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      • 항산화제 DA-9601에 의한 백서 간섬유화 억제 효과

        재연,오태영,이기명,김도현,안병옥,김원배,김영배,유병무,함기백,김진홍,조성원 대한간학회 2002 Clinical and Molecular Hepatology(대한간학회지) Vol.8 No.4

        목적: 산화적 스트레스와 이에 따른 지질 과산화는 간섬유화의 중요한 기전이며, 항산화제는 이를 억제함으로써 간섬유화를 예방할 수 있다. DA- 9601은 쑥의 일종인 Artemisia asiatica의 추출물에서 합성한 약물로 항산화작용이 있는 것으로 알려져 있다. 본 연구는 항산화제인 DA-9601이 dime- thylnitrosamine (DMN)에 의한 간섬유화를 억 제하는지를 알아보고자 하였다. 대상과 방법: 숫 Sprague-Dawley계 백서를 10마리씩 4군으로 분류 하여 2군, 3군, 4군에는 DMN 10 mg/kg을 1주일에 - 445 - 3번씩 2주간 복강내로 주사하였고, 1군은 생리 식염수를 같은 방법으로 주사하였다. DMN 주사 1주전부터 DMN 주사기간 동안, 3군은 DA-9601 30 mg/kg, 4군은 DA-9601 100 mg/kg을 동시에 투여 하였다. 적출된 간조직의 파라핀 블록에서 H-E염색 과 collagen, α-smooth muscle actin (α-SMA), fibronectin에 대한 면역조직화학적 염색을 실시하였고, collagen 및 malondialdehyde (MDA)를 정량하였고, 간기능검사의 변화를 살펴 간섬유화에 대한 항산화제의 효과를 알아보았다. 또한, 간성상세포 (hepatic stellate cell, HSC)를 분리하여, in vitro상 에서 HSC 활성화에 대한 DA-9601의 효과를 측정하였다. 결과: 1) DA-9601은 DMN 주사에 의한 백서의 체중감소를 둔화시켰고(2군:245.5±7.5 g, 4 군:266.8±4.1 g, p<0.05), 간섬유화에 의한 간무게감소를 줄였으며(1군:15.2±1.8 g, 2군:7.7±1.9 g, 3 군:12.6±2.0 g, 4군:14.1±2.2 g, p<0.05), 간효소치 상승을 감소시켰다(ALT 2군 177.2±40.3 IU/L, 4군 96.0±21.6 IU/L, p<0.05; AST 2군 236.5±33.7 IU/L, 4군 108.8±23.2 IU/L, p<0.05). 2) DMN 주사에 의해 간문맥계의 섬유화, 간세포 염증괴사, 산화에 의한 심한 간세포 손상을 보였으나, DA-9601 투여는 DMN 주사에 의한 간섬유화, collagen의 증 가, 간 MDA의 증가를 감소시켰다. 3) DA-9601 투 여군에서 collagen I형과 III형, α-SMA, fibronectin 이 감소하였고, 간세포 염증이 약물 용량에 비례하여 감소하였으며, HSC에 대한 in vitro 실험에서도 유사한 양상을 보였다. 결론: DA-9601은 DMN에 의한 간섬유화를 효과적으로 억제하였다. 따라서 항 산화제는 간섬유화 및 간세포 염증반응을 줄일 수 있는 치료제로 고려할 수 있을 것으로 생각된다. Background/Aims : Oxidative stress is one of the important underlying mechanisms of hepatic fibrosis. DA-9601, the ethanol extracts of Artemisia asiatica, has been reported to possess strong antioxidative and cytoprotective actions. We tried to evaluate whether antioxidant can ameliorate dimethylnitrosamine (DMN)-induced hepatic fibrosis. Methods: Rat hepatic fibrosis was induced by intraperitoneal administrations of 10 mg DMN six times. Additionally, rats of one group were started daily with DA-9601 30 mg/kg containing diets and another group was fed a pellet diet containing DA-9601 100 mg/kg. The immunohistochemical studies for collagen, α-smooth muscle actin (α-SMA), and fibronectin, the measurements of hepatic malondialdehyde (MDA) and collagens, and the changes of liver function profiles were performed. Hepatic stellate cells (HSC) were isolated and in vitro effects of DA-9601 on HSC activations were measured. Results: DA-9601 significantly attenuated the loss of body weights (p<0.05), the reduction of liver wet weights (p<0.05), and the elevation of liver enzymes provoked by DMN administrations. DMN injections caused the severe fibrosis of portal tract, hepatic inflammation, and significant oxidative damages, but DA-9601 treatment significantly reduced the mean scores of hepatic fibrosis, the amounts of hepatic collagens, and hepatic MDA levels. The prominent decreases in the expressions of collagens type I & III, α-SMA, and fibronectin or hepatic inflammations were observed in DA-9601-treated groups dose-dependently and similar efficacy was also proven in in vitro HSC experiment. Conclusions: DA-9601 effectively protected rat liver tissues against the DMN-induced hepatic fibrosis. Antioxidant could be considered as a supplementary therapeutic for alleviating the hepatic fibrosis.(Korean J Hepatol 2002;8:436-447)

      • 항산화제 DA-9601에 의한 백서 간섬유화 억제 효과

        재연,오태영,이기명,김도현,안병옥,김원배,김영배,유병무,함기백,김진홍,조성원 대한간학회 2002 Clinical and Molecular Hepatology(대한간학회지) Vol.8 No.4

        Background/Aims : Oxidative stress is one of the important underlying mechanisms of hepatic fibrosis. DA-9601, the ethanol extracts of Artemisia asiatica, has been reported to possess strong antioxidative and cytoprotective actions. We tried to evaluate whether antioxidant can ameliorate dimethylnitrosamine (DMN)-induced hepatic fibrosis. Methods: Rat hepatic fibrosis was induced by intraperitoneal administrations of 10 mg DMN six times. Additionally, rats of one group were started daily with DA-9601 30 mg/kg containing diets and another group was fed a pellet diet containing DA-9601 100 mg/kg. The immunohistochemical studies for collagen, α-smooth muscle actin (α-SMA), and fibronectin, the measurements of hepatic malondialdehyde (MDA) and collagens, and the changes of liver function profiles were performed. Hepatic stellate cells (HSC) were isolated and in vitro effects of DA-9601 on HSC activations were measured. Results: DA-9601 significantly attenuated the loss of body weights (p<0.05), the reduction of liver wet weights (p<0.05), and the elevation of liver enzymes provoked by DMN administrations. DMN injections caused the severe fibrosis of portal tract, hepatic inflammation, and significant oxidative damages, but DA-9601 treatment significantly reduced the mean scores of hepatic fibrosis, the amounts of hepatic collagens, and hepatic MDA levels. The prominent decreases in the expressions of collagens type I & III, α-SMA, and fibronectin or hepatic inflammations were observed in DA-9601-treated groups dose-dependently and similar efficacy was also proven in in vitro HSC experiment. Conclusions: DA-9601 effectively protected rat liver tissues against the DMN-induced hepatic fibrosis. Antioxidant could be considered as a supplementary therapeutic for alleviating the hepatic fibrosis.(Korean J Hepatol 2002;8:436-447) 목적: 산화적 스트레스와 이에 따른 지질 과산화는 간섬유화의 중요한 기전이며, 항산화제는 이를 억제함으로써 간섬유화를 예방할 수 있다. DA- 9601은 쑥의 일종인 Artemisia asiatica의 추출물에서 합성한 약물로 항산화작용이 있는 것으로 알려져 있다. 본 연구는 항산화제인 DA-9601이 dime- thylnitrosamine (DMN)에 의한 간섬유화를 억제하는지를 알아보고자 하였다. 대상과 방법: 숫 Sprague-Dawley계 백서를 10마리씩 4군으로 분류하여 2군, 3군, 4군에는 DMN 10 mg/kg을 1주일에 3번씩 2주간 복강내로 주사하였고, 1군은 생리 식염수를 같은 방법으로 주사하였다. DMN 주사 1주전부터 DMN 주사기간 동안, 3군은 DA-9601 30 mg/kg, 4군은 DA-9601 100 mg/kg을 동시에 투여하였다. 적출된 간조직의 파라핀 블록에서 H-E염색과 collagen, α-smooth muscle actin (α-SMA), fibronectin에 대한 면역조직화학적 염색을 실시하였고, collagen 및 malondialdehyde (MDA)를 정량하였고, 간기능검사의 변화를 살펴 간섬유화에 대한 항산화제의 효과를 알아보았다. 또한, 간성상세포(hepatic stellate cell, HSC)를 분리하여, in vitro상에서 HSC 활성화에 대한 DA-9601의 효과를 측정하였다. 결과: 1) DA-9601은 DMN 주사에 의한 백서의 체중감소를 둔화시켰고(2군:245.5±7.5 g, 4군:266.8±4.1 g, p<0.05), 간섬유화에 의한 간무게감소를 줄였으며(1군:15.2±1.8 g, 2군:7.7±1.9 g, 3군:12.6±2.0 g, 4군:14.1±2.2 g, p<0.05), 간효소치 상승을 감소시켰다(ALT 2군 177.2±40.3 IU/L, 4군 96.0±21.6 IU/L, p<0.05; AST 2군 236.5±33.7 IU/L, 4군 108.8±23.2 IU/L, p<0.05). 2) DMN 주사에 의해 간문맥계의 섬유화, 간세포 염증괴사, 산화에 의한 심한 간세포 손상을 보였으나, DA-9601 투여는 DMN 주사에 의한 간섬유화, collagen의 증가, 간 MDA의 증가를 감소시켰다. 3) DA-9601 투여군에서 collagen I형과 III형, α-SMA, fibronectin이 감소하였고, 간세포 염증이 약물 용량에 비례하여 감소하였으며, HSC에 대한 in vitro 실험에서도 유사한 양상을 보였다. 결론: DA-9601은 DMN에 의한 간섬유화를 효과적으로 억제하였다. 따라서 항산화제는 간섬유화 및 간세포 염증반응을 줄일 수 있는 치료제로 고려할 수 있을 것으로 생각된다.색인단어 : DA-9601, 항산화제, Dimethylnitrosamine, 간섬유화

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