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성영림,최시영,임동수,Seong, Young-Rim,Choi, See-Young,Im, Dong-Soo 대한미생물학회 1997 Journal of Bacteriology and Virology Vol.27 No.2
C 형 간염 바이러스 (Hepatitis C Virus, HCV)는 두종류의 외피당단백질 $E1_{192-383}$ 및 $E2_{384-746}$를 갖고 있다. $E1_{192-383}$ 및 $E2_{384-740}$ 단백질은 glutathione S-transferae (GST) 융합단백질의 형태로 대장균에서 발현되지 않았으나, 이 단백질들의 C말단에 존재하는 소수성영역을 제거하였을 때 $GST-E1_{192-283}$ 융합단백질은 과량으로 가용성 형태로 발현되었고, $GST-E2_{384-649}$ 융합단백질은 비 가용성 형태로 발현되었다. 이 융합단백질들 각각은 HCV 양성환자의 혈청과 특이적으로 반응하였다. Thrombin으로 처리하여 얻은 정제된 $E1_{192-283}$ 단백질 및 융합형태의 $GST-E2_{384-649}$ 단백질 각각을 생쥐에 접종하였을 때 E1 및 E2 특이적인 항체가 생성되었다. 이 결과들은 $E1_{192-383}$ 및 $E2_{384-649}$ 융합단백질 C 말단에 존재하는 소수성영역이 이 단백질들의 발현량 및 가용성에 영향을 주며 $E1_{192-283}$ 단백질 영역내에 HCV 양성환자의 혈청과 특이적으로 반응하는 epitope (s)이 존재한다는 것을 제시해 주고 있다. The truncated $E1_{192-283}$ and $E2_{384-649}$ genes of hepatitis C virus (HCV) linked to the gene for glutathione S-transferase (GST) were constructed and their expressions were analyzed. The $GST-E1_{192-283}$ fusion gene overexpressed the fusion protein in E. coli as a soluble form, while the $GST-E1_{192-383}$ plasmid did not express expected fusion protein. The purified $GST-E1_{192-283}$ fusion protein was efficiently cleaved by thrombin. More than 90% pure, HCV $E1_{192-283}$ protein was obtained by GST-agarose chromatography. The truncated $GST-E2_{384-649}$ fusion gene expressed the fusion protein mainly as an insoluble form, whereas the $GST-E2_{384-740}$ did not express the fusion protein. The truncated $GST-E1_{182-283}$ and $GST-E2_{384-649}$ fusion proteins reacted specifically with an HCV patient serum. In addition, mice immunized with either the purified $E1_{192-283}$ or $GST-E2_{384-649}$ proteins generated specific antibodies to each antigen. The results suggested that hydrophobic carboxyl portions of the E1 and E2 proteins might affect expression levels as well as the solubility of each fusion protein in bacteria. Also, the truncated E1 protein with Tyr-192 to Ser-283 contained antigenic epitope(s) which could be specifically recognized by an HCV patient serum.
Pseudomonas syringae pv. tbaci의 독소생성에 미치는 Phage 의 영향
전홍기,유진삼,성영림,백형석 한국산업미생물학회 1994 한국미생물·생명공학회지 Vol.22 No.3
자연계에서 분리한 bacteriophage Ps90을 Tox^- 균주인 Pseudomonas syringae Pa45에 감염시켜 용원화 하였다. Tox^- Ps90 lysogen은 tabtoxin 생성능을 나타내었으며 UV나 mitomycin C로 induction시켰을 때 phage를 방출하였다. 또한 phage DNA를 probe로 하여 Tox^+와 Tox^- plasmid DNA 및 genomic DNA를 southern blotting시킨 결과 Tox^+ 균주의 plsmid와 genomic DNA에서만이 상동성을 나타내었으며 Tox^+ 균주에서만 phage가 induction되는 것으로 보아 Toxin 생성관련 DNA 단편이 DNA임을 시사해 주며, phage DNA가 병원성 유발과 깊은 관계가 있음을 추론할 수 있었다. Pseudomonas syringae pv. tabaci(Pa45) Tox^- cells were infected with phage Ps90 strain isolated from the natural source, and the Ps90 lysogenized bacterial cells were then obtained. The lyxogenized cells produced tabtoxin and the phage induction occurred when the cells treated with mitomycin C. The Southren hybridization analysis of the four EcoRI-treated plasmid fragments and theh EcoRI-digested genomic DNA of Tox^+ and Tox^- strains using phage DNA as a probe showed that only those DNA fragment Tox^+ strain were related to the Ps90 phage DNA. Based on these results, the tabtoxin producing DNA fragments of the bacteria are presumed to have originated from the same phage DNA, and to be responsible for the pathogenecity of the bacterial strains.