Bacillus amyloliquefaciens 액화형 $\alpha$-amylase 유전자의 클로닝 및 Bacillus subtilis에서의 발현

김사열,송방호,이인구,서정환,홍순덕 한국미생물 · 생명공학회 1986 한국미생물·생명공학회지 Vol.14 No.6

Bacillus amyloliquefaciens가 생성하는 액화형 $\alpha$-amylase의 구조유전자를 클로닝하기 위하여 이 균주 염색체의 2 - 5kb 획분을 분리하여 Mbo I으로 부분분해한 후 pUB110플라스미드의 BamHI 부위에 삽입하여 hybrid vector pSKS3 를 제작하였다. 이 재조합플라스미드를 세한수식결손 세포인 Bacillus subtilis ED 107에서 subcloning한 후 당화형 $\alpha$-amylase를 생성하는 Bacillus subtilis NA 64의 $\alpha$-amylase결실변이주 Bacills subtilis KM 107 주에서 형질 발현시켰다. 이때 형질전환빈도는 $10^{-5}$ - $10^{-7}$정도였으며 그중 약 50%가 $\alpha$-amylase 분비능이 있었으나 거의 대부분이 쉽게 실활되었다. 최종선별과정에서 $\alpha$-amylase를 가장 강하게 생성하는 형질전환주 Bacillus subtilis KM213으로부터 재 추출한 재조합플라스미드 pSKS3는 5.7kb 삽입된 단편이 BamH I/Mbo I 부위에 결합되어 있었다. pSKS3에 클로닝된 유전자에 의해 발현되는 $\alpha$-amylase 활성은 B. amyloliquefaciens 활성의 약 25%였으며, 이 pSKS3에 의해 발현되는 $\alpha$-amylase 단백은 B.amyloliquefaciens의 $\alpha$-amylase와 동일한 전기영동성을 나타내었음을 볼 때 pSKS3에 클로닝된 유전자는 B. amyloliquefaciens에서 유래함을 알 수 있었다. A 5200 basepair DNA fragment containing the Bacillus amyloliquefaciens amyE gene, encoding liquefying $\alpha$-amylase (1,4-$\alpha$-1)-glucan glucanohydrolase, EC 3.2.1.1), has been inserted into BamHI site of the pUB110 and the hybrid plasmid was designated as pSKS3. The pSKS3 was transformed into the Bacillus subtilis KM2l3 as a host which is a saccharifying $\alpha$-amylase deficient mutant of Bacillus subtilis NA64, and the plasmid in the transformed cell was expressed $\alpha$-amylase production and kanamycin resistance. The $\alpha$-amylase production of the transformed cell was reduced to one fifth of that of the donor strain. The Bacillus subtilis KM2l3 tarring pSKS3 indicated that the amyE gene product is a polypeptide which has the same electrophoretic mobility with that of the Bacillus amyloliquefaciens, but different from the saccharifying $\alpha$-amylase of Bacillus subtilis NA64. It means that the amyE gene of pSKS3 originales from the Bacillus amyloliquefaciens.

Bacillus amyloliquefaciens로부터 생산된 protease 특성 및 α-glucosidase 저해활성

이래현,양수진,황태영,정신교,홍주헌 한국식품저장유통학회 2015 한국식품저장유통학회지 Vol.22 No.5

In this study, three GRAS (generally recognized as safety) strain was isolated from Doenjang and Cheonggukjang and identified as a protease-producing microorganism, following the appearance of a clear zone around its colony when cultured on a medium containing skim milk. Based on an analysis of the nucleotide sequence of 16S ribosomal RNA, the strains wereas identified as Bacillus amyloliquefaciens and wereas therefore named Bacillus amyloliquefaciens CDD5, Bacillus amyloliquefaciens CPD4, and Bacillus amyloliquefaciens CGD3. Here, we analyzed the protease and α-glucosidase inhibitory activities of the three B. amyloliquefaciens strains. Among the isolated strains, B. amyloliquefaciens CGD3 exhibited the highest protease activity (9.21 U/mL, 24 hr). The protease activities of B. amyloliquefaciens CDD5 and B. amyloliquefaciens CPD4 reached 1.14 U/mL and 8.02 U/mL, respectively, at 48 hr. The proteases from the three B. amyloliquefaciens strains showed the highest activities within a pH range of 8.0–9.0 at 50°C, and casein was found to be the preferred substrate on evaluating enzyme activity in the substrate specificity assay. The B. amyloliquefaciens strains exhibited maximal growth when the nutrient broth medium had an initial pH within the range of 5.0–10.0, 6–9% sodium chloride (NaCl), and 5% glucose. B. amyloliquefaciens CDD5 exhibited a low α-glucosidase inhibition rate (5.32%), whereas B. amyloliquefaciens CPD4 and B. amyloliquefaciens CGD3 exhibited relatively higher inhibition rates of 96.89% and 97.55%, respectively.

Isolation and Characterization of Mannanase Producing Bacillus amyloliquefaciens CS47 from Horse Feces

Soo Jeong Cho(조수정) 한국생명과학회 2009 생명과학회지 Vol.19 No.12

진주산업대학교 농장에서 사육되고 있는 말에서 채취한 분변으로부터 mannanase 생성능이 우수한 균주를 분리하였으며 이를 CS47이라 명명하였다. 통성혐기성인 분리균 CS47의 최적 생육온도는 38℃였으며 20℃에서부터 50℃까지 다양한 온도범위에서도 생육이 가능한 것으로 확인되었다. BIOLOG를 이용하여 분리균 CS47의 생화학적 특징을 분석한 결과, 분리균은 Bacillus amyloliquefaciens 균주와 유사한 특성을 나타내었으며 DNA G+C함량 (44㏖%)도 B. amyloliquefaciens 균주의 범위(43.5-44.9)에 속하였다. 16S rDNA 염기서열을 분석한 결과에서도 분리균은 B. amyloliquefaciens FZB42 균주와 가장 높은 상동성을 나타내었으며 Bacillus속의 다른 균주들과는 93-98%의 상동성을 나타내었다. 그러나 분리균의 세포벽을 이루고 있는 주요 지방산[anteiso-15:0 (39.6%), 17:0 (7.6%), iso-15:0(37.8%)]은 Bacillus subtilis 균주와 유사한 특성을 나타내었다. 최종적으로 생화학적 특성과 16S rDNA 염기서열분석 결과를 근거로 하여 분리균 CS47은 Bacillus amyloliquefaciens CS47로 동정되었다. B. amyloliquefaciens CS47 균주가 분비하는 mannanase는 50℃, pH 6.0에서 가장 높은 활성을 보였다. The mannanase-producing bacteria, designated CS47, was isolated from the fresh feces of three horses (from a farm in Jinju National University). The isolate CS47 was facultatively anaerobic and grew at temperatures ranging from 20℃ to 50℃ with an optimal temperature of 38℃. The DNA G+C content of the isolate CS47 was 44 mlo%. The major fatty acids were anteiso-15:0 (39.6%), 17:0 (7.6%), and iso-15:0 (37.8%). The 16S rRNA gene sequence similarity between the isolate CS47 and other Bacillus strains varied from 93% to 98%. In the phylogenetic analysis based on these sequences, the isolate CS47 and Bacillus amyloliquefaciens clustered within a group and separated from other species of Bacillus. Based on the physiological and molecular properties, the isolate CS47 was classified within the genus Bacillus as Bacillus amyloliquefaciens CS47. The optimal pH and temperature for mannanase activity of B. amyloliquefaciens CS47 were pH 6.0 and 50℃, respectively. The thermal stability of mannanase from B. amyloliquefaciens CS47 is valuable when using this enzyme in industrial application.

Bacillus amyloliquefaciens SRCM 100731의 반려 동물용 프로바이오틱스 소재로서의 특성 규명 및 배양 조건 최적화

류명선,양희종,정수지,서지원,하광수,정성엽,정도연,Ryu, Myeong Seon,Yang, Hee-Jong,Jeong, Su-Ji,Seo, Ji Won,Ha, Gwangsu,Jeong, Seong-Yeop,Jeong, Do-Youn 한국미생물학회 2018 미생물학회지 Vol.54 No.4

본 연구는 전통 발효식품에서 반려동물의 사료 및 보조식품 등에 사용될 수 있도록 안전성 확보와 프로바이오틱스 활성 등 기능성을 갖춘Bacillus 속 균주를 선발하고자 하였다. 전국에서 수집한 전통 장류에서 약 300종의 분리주를 확보하였고, Bacillus cereus가 생성하는 구토와 설사 독소 유전자 6종, ${\beta}$형 용혈성, 발암 관련 효소 3종 등을 보유하지 않거나 생성하지 않는 4종의 균주를 선별하였다. 4종의 분리주를 대상으로 항생물질 유전자 보유 여부, 세포 표면 소수성, 항생제 감수성과 당 이용성 등을 분석하였고, 최종적으로 항생물질 생성 유전자 3종을 모두 보유하고, 혈전 용해 및 세포 표면 소수성이 가장 우수한 SRCM 100731을 선정하였다. 최종 선별된 SRCM 100731의 16S rRNA 염기서열 분석 결과 Bacillus amyloliquefaciens로 동정 되었으며, 펫 사료 및 식품 등 산업적 적용을 위하여 균체 성장 최적화를 수행하였다. SRCM 100731의 배지 성분 선별을 위하여 Plackett-Burman design (PBD)을 사용하였으며, 최적 성장을 위한 배지 성분으로는 molasses와 sodium chloride, potassium chloride가 예측되었다. PBD를 통해 선정된 배지 성분의 농도를 최적화하기 위하여 central composite design (CCD)을 사용하였으며, 실험 결과 7.0% molasses, 1.1% sodium chloride, 0.5% potassium chloride로 예측되었다. 이때 최대 균체량은 12.6625 g/L로 예측되었으며, 최종적으로 실험 모델의 예측값과 실 측정값이 $12.6625{\pm}0.0658g/L$로 오차 범위내의 결과를 나타내어 실험 모델의 신뢰성을 검증할 수 있었다. 이는 실험 모델에 의해 예측된 최적 배지 사용 시 최적화 이전 배지에서의 균체량($1.8273{\pm}0.0214g/L$) 대비 약7배로 균체량이 증가함을 확인할 수 있었다. 향후 B. amyloliquefaciens SRCM 100731의 제품 개발 등 후속 연구의 진행이 필요하나 본 연구를 통해 산업 적용이 가능한 프로바이오틱스 소재의 발굴 및 산업화 배양 조건이 확립 되었으므로 앞으로 성장하고 있는 반려동물 산업에 유용하게 활용 될 수 있을 것으로 기대된다. The aim of this study is to screen the strains of Bacillus spp. possessing safety, probiotic activity, and so on, which can be utilized as probiotic resource for using the feed and supplement food of companion animal. About 300 isolates were isolated from traditional Korean sauces, four isolates that did not have or produce the six kinds of B. cereus type vomiting and diarrhea toxin genes, ${\beta}$-hemolytic, and three kinds of carcinogenic enzymes were selected. Antibiotic gene retention, cell surface hydrophobicity, antibiotic sensitivity, and glucose utilization were analyzed for four isolates, and finally SRCM 100731 was selected. SRCM 100731 was named as Bacillus amyloliquefaciens SRCM 100731 16S rRNA sequencing analysis, and carried out optimization of cell growth for industrial applications such as pet food and feed. The effects of 14 different components on cell growth were investigated and three significant positive factors, molasses, sodium chloride, and potassium chloride were selected as the main factors based on a Plackett-Burman design. In order to find out optimal concentration on each constituent, we carried out central composite design. The predicted optimized concentrations were 7% molasses, 1.1% sodium chloride, 0.5% potassium chloride. Finally, an overall about 7-fold increase in dry cell weight yield ($12.6625{\pm}0.0658g/L$) was achieved using the optimized medium compared with the non-optimized medium ($1.8273{\pm}0.0214g/L$). This research is expected to be highly utilized in the growing pet industry by establishing optimal cultivation conditions for industrial application as well as screening Bacillus amyloliquefaciens SRCM 100731 as probiotic resource for companion animal.

길항세균 Bacillus amyloliquefaciens KBC1009를 이용한 고추 흰비단병의 생물학적 방제

강재곤,이영의,박정찬,정윤우,박창석,강훈석 경상대학교 농업생명과학연구원 2016 농업생명과학연구 Vol.50 No.4

고추를 비롯한 채소작물에 심각한 피해를 야기하는 흰비단병의 생물학적 방제제를 개발하기 위하여 시설재배 토양에서 분리한 세균 중에서 흰비단병균인 Sclerotium rolfsii의 균사생장을 강하게 억제하는 균주를 선발하였다. 선발된 균주는 형태적, 생리적 분석과 16S rRNA 분석결과를 바탕으로 Bacillus amyloliquefaciens로 동정하였고 최종 선발균주를 Bacillus amyloliquefaciens KBC1009로 명명하였 다. Bacillus amyloliquefaciens KBC1009의 배양특성을 조사한 결과 배양온도 30℃, pH 7의 조건에서 72시간동안 배양했을 때 배양 효율이 가장 우수하였으며, 배양에 적정한 영양원은 탄소원 glucose, 질 소원 yeast extract를 사용했을 때 가장 높은 균수를 나타내었다. 포장에서 고추 흰비단병에 대한 Bacillus amyloliquefaciens KBC1009의 방제효과를 검정하기 위해 흰비단병원균을 토양에 접종하고 B. amyloliquefaciens KBC1009 배양액(5×108 cfu/ml)을 500배로 희석하여 10일 간격으로 3회 관주 처리한 결과 무처리대비 66.7%의 방제효과를 나타내었다. Sclerotium rolfsii is a well known broad host range soil borne plant pathogenic fungus and caused serious damage to various vegetable crops. To develop an effective biological control agent for S. rolfsii, an isolate which showed strong inhibitory effect on the mycelial growth of S. rolfsii was selected among the antagonistic bacterial isolates collected from vinyl-house soil. The bacterial isolate was identified as Bacillus amyloliquefaciens KBC1009 based on the morphological, physiological characteristics and by 16S rRNA sequence analysis. The growth conditions for B. amyloliquefaciens KBC1009 were optimized in LB media(pH7) by culturing at 30℃ for 72 hrs. Glucose and yeast extract were confirmed as the best carbon and nitrogen sources, respectively. In order to test the inhibitory effect of B. amyloliquefaciens KBC1009 to stem rot of pepper, green house experiment was conducted. Drench of 1/500 diluted bacterial suspension of B. amyloliquefaciens KBC1009(5×108 cfu/ml) to each pepper plant 3 times with 10 days interval showed 66.7% control effectiveness. These results suggest that B. amyloliquefaciens KBC1009 is one of promising biocontrol agent to control stem rot caused by Sclerotium rolfsii.

Bacillus amyloliquefaciens 함유 비료 처리에 의한 상추의 생육 증대 효과

김영선(Young-Sun Kim),조성현(Sung-Hyun Cho),이훈수(Hoonsoo Lee),이긍주(Geung-Joo Lee) 유기성자원학회 2021 유기물자원화 Vol.29 No.4

본 연구는 친환경농업에서 미생물비료(MF)의 작물 생육 증진 여부를 평가하기 위해 Bacillus amyloliquefaciens가 함유된 미생물비료의 처리, 유기질비료(OF)의 혼용 처리 및 미생물비료 제형별 처리에 따른 상추의 생육 특성을 조사하였다. 미생물비료의 유효 균주인 B. amyloliquefaciens는 전분 분해 효소와 단백질 분해 효소의 활성을 나타내었다. 미생물비료를 유기물의 공급없이 상추에 처리하는 경우 작물의 생육은 무처리구와 통계적으로 유의적인 차이를 나타내지 않았다. 대조구와 비교할 때, 유기질비료와 미생물비료를 함께 처리한 MOF2 처리구(2,500 kg OF/ha + 50 kg MF/ha)의 건물중이 약 30% 증가하였다. 미생물비료 제형별 상추 생육 조사 결과, 수용제는 대조구와 통계적으로 유의적인 차이를 나타내지 않았으나 수화제 처리구의 건물중은 약 43% 증대되었다. 미생물비료의 제형별 작물 생육 비교 시 수용제보다 수화제 처리구에서 37% 정도 증가하여 수화제 처리 상추의 생육과 생산량이 증대되었다. 상기 결과들을 종합할 때, 미생물비료를 유기질비료와 혼용하는 경우 상추의 생육과 생산량이 증대되며, 수화제의 처리 시 작물의 생육 개선 효과가 나타남을 알 수 있었다. This study was conducted to evaluate effects of microbial fertilizer (MF) containing Bacillus amyloliquefaciens on the growth in the lettuce by treating MF without and with organic fertilizer (OF), or by its formulation types, and to investigate its application in the eco-friendly agriculture. B. amyloliquefaciens, active microbe of MF, had activities of amylase and protease. Applied only MF without OF, MF treatments were not significantly different with non-fertilizer (NF). As compared to control, dry weight of MOF2 treatment (2,500 kg OF/ha + 50 kg MF/ha) was increased by about 30%. As applied with wettable powder type (WP) and soluble powder type (SP) of MF, the dry weight of WP was increased by 43% than that of control, but SP not significantly different. In the comparison with two MF formulation, dry weight of WP was increased by about 37% than that of SP. These results indicated that an application of MF improved the growth of lettuce by prompting a mineralization of OF, and that the formulation type of MF was better WP than SP.

전통장류에서 Biogenic Amines 분해 능력을 가지는 Bacillus subtilis 및 Bacillus amyloliquefaciens 균주의 분리

김용상,조성호,정도연,엄태붕,Kim, Yong-Sang,Cho, Sung-Ho,Jeong, Do-Yeon,Uhm, Tai-Boong 한국미생물학회 2012 미생물학회지 Vol.48 No.3

전통 장류 제품 내 유해한 biogenic amines 양을 감소하기 위해, 83종의 전통 장류에서 biogenic amines을 분해할 수 있는 5종의 균주들을 분리하였다. 이들 균주들을 histamine, tyramine, putrescine, cadaverine이 각각 5.3% 함유된 삶은 콩에 접종하여 10일 간 발효시킨 결과 biogenic amines 함량을 27-92% 수준으로 감소시켰다. 선발한 균주들의 형태 및 생화학적 특성, 16S rRNA 유전자 서열 해독 결과 5종의 균주들은 Bacillus subtilis 또는 B. amyloliquefaciens에 속했다. 이 선발 균주들을 사용함으로서 biogenic amines 수준을 제어하기 힘든 전통 장류의 제조에 이 선발 균주들의 사용은 이들 함량을 줄일 수 있는 효과적 방안이 될 수 있다. In order to reduce harmful biogenic amines in the traditionally fermented soybean products, five isolates with biogenic amines-degrading property were obtained from 83 traditionally fermented soybean products. The strains were found to reduce biogenic amines including histamine, tyramine, putrescine, and cadaverine by 27 to 92% in the cooked soybean containing 5.3% of each biogenic amine over 10 days of incubation. The morphological and biochemical tests and the phylogenetic relationships based on 16S rRNA gene sequences indicated that the five isolates were most closely related to Bacillus subtilis or B. amyloliquefaciens. The use of selected strains would be a potential control measure in manufacturing traditionally fermented soybean products that are difficult to control biogenic amine levels.

Effect of Bacillus amyloliquefaciens-based Direct-fed Microbial on Performance, Nutrient Utilization, Intestinal Morphology and Cecal Microflora in Broiler Chickens

Xinjian Lei,Xiangshu Piao,Yingjun Ru,Hongyu Zhang,Alexandre Peron,Huifang Zhang 아세아·태평양축산학회 2015 Animal Bioscience Vol.28 No.2

The present study was conducted to evaluate the effect of the dietary supplementation of Bacillus amyloliquefaciens-based direct-fed microbial (DFM) on growth performance, nutrient utilization, intestinal morphology and cecal microflora in broiler chickens. A total of two hundred and eighty eight 1-d-old Arbor Acres male broilers were randomly allocated to one of four experimental treatments in a completely randomized design. Each treatment was fed to eight replicate cages, with nine birds per cage. Dietary treatments were composed of an antibiotic-free basal diet (control), and the basal diet supplemented with either 15 mg/kg of virginiamycin as antibiotic growth promoter (AGP), 30 mg/kg of Bacillus amyloliquefaciens-based DFM (DFM 30) or 60 mg/kg of Bacillus amyloliquefaciens-based DFM (DFM 60). Experimental diets were fed in two phases: starter (d 1 to 21) and finisher (d 22 to 42). Growth performance, nutrient utilization, morphological parameters of the small intestine and cecal microbial populations were measured at the end of the starter (d 21) and finisher (d 42) phases. During the starter phase, DFM and virginiamycin supplementation improved the feed conversion ratio (FCR; p<0.01) compared with the control group. For the finisher phase and the overall experiment (d 1 to 42) broilers fed diets with the DFM had better body weight gain (BWG) and FCR than that of control (p<0.05). Supplementation of virginiamycin and DFM significantly increased the total tract apparent digestibility of crude protein (CP), dry matter (DM) and gross energy during both starter and finisher phases (p<0.05) compared with the control group. On d 21, villus height, crypt depth and villus height to crypt depth ratio of duodenum, jejunum, and ileum were significantly increased for the birds fed with the DFM diets as compared with the control group (p<0.05). The DFM 30, DFM 60, and AGP groups decreased the Escherichia coli population in cecum at d 21 and d 42 compared with control group (p<0.01). In addition, the population of Lactobacillus was increased in DFM 30 and DFM 60 groups as compared with control and AGP groups (p<0.01). It can be concluded that Bacillus amyloliquefaciens-based DFM could be an alternative to the use of AGPs in broilers diets based on plant protein.

Bioactive Compounds / Food Microbiology : Properties of Antimicrobial Substances Produced by Bacillus amyloliquefaciens CJW15 and Bacillus amyloliquefaciens SSD8

( Xiaoming Liu ),( Jae Min Shim ),( Zhuang Yao ),( Jae Yong Lee ),( Kang Wook Lee ),( Hyun Jin Kim ),( Kyung Sik Ham ),( Jeong Hwan Kim ) 한국미생물생명공학회(구 한국산업미생물학회) 2016 한국미생물·생명공학회지 Vol.44 No.1

청국장에서 강력한 항균력을 지닌 2개의 Bacillus 균주들인 CJW15와 SSD8이 분리되었다. 16S rRNA와 recA 유전자들 염기서열 결정에 의해 두가지 균주 모두 B. amyloliquefaciens로 동정되었다. CJW15는 B. cereus ATCC14579, Listeria monocytogenes ATCC19111, Lactococcus lactis ATCC11454 들의 증식을 강력히 억제하며 SSD8은 B. cereus ATCC14579와 Enterococcus faecium ATCC19953 증식을 억제하였다. 두 균주들의 항균력은 100oC, 15분 처리에도 감소하지 않았고 산성인 pH 3과 알칼리인pH 12에서도 안정하였다. 트립신, 펩신, 프로테아제 K, 프로테아제 효소처리에 의해 CJW15 항균력은 변화가 없었지만 SSD8 항균력은 절반으로 감소하였다. 두 균주 공히 surfactin, fengycin, iturin, iturinA와 같은 lipopeptide 생합성 유전자들을 지니고 있고 subtilin과 같은 박테리오신 유전자들도 지니고 있다. 또 두 균주들은 혈전용해능을 지니고 있다. Two Bacillus strains, CJW15 and SSD8, with strong antibacterial activities were isolated from cheonggukjang. Both were identified as B. amyloliquefaciens strains after gene sequencing of rRNA and recA. CJW15 strongly inhibited the growth of B. cereus (ATCC14579), Listeria monocytogenes (ATCC19111), and Lactococcus lactis (ATCC11454). In comparison, SSD8 inhibited the growth of B. cereus (ATCC14579) and Enterococcus faecium (ATCC19953). The antibacterial activities of the two strains were not affected when exposed to a temperature of 100°C for 15 min and were quite stable in acidic (pH 3) and alkaline (pH 12) pH conditions. Enzymatic treatments (trypsin, pepsin, proteinase K, and protease) had no effect on the activity of CJW15, but reduced the activity of SSD8 by half. Both isolates possess genes involved in the synthesis of lipopeptides (e.g. surfactin, fengycin, iturin, and iturin A), and genes encoding subtilin, a bacteriocin. Moreover, both isolates have fibrinolytic activities as well.

돼지위축성비염과 가금티푸스 병원균을 저해하는 Bacillus amyloliquefaciens TK3의 분리 및 특성 조사

정택경,송홍규,Jung, Taeck-Kyung,Song, Hong-Gyu 한국미생물학회 2015 미생물학회지 Vol.51 No.2

Bordetella bronchiseptica에 의한 돼지위축성비염과 Salmonella gallinarum에 의한 가금티푸스 방지 방법을 찾기 위해서 두 세균병원체에 항균활성을 갖는 세균 균주를 축산농가의 여러 시료로부터 분리하였다. 분리균주 372개 중 TK3 균주가 두 병원체에 대해 가장 우수한 항균활성을 나타내었으며, 16S rRNA 염기서열 분석 결과 Bacillus amyloliquefaciens로 동정되었다. B. amyloliquefaciens TK3는 siderophore, rhamnolipid와 antimicrobial peptide 같은 항균물질을 분비하여 두 병원체의 생장을 저해할 수 있었다. TK3 균주는 Chrome azurol S 한천 평판에서 siderophore 생성반지름이 14일 배양 후 0.53 cm이었으며, King's B 배지에서 1.06 mmol/ml의 siderophore를 생성하였다. 또한 82.4 mg/L의 rhamnolipid를 분비하였으며, LB배지에 $30{\mu}l/ml$ 농도의 추출된 antimicrobial peptide 첨가 시 두 병원체의 생장을 완전히 저해하였다. For prevention of atrophic rhinitis of swine by Bordetella bronchiseptica and fowl typhoid by Salmonella gallinarum, bacterial strains showing antimicrobial activity against those pathogenic bacteria were isolated from various samples collected at animal farms. Among 372 bacterial isolates strain TK3 showed the highest antibacterial activity against both pathogens, and was identified as Bacillus amyloliquefaciens by 16S rRNA gene sequence analysis. B. amyloliquefaciens TK3 could inhibit growth of both pathogens by secretion of antibacterial compounds such as siderophore, rhamnolipid and antimicrobial peptide. Production radius of siderophore on Chrome azurol S agar plate by strain TK3 was 0.53 cm after 14 days of incubation, and concentration of siderophore in King's B medium was 1.06 mmol/ml. It also secreted 82.4 mg/L of rhamnolipid, and antimicrobial peptide that completely inhibited growth of both pathogens at concentration of $30{\mu}l/ml$ in LB medium.