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      • KCI등재

        K562 세포주와 IL-2를 이용하여 말초혈액 단핵구로부터 자연살세포의 선택적 증폭

        조덕,신시원,박정선,강현규,김상기,Nguyen Pham,TNZhu XW,신명근,서순팔,양동욱,남종희,김영진,이제중 대한혈액학회 2006 Blood Research Vol.41 No.1

        배경: NK 세포를 이용한 면역치료를 위해서 사람의 말초혈액 단핵구로부터 NK 세포를 증폭시키려는 많은 연구가 있었다. 저자들은 말초혈액 NK 세포를 IL-2와 K562 세포주를 활용하여 선택적 증폭, 증폭된 NK 세포의 활성화 및 억제성 수용체의 발현 양상, 그리고 이들 NK 세포의 세포독 성능을 평가해 보았다.방법: 정상 성인 7명의 말초혈액 단핵구를 Cellgro SCGM 배지에 IL-2 (500IU/mL)와 feeder cell로 K562 세포주를 사용하여 14일간 배양을 하였고, NK 세포의 활성화 및 억제성 수용체를 분석하기 위해 배양을 하기 전의 NK 세포와 IL-2 단독배양법과 K562와 IL-2를 함께 사용한 배양법으로 72시간 배양한 NK 세포의 활성화 및 억제성 수용체를 분석하였다. 세포 독성능 평가는 증폭 전과 7일간 증폭된 NK 세포를 이용하여 K562 세포주를 표적세포로 하여 유세포를 활용한 독성 검사로 실시하였다. 결과: NK 세포는 7일간 배양 후 4.5배(범위 2.5~10) 증폭되었으며, CD3-CD56+ 세포는 56.5%를 보였다. IL-2 단독 혹은 IL-2와 K562를 함께 사용한 배양법에 의한 NK 세포의 수용체 중 CD158b (mean florescence intensity, MFI), CD158e1/e2 (MFI), NKp44 (MFI) 및 NKp46 (%)는 그 발현이 증가하였고, NKp30 (%), CD16 (MFI) 및 2B4 (MFI)는 그 발현이 감소하였다. 세포독 성능 평가에서 비 증폭된 NK 세포는 표적세포인 K562 세포주와 1:1 및 5:1에서 각각 9.0%와 27.6%를 살생했으며, 7일간 증폭된 NK 세포는 표적세포를 각각 36.9%와 57.2%를 살생했다.

      • KCI등재

        다발성골수종 세포주로 부가된 단구-유래 수지상세포를 이용한 골수종 세포주-특이 세포독성 T 림프구의 유도

        박명숙,박정선,강현규,김상기,원종호,최보화,신시원,주효미,김춘희,니엔판탄냔,조덕,남종희,김영진,김여경,양덕환,정익주,김형준,이제중 대한혈액학회 2006 Blood Research Vol.41 No.3

        배경: 다발성골수종에서 수지상세포를 이용한 세포면역치료의 종양항원으로 유전형 단백질이 널리 이용되어 왔으나, 유전형-특이 면역반응에 대한 임상 효과는 제한적이었다. 따라서 이를 대체할 수 있는 다른 종양항원에 대한 연구가 필수적이다. 저자들은 다발성골수종 세포주 용해질로 부가된 단구-유래 수지상세포로 자극된 골수종 세포주-특이 세포독성 T 림프구를 이용한 세포면역치료의 가능성을 알아보고자 본 연구를 수행하였다. 방법: HLA-A0201+ 정상 공여자의 말초혈액으로부터 단구(CD14+)를 분리하여 GM-CSF와 IL-4로 6일간 배양하여 유도된 미성숙 수지상세포에 골수종 세포주 용해질(IM-9: HLA0201+, ARH-77: HLA0201+)을 부가하였고, TNF-α을 첨가하여 2일간 배양한 후 성숙 수지상세포를 얻었다. 성숙 수지상세포로 자가 CD3+ T 세포를 2차례 자극한 후 세포독성 T 림프구를 제조하였다. 결과: 골수종 세포주 용해질이 부가된 수지상세포는 CD40L-transfected J558 세포주의 자극에 의해서 IL- 12p70의 분비를 보였지만, 용해질이 부가되지 않은 수지상세포에 비하여 IL-12p70의 분비능은 낮았다. 골수종 세포주 용해질로 부가된 수지상세포로 자극되어 제조된 세포독성 T 림프구는 HLA-A2- 표적세포(RPMI- 8226)와 비교하여 자가 표적세포(HLA0201+: IM-9 및 ARH-77)에 대하여 강력한 세포독성능을 보였다. 골수종세포주 용해질이 부가된 수지상세포는 용해질이 부가되지 않은 수지상세포와 비교해서 자가 세포독성 T 림프구에 대하여 강력한 증식 능력을 보였다.

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