양파즙과 카페인투여 흰쥐의 체네 지질과산화 및 항산화 효소활성에 미치는 영향

문명님,정두례,석근영,이명렬,Moon, Myung Nim 조선대학교 부설 유전생물공학연구소 1993 유전생물공학연구지 Vol.3 No.-

The aim of this study is to investigate effects of onion juice on the lipid peroxidation and activities of antioxidant enzymes in the caffeine for 6 weeks raising, net weight gain and food intake were not signicant different fed rats. With caffeine, the lipid level in serum slightly increased, but lower in rats fed with both caffeine and onion juice. In caffeine fed rats lipid peroxidation rates in liver and kidney slightly increased. Catalase activity was slight decreased in the caffeine and onion juice fed rats than in the caffeine fed rats superoxide dismutase activity of rat liver and kidney significantly increased by caffeine treatment and decreased by onion juice feeding.

양돈사료 첨가용 복합미생물 개발

양영기,조정일,강희경,문명님,이용보 한국유기농업학회 2007 韓國有機農業學會誌 Vol.15 No.1

In order to find a solution to protect pigs from bacterial diarrhea and the nasty smell in stalls which are the most trouble, we composed a bio-formula with Stretococcus thermophilus, Bacillus amyloliquifaciens and Bacillus subtilis. The antagonistic microbe Bacillus amyloliquifaciens can control the growth of Salmonella typhimurium KCTC 1926, Escherichia coli O-157, Listeria and Staphylococcus. S. thermophilus from pig’s stomach can live in gastric juice so it also control germs. They worked in its living cell state and its culture fluid. As a result of feeding with piglings, it showed effects of preventing diarrhea and increasing the weight.

Saccharomycopsis속과 Saccharomyces속의 잡종형성 균주에서 생산하는 ${\alpha}$-amylase의 특성

양영기,문명님,임채영,이영하,김정호,Yang, Young-Ki,Moon, Myeng-Nim,Lim, Chae-Young,Rhee, Young-Ha,Kim, Jeong-Ho 한국미생물학회 1999 미생물학회지 Vol.35 No.4

핵전이 방법을 이용하여 효모에서 전분분해능이 향상된 새로운 우수 균주를 개발하고자 하였다. Saccharomycopsis fiburigera KCTC 7393과 Saccharomyces cerevisiae KCTC 7049에서 핵을 분리한 후 영양요구 돌연변이주인 S. cerevisiae의 안으로 전달시켜 잡종(MN-16)을 형성하여 전분 분해능이 증가된 잡종을 선별하였다. 세포 배양액으로 조효소 용액을 만든 후 ammonium sulfate 침전, DEE-Sephacel column chromatography, Sephacryl S-200 column chromatography 등의 정제과정을 통해 9.7%의 회수율로 약 10.6배 정제 된 효소를 얻을 수 있었다. 정제된 효소는 SDS-PAGE 전기영동을 통해 단일 band를 보여 주었으며, SDS-PAGE 와 Sephacryl S-200 column chromatography를 통해서 53kDa으로 나타났다. 정제효소의 최적 활성 온도는 40${\circ}C$이고, 안정성은 40~45${\circ}C$로 나타났다. 최적 활성 pH는 5.5이었고, pH 5.0~7.0 정도에서 pH안정성이 80%정도 유지되었다. 가용성 전분에 대한 $K_{m}$ 값은 2.5㎎/㎖이었다. 또한, 정제 효소의 금속 이온의 효과로 $Ca^{2+}, Co^{2+}, EDTA, Mg^{2+}, Mn^{2+}, Zn^{2+}$ 첨가시 활성이 촉진되었고, $Ca^{2+}$의 경우 가장 높은 반면 $Cu^{2+}, Fe^{2+}, Ni^{2+}$의 경우는 오히려 활성이 감소되었다. This study has been performed to deveope a yeast strain having high ${\alpha}$-amylase production ability using nuclear transfer method. Hybrids formed between the strains of Saccharomyces fiburigera KCTC 7393 and Saccharomyces cerevisiae KCTC 7049 (tyr-, ura-)were obtained by nuclear transfer technique. Nuclei isolated from the wild type S. fiburigera strain were transfered into auxotrophic mutants S. cerevisiae and selected the hybrids showing an increased starch degrading capability were selected (MN-16). This transformant grew best and produced maximal ${\alpha}$-amylase activity on the medium containing 2% (V/V) soluble starch. ${\alpha}$-Amylase from MN-16 was purified electrophoretically homogenety and its properties were investigated. The enzyme was purified about 10.6 fold with an overall yield 9.7% from the culture medium by ammonium sulfate fractionation. DEAE-Sephacel column chromatography, and Sephacryl S-200 column chromatography. The purified enzyme showed a single band on SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The molecular weight of the ${\alpha}$-amylase was estimated to be 53,000 daltons by SDS-PAGE and by gel permeation chromatography on Sephacryl S-200. The purified enzyme showed the maximum activity at pH 5.5 and 40${\circ}C$. The km value for soluble starch was 2.5㎎/㎖. The enzyme activity increased in the presence of $Ca^{2+}, Co^{2+}, EDTA, Mg^{2+}, Mn^{2+}, Zn^{2+}$, but inhibited by $Cu^{2+}, Fe^{2+}$, and $Ni^{2+}$

핵전이에 의한 Aspergillus niger 와 Penicillium notatum 잡종에서의 lipase 고생산 균주의 개발

양영기,문명님,이윤희,강희경,이정섭,임채영,김종세,이영하 ( Young Ki Yang,Myeng Nim Moon,Yoon Hee Lee,Hee Kyoung Kang,Jung Sup Lee,Chae Young Lim,Jong Se Kim,Young Ha Rhee ) 한국균학회 1997 韓國菌學會誌 Vol.25 No.2

핵전이에 의한 Aspergillus oryzae var. oryzae와 Aspergillus nidulans 514의 잡종으로 부터 생산된 Xylanase의 특성

양영기,문명님,박형남,임채영 한국미생물생명공학회 ( 구 한국산업미생물학회 ) 1996 한국미생물·생명공학회지 Vol.24 No.1

Aspergillus oryzae var oryzae 와 Aspergillus nidulans 514간의 xylanase 우수 생성 종간 형질전환체를 획득하고, 유전분석과 정제를 통하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 핵전이를 위한 원형질체 형성 및 재생 조건에서는 Novozym 234의 농도 1%, 삼투안정제는 0.6M (NH_4)_2 SO_4, 효소의 처리 시간은 90분 그리고 최적 pH는 5.8로 나타났다. 2. 핵전이에 의한 형질전환의 빈도는 3×10 exp (-5)~1×10 exp (-5)으로 비교적 낮은 편이었다. 3. 유전적 안정성, conidia의 크기, DNA 함량의 측정 그리고 핵염색의 결과 형질전환체의 핵형은 aneuploid로 추정되었다. 4. 형질전환체의 xylanase 활성은 모균주와 비교하여 1.1~1.4배 증가하였다. 5. 형질전환체중 xylanase 활성이 가장 높은 TAVD514-3을 정제하고 몇가지 특성을 조사하였는데 전체적인 회수율이 17%, 분자량은 32,000 그리고 효소 활성에 미치는 기질의 영향을 올 조사하였다. 6. 정제된 효소의 최적 pH와 온도는 각각 pH 9.0과 80℃로 나타났으며, 효소활성은 Mg^2+ 와 Mn^2+의 존재시에 증가하는 경향을 나타내었다. Inerspecific hybrids between Aspergillus oryzae var oryzae and A. nidulans 514 were obtained by nuclear transfer technique. Several auxotrophic mutants isolated from conidiospores of the two strains were mutagenized with ultraviolet and N-methyl-N-nitrosoguanidine. Optimal conditions for formation of intergeneric hybrids were investigated. Frequencies of hybrid formation by nuclear transfer were 3×10 exp (-5)~1×10 exp (-5). From observation of genetic stability, conidial size, DNA content, and nuclear stain, it was suggested that their karyptypes are aneuploid. The hybrids showed 1.1~1.4 fold higher xylanase activities than parental strains did. The xylanase of Aspergiilus sp. TAVD514-3 was purified and some of it's enzymatc characteristics were investigated. The enzyme was purified about 85 fold with an overall yield of 17% from the culture medium by ammonium sulfate fractionation, Sephadex G-75 gel permeation chromatography, and CM-sephadex A-50 ion exchange chromatography. The purified enzyme functions optimally at pH 9.0 and 80℃. The enzymatic activity was increased by the presence of Mg^2+ and Mn^2 ions.

토양으로부터 Cryptococcus sp. CS-2의 분리 및 균주가 분비하는 Polygalacturonase의 특성에 관한 연구

강희경,문명님,임채영,양영기 한국미생물학회 1999 미생물학회지 Vol.35 No.2

제주도 밀감 과수원의 토양으로부터 polygalacturonase 고생산 효모를 분리하였다. 분리된 strain CS-2 의 생리화학적인 실험을 수행한 결과 분리균주는 Diazonium bule B color test 와 urease test에서 양성반응, acetic acid, citrate acid 생성 시험, gelatin 분해시험, fat 분해시험에서는 음성반응을 나타났고, 탄소원의 조사에서 galactose를 탄소원으로 이용할 수 없었고, 질소원은 모두 이용할 수 없었다. 또한 $30^{\circ}C$ 에서는 성장하는 반면, $35^{\circ}C$ 이상에서는 성장을 하지 못하였고 50% 이상의 glucose 농도, 0.01% cyclohexamide 그리고 1% acetic acid에서 성장을 하지 못하였다. 현미경을 이용한 형태학적 관찰 결과, 크기는 $1.3{\times}2.9$$\mu$m인 타원형으로 관찰되었다, ,multiple budding을 하며 ascospore는 존재하는 반면 pseudomycelium과 true mycelium 은 존재하지 않았다. 이와 같은 결과를 종합하여 Cryptococcus 속의 특징과 유사함을 알 수 있었다. 분리된 Cryptococcus sp. CS-2 의 polygalacturonase 는 유도적으로 합성되어 catabolic repression 에 의해 조절됨을 알 수 있었으며, 3일 배양시 가장 높은 활성도를 나타내었으며, 고유 활성도는 2.50~2.55 units/mg 으로 나타났다. 이러한 polygalacturonase를 SDS-PAGE, activity staining 그리고 단일 탄소원에 따른 단백질 양상의 변화를 비교하여 분자량 측정한 결과 약 46KDa으로 나타났다. A ploygalacturonase-produchg yeast was isolated from Cheju soil by selective eivichment media. One strain which has the highesl activity of polygalacturonase was selected. The characle~ishcs of the strain CS-2 were as follows: CS-2 utilized xylose. sucrose, maltose, u.ehalose, cellobiose. melibiose, lactose, raffinose, inosiiol, dulicilol, and dextrose, but did not utilized galactose, nitrate. nit~te, and lysine. Growth of CS-2 was inhibited by cyclohexamide, 1% acetic acid, and high concenaation (over 50%) of glucose. It grew at $30^{\circ}C$ but did 'IIOL $35^{\circ}C$. The cell size ofthe strain CS-2 was 2.9 p ~ n in length and 1.3 $\mu$ in diameter. Vegetable reproductmn was multiple budding and ascospre was present I to 4. Pseudomycelia or true myceliua formation were not observed In any of the cullureq. These results suggest that strain CS-2 is most likely a strain related Cryptococcus spp. (Cryptococcu spp. CS-2). When polygalacturonase or ihe yeast was induced by addition of polygalactoronic acid, polygalacturonase activity was detected in culture supernatent. There was a peak of specific activity a1 he mid-stationary phase(3 days culture) of growth. Polygalacturonase specific activity of Crylmcoccus sp. CS-2 was 2.96 unitsling. The molecular weighl ol'polygalacturonase was showed to be 46 KDa by both SDS-PAGE and activity stailling.

핵전이에 의한 Aspergillus niger와 Penicillium chrysogenum의 잡종에서의 Lipase 고생산균주의 개발

양영기,문명님,이윤희,임채영 한국미생물학회 1997 미생물학회지 Vol.33 No.1

Aspergillus niger와 Penicillium chrysogenum간의 lipase 우수 생성 종간 형질전환체를 획득하고, 유전분석을 통하여 다음과 같은 결과를 얻었다. (1) P. chrysogenum의 영양요구물을 확인하여 본 결과 Tyrosine 요구성임을 알 수 있었다. (2) 핵전이를 위한 원형질체 형성 및 재생 조건에서는 Novozym 234의 농도 1%, 삼투안정제는 0.6M KCl, 효소의 처리 시간은 180분 그리고 최적 pH는 5.8로 나타났다. (3) 핵전이에 의한 형질전환의 빈도는 $1.3{\times}$10^{-3}$$ $-3.8{\times}$10^{-3}$$으로 비교적 낮은 편이었다. (4) 유전적 안정성, conidia의 크기, DNA 함량의 측정 그리고 핵염색의 결과 형질전환체의 핵형은 aneuploid로 추정되었다. (5) 형질전환체의 lipase활성은 모균주와 비교하여 1.4-2.2배 증가하였다. Intergeneric hybrids between Aspergillus niger and Perricillium ch~y.sop~um(Tyr ), hyperlipolytic enzyne-producing fungi, were obtained by nuclear transfer technique:. Optimal conditions for formation of intergeneric hybrids were investigated. Maximum production of protoplasts were obtainrd by 1% Novozym 234 at $30^{\circ}C$ for 3 hrs and the most effective osmotic stabilizers for the isolation of protoplasts were 0.6 M KC]. Frequencies of hybrid formation by nuclear transfer were $1.3{\times}$10^{-3}$$ $-3.8{\times}$10^{-3}$$. From the chervation of genetic stability, conidial size, DNA content, ;md nuclear stain, it was suggested that their karyotypes are aneuploid. The hybrids showed 1.4-2.2 fold higher lipase activities than parental strains. It was strongly supported by results of this study that nuclear transfer technique is much more efficient in the formation of intergeneric hybrids than protoplast fusion and is very useful for the improvement of strains.

핵전이에 의한 Aspergillus속과 Penicillium 속의 잡종으로부터 생산된 esterase특성

양영기,문명님,임채영 조선대학교 부설 유전생물공학연구소 1994 유전생물공학연구지 Vol.4 No.-

핵전이에 의해 Aspergillus oryzae var oryzae와 MPV 31 사이의 잡종을 획득하였고, 그특성과 esterase 활성 및 동위효소 양상을 조사한 결과는 다음과 같다. UV와 MNNG의 이중처리에 의해 A. oryzae var oryzae와 P. verruculosum F-3의 영양요구성 돌연변이를 각각 3주, 6주를 획득하였으며, 핵전이를 위한 원형질체 형성의 최적조건은 PH 5.8, 1.0% Novozym 234, 0.6 M KCl 그리고 효소의 처리시간은 2 시간으로 하였다. 또한 원형질체 재생을 위한 삼투안정제도 역시 0.6 M KCl이었으며, 재생율은 각각 56.4%, 52.3%로 나타났다. 핵전이에 의한 형질전환율은 3.0 x 10<윗첨자>-5</윗첨자>~1.0 x 1<윗첨자>-5</윗첨자>으로 나타났으며, 형질전환체의 유전적 안정성과 conidial size, 핵염색, 그리고 DNA 함량의 측정결과핵형은 aneuploid로 추정되었고 효소 활성의 측정결과 형질전환체가 모균주에 비해 1.3~2.2배 가량 증가하였으며, 동위효소 양상은 형질전환체와 모균주에서 유사하게 나타났으나 효소활성에 차이가 있음을 알수 있었다. Intergeneric hybrids formed between Aspergillus oryzae var oryzae and Penicillium verruculosum F-3 were obtained by nuclear transfer technique. Several auxotrophic mutants isolated from conidiospores of the two strains mutagenized with ultraviolet and N-methyl-N-nitrosoguani-dine. Optimal conditions for formation of intergeneric hybrids were investigated. Frequencies of hybrid formation by nuclear transfer were 1 x 10<윗첨자>-5</윗첨자>~3 x 10<윗첨자>-5</윗첨자>. From observation of genetic stability, conidial size, DNA content, nuclear stain, it was suggested that their karyptypes are aneuploid. The hybrid posses the 1.2~l.8 fold higher esterase activities than those of parental strains. It was also revealed that some hybrids had different isozyme patterns compared with those of parental strains by esterase activity assays.

핵전이에 의한 Aspergillus oryzae var. oryzae와 Penicillium chrysogenum의 잡종에서 Alkaline protease 고생산균주의 개량

강희경,임채영,문명님,여명구,송규상,양영기 조선대학교 생명과학연구소 1997 생명과학 연구 Vol.5 No.-

A. oryzae var. oryzae와 P. chrysogenum간의 alkaline protease 우수 생성 좋간형질전환체를 획득하고 유전분석을 통하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 핵전이를 위한 원형질체 형성 및 재생 조건에서는 Novozym 234의 농도 1%, 삼투안정제는 0.6M KCI 그리고 효소의 처리 시간은 189분으로 나타났다. 또한 핵전이에 의한 형질전화의 빈도는 1.3~3.8 x 10^(-4)으로 비교적 낮은 편이었다. 유전적 안정성, conidia의 크기, DNA 함량의 측정 그리고 핵염색 결과 형질전환체의 핵형은 aneuploid로 추정되었고, 형질전환체의 alkaline protease 활성은 모균주와 비교하여 1.1~2.2 배 증가하였다. Interspecific hybrids between Aspergillus oryzae var. oryzae and Penicillium chrysogenum(Tyr^(-)), hyperlipolytic enzyme-producing fungi, were obtained by nuclear transfer technique. Optical contitions for formation of intergeneric hybrids were investigated Maximum production of protoplasts were obtained by 1% Novozym 234 at 30! for 3 hours and the most effective osmotic stabilizers for the isolation of protoplasts were 0.6M KCI. Frequencies of hybrid formation by nuclear transfer were 1.3 10^(-3)∼2.8×10^(-3). From the observation of genetic stability, conidial size, DNA content, and nuclear stain, it was suggested that their karyotypes are aneuploid. The hybrids showed 1.1∼2.2 fold higher alkaline protease activities than parental strains, It was strong1y supported by results of this study that nuclear transfer technique is efficient in the formation of intergeneric hybrids fusion and is very useful for the improvement of strains.

핵전이법에 의해 형성된 Saccharomycopsis 속과 Saccharomyces 속의 잡종에서 glucoamylase 생산에 관한 연구

양영기,임채영,김종권,문명님,이영하 한국미생물학회 2001 미생물학회지 Vol.37 No.3

핵전이에 의해 형성된 잡종의 유도 배양액으로부터 glucoamylase를 정제하고 몇몇의 효소 특성을 조사하였다. 효소는 76배 정제하였고, ammonium sulfate fractionation, Sephadex G-150 gel permeation chromatography 그리고 DEAE-Sephadex A-50 ion exchange chromatography의 순서 배양액으로부터 정제한 결과 전반적인 수율은 16%를 나타내었다. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis와 Sephadex G-150 gel permeation chromatography에 의하여 정제된 glucoamylase의 분자량을 측정한 결과 57.5 kDa를 나타내었으며, 정제된 효소의 최적 pH와 온도는 각각 5.0과 $40^{\circ}C$로 나타났다. 또한 가용성 전분에 대한 Km값은 2.6 mg/ml을 나타내었으며, 정제된 효소는 $Ca^{2+}$, EDTA, $Co^{2+}$, $Mg^{2+}$, 그리고 $Mn^{2+}$의 존재하에 활성이 중진됨을 알수 있었다. The glucoamylase was purified from the induced culture filtrate of hybrid between Saccharomycopsis sp. and Saccharomycopsis sp. made by nuclear transfer and characterized for some enzyme properties. The enzymewas purified 76-fold in an overall yield of 16% from the culture medium by ammonium sulfate fractionation,Sephadex G-150 gel permeation chromatography and DEAE-Sephadex A-50 ion exchage chromatography.The molecular weight of the purified glucoamylase was estimated to be 57.5 KDa on SDS-polyacrylamidegel electrophoresis and Sephadex G-150 gel permeation chromatography. The purified enzyme was active atpH-5.0 and $40^{\circ}C$. The Km value for soluble starch was 2.6 mg/ml. The enzymatic activity was stimulated inthe presence of $Ca^{2+}$, EDTA, $Co^{2+}$, $Mg^{2+}$, and $Mn^{2+}$