 NK 세포를 증폭시키려는 많은 연구가 있었다. 저자들은 말초혈액 NK 세포를 IL-2와 K562 세포주를 활용하여 선택적 증폭, 증폭된 NK 세포의 활성화 및 억제성 수용체의 발현 양상, 그리고 이들 NK 세포의 세포독 성능을 평가해 보았다.방법: 정상 성인 7명의 말초혈액 단핵구를 Cellgro SCGM 배지에 IL-2 (500IU/mL)와 feeder cell로 K562 세포주를 사용하여 14일간 배양을 하였고, NK 세포의 활성화 및 억제성 수용체를 분석하기 위해 배양을 하기 전의 NK 세포와 IL-2 단독배양법과 K562와 IL-2를 함께 사용한 배양법으로 72시간 배양한 NK 세포의 활성화 및 억제성 수용체를 분석하였다. 세포 독성능 평가는 증폭 전과 7일간 증폭된 NK 세포를 이용하여 K562 세포주를 표적세포로 하여 유세포를 활용한 독성 검사로 실시하였다. 결과: NK 세포는 7일간 배양 후 4.5배(범위 2.5~10) 증폭되었으며, CD3-CD56+ 세포는 56.5%를 보였다. IL-2 단독 혹은 IL-2와 K562를 함께 사용한 배양법에 의한 NK 세포의 수용체 중 CD158b (mean florescence intensity, MFI), CD158e1/e2 (MFI), NKp44 (MFI) 및 NKp46 (%)는 그 발현이 증가하였고, NKp30 (%), CD16 (MFI) 및 2B4 (MFI)는 그 발현이 감소하였다. 세포독 성능 평가에서 비 증폭된 NK 세포는 표적세포인 K562 세포주와 1:1 및 5:1에서 각각 9.0%와 27.6%를 살생했으며, 7일간 증폭된 NK 세포는 표적세포를 각각 36.9%와 57.2%를 살생했다.
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위혈소판감소증에서 교반(vortex)에 의한 혈소판 수 교정
조덕,오봉준,김인환,정충현,양동욱 대한진단검사의학회 2003 Annals of Laboratory Medicine Vol.23 No.3
배경 : 혈소판 응집은 자동혈구계산기에서 혈소판의 수치를 실제 값보다 낮게 측정되게 하는 가장 흔한 원인이다. 따라서, 이를교정하기 위해 가장 흔히 사용하는 방법은 다른 항응고제를 첨가한 튜브에 재 채혈하여 검사하는 법이다. 하지만, 이러한 방법은환자에게 다시 채혈해야하며, 결과보고가 지연되는 단점이 있다.
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Expansion and Activation of Natural Killer Cells for Cancer Immunotherapy
조덕,Dario Campana 대한진단검사의학회 2009 Annals of Laboratory Medicine Vol.29 No.2
Natural killer (NK) cells can kill a wide range of cancer cells and are a promising tool for cell therapy of cancer. NK cells cytotoxicity is regulated by a balance between stimulatory and inhibitory signals. Interleukin-2 is known to increase NK cell cytotoxicity. Although many cytokines have been studied in efforts to induce durable NK cell expansions, most reports indicate a rather modest effect and the requirement for additional stimuli. We found that contact with the K562 myeloid leukemia cell line, genetically modified to express a membrane-bound form of interleukin-15 and the ligand for the costimulatory molecule 4-1BB, induced vigorous expansion of NK cells from peripheral blood. Based on these findings, we developed a method for large-scale clinical-grade expansion of NK cells. This method is currently used to expand allogeneic NK cells for infusion in patients with leukemia and solid tumors. We here summarize methods for expansion and activation of NK cells from human peripheral blood mononuclear cells as well as clinical-scale methods to produce NK cells for immunotherapy under Current Good Manufacturing Practices (cGMP) conditions.
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이동원체성 염색체 이상 dic(9;12)와 8번 염색체 삼체성을 동반한 급성림프구성백혈병 1예
조덕,양성진,이제중,김형준,양동욱 대한진단검사의학회 2002 Annals of Laboratory Medicine Vol.22 No.4
저자들은 현기증, 운동시 호흡곤란를 주소로 내원한 16세의 젊은 성인 남자의 골수검사에서 형태학적으로 ALL-L1, 면역표지자검사에서 precursor B-ALL의 특징을 보이고, 염색체 검사에서AL에 양호한 예후를 나타내는 d ic(9;12)와 부가적인 염색체이상인 +8을 핵형분석 및 FISH로 확인하였기에 보고하는 바이다.
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