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        • KCI등재

          Aspergillus nidulans 에서의 핵전이에 의한 종내잡종 형성

          양영기,박열,이영하,맹필재 한국균학회 1989 韓國菌學會誌 Vol.17 No.3

          The nuclear transfer technique was employed to obtain intraspecific hybrids in Aspergillus nidulans. Nuclei isolated from either a wild type or an auxotrophic mutant strain (FGSC 475) were transferred into the protoplasts of a recipient strain (FGSC 514). The frequency of hybrid formation (4.8% and 10.1%, respectively) by nuclear transfer was higher than the frequency (0.6%) by protoplast fusion. Furthermore, most of the hybrids formed showed increased activity of some components of cellulase system, xylanase system, and mannanase. The hybrids were analyzed to be either diploid or aneuploid. These results suggest that nuclear transfer technique is more efficient in the formation of intraspecific hybrids than protoplast fusion method and is useful for the improvement of Aspergillus strains.

        • SCOPUSKCI등재

          핵전이에 의한 Aspergillus niger와 Penicillium verruculosum F-3의 속간 잡종형성

          양영기,박열,김성준,정현숙,임채영,이영하,Yang, Young-Ki,Park, Yeol,Kim, Sung-Joon,Cheong, Hyeon-Suk,Lim, Chae-Young,Rhee, Young-Ha 한국미생물학회 1993 미생물학회지 Vol.31 No.1

          Aspergillus niger 와 Penicillium verruculosum F-3 균주의 돌연변이체 선발은 ultraviolet (UV) 단일처리와 UV 및 N-methyl-N'-nitrosoguanidine(MNNG) 이중처리에 의해 얻었다. 원형질체 형성을 위한 최적조건으로는 pH 5.8, 상투압안정제로는 0.6 M KCI이 최적이었으며, A-niger 와 P. verruculosum 의 재생율은 각각 54.6%, 49.8% 로 나타났다. 핵전이에 의한 형질전환율은 $7{\times}10^{5}~1{\times}10^{5}$ 이었고, 형질전환체의 유전적 안정성은 4.5%~66.5%, conidia 의 크기와 DNA 함량의 측정결과 각각 $2.6{\pm}0.7{\sim}6.5{\pm}0.5{\mu}m$, 5.7~31.3 ${\mu}g/10^{8}$ condia 를 나타내어 aneuploid 로 추측되었다. 모균주와 형질전환체들간의 유전적 안정성과 효소 활성도를 비교하여 선발되 5 균주의 전제 수용성단백질의 전기영동양상은 차이가 있었으며, 동위효소의 양상은 모균주와 유사하지만 CMCase 의 경우 2 균주(TAPW15706, TAPW157-7), $\beta$-glucosidase 의 경우 5균주 (TAPW157-1, TAPW157-4, TAPW 157-5, TAPW157-6, TAPW157-7)에서 band 의 세기가 증가하였음을 관찰할 수 있었다. lntergeneric hybrids formed between Aspergillus niger and Penicillium verruculosum were obtained by nuclear transfer technique. Nuclei isolated from wild type and auxotrophic mutants of donor strains were transferred into the protoplasts of different auxotrophic mutants as recipient strains. Several auxotrophic mutants were isolated from conidiospores of the two strains mutagenized with ultraviolet and N-methyl-N'-nitrosoguanidine. Optimal conditions for formation of intergeneric hybrids were investigated. Frequencies of intergeneric hybrid formation by nuclear transfer were $7{\times}10^{5}~1{\times}10^{5}$. From observations of genetic stability. DNA content. nuclear stain and conidial size. it was suggested that their karyotypes are aneuploid. In addition. the hybrids possess the 1.1~2.3-fold higher cellulase activities than those of parental strains. It was also revealed that some hybrids had different isozyme patterns compared to those of parental strains by CMCase and $\beta$-glucosidase activity assays.

        • KCI등재

          핵전이를 이용한 Saccharomycopsis 속과 Saccharomyces 속간의 잡종형성

          양영기,임채영,강희경,문명님,이영하 한국균학회 1999 韓國菌學會誌 Vol.27 No.6

          Intergeneric hybrids between Saccharomyccopsis fiburigera KCTC 7393 and Saccharomyces cerevisiae KCTC 7049 (tyr-, ura-) were obtained by nuclear transfer technique. Nuclei isolated from the wild type S. fiburigera strain were transfered into auxotrophic S. cerevisiae mutants and new strains showing an increased starch degrading capability were selected. Maximum production of protoplasts was obtained from the treatment with 0.1% Novozym 234 at 30℃ for 90 min, and most effective osmotic stabilizer for the isolation of protoplasts was 0.6 M KCl at pH 5.8. The frequency of protoplast regeneration was 14.64% under the conditions. Genectic stability, conidial size, DNA content, and nuclear stain suggested that the fusants were aneuploidy. The specific activity of α-amylase was observed to increase about 1.2∼1.9 folds.

        • SCOPUSKCI등재

          핵전이법에 의해 형성된 Saccharomycopsis 속과 Saccharomyces 속의 잡종에서 glucoamylase 생산에 관한 연구

          양영기,임채영,김종권,문명님,이영하 한국미생물학회 2001 미생물학회지 Vol.37 No.3

          핵전이에 의해 형성된 잡종의 유도 배양액으로부터 glucoamylase를 정제하고 몇몇의 효소 특성을 조사하였다. 효소는 76배 정제하였고, ammonium sulfate fractionation, Sephadex G-150 gel permeation chromatography 그리고 DEAE-Sephadex A-50 ion exchange chromatography의 순서 배양액으로부터 정제한 결과 전반적인 수율은 16%를 나타내었다. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis와 Sephadex G-150 gel permeation chromatography에 의하여 정제된 glucoamylase의 분자량을 측정한 결과 57.5 kDa를 나타내었으며, 정제된 효소의 최적 pH와 온도는 각각 5.0과 $40^{\circ}C$로 나타났다. 또한 가용성 전분에 대한 Km값은 2.6 mg/ml을 나타내었으며, 정제된 효소는 $Ca^{2+}$, EDTA, $Co^{2+}$, $Mg^{2+}$, 그리고 $Mn^{2+}$의 존재하에 활성이 중진됨을 알수 있었다. The glucoamylase was purified from the induced culture filtrate of hybrid between Saccharomycopsis sp. and Saccharomycopsis sp. made by nuclear transfer and characterized for some enzyme properties. The enzymewas purified 76-fold in an overall yield of 16% from the culture medium by ammonium sulfate fractionation,Sephadex G-150 gel permeation chromatography and DEAE-Sephadex A-50 ion exchage chromatography.The molecular weight of the purified glucoamylase was estimated to be 57.5 KDa on SDS-polyacrylamidegel electrophoresis and Sephadex G-150 gel permeation chromatography. The purified enzyme was active atpH-5.0 and $40^{\circ}C$. The Km value for soluble starch was 2.6 mg/ml. The enzymatic activity was stimulated inthe presence of $Ca^{2+}$, EDTA, $Co^{2+}$, $Mg^{2+}$, and $Mn^{2+}$

        • KCI등재후보
        • SCOPUSKCI등재

          핵전이에 의한 Aspergillus oryzae var. oryzae와 Aspergillus nidulans 514의 잡종으로 부터 생산된 Xylanase의 특성

          양영기,문명님,박형남,임채영 한국미생물생명공학회 ( 구 한국산업미생물학회 ) 1996 한국미생물·생명공학회지 Vol.24 No.1

          Aspergillus oryzae var oryzae 와 Aspergillus nidulans 514간의 xylanase 우수 생성 종간 형질전환체를 획득하고, 유전분석과 정제를 통하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 핵전이를 위한 원형질체 형성 및 재생 조건에서는 Novozym 234의 농도 1%, 삼투안정제는 0.6M (NH_4)_2 SO_4, 효소의 처리 시간은 90분 그리고 최적 pH는 5.8로 나타났다. 2. 핵전이에 의한 형질전환의 빈도는 3×10 exp (-5)~1×10 exp (-5)으로 비교적 낮은 편이었다. 3. 유전적 안정성, conidia의 크기, DNA 함량의 측정 그리고 핵염색의 결과 형질전환체의 핵형은 aneuploid로 추정되었다. 4. 형질전환체의 xylanase 활성은 모균주와 비교하여 1.1~1.4배 증가하였다. 5. 형질전환체중 xylanase 활성이 가장 높은 TAVD514-3을 정제하고 몇가지 특성을 조사하였는데 전체적인 회수율이 17%, 분자량은 32,000 그리고 효소 활성에 미치는 기질의 영향을 올 조사하였다. 6. 정제된 효소의 최적 pH와 온도는 각각 pH 9.0과 80℃로 나타났으며, 효소활성은 Mg^2+ 와 Mn^2+의 존재시에 증가하는 경향을 나타내었다. Inerspecific hybrids between Aspergillus oryzae var oryzae and A. nidulans 514 were obtained by nuclear transfer technique. Several auxotrophic mutants isolated from conidiospores of the two strains were mutagenized with ultraviolet and N-methyl-N-nitrosoguanidine. Optimal conditions for formation of intergeneric hybrids were investigated. Frequencies of hybrid formation by nuclear transfer were 3×10 exp (-5)~1×10 exp (-5). From observation of genetic stability, conidial size, DNA content, and nuclear stain, it was suggested that their karyptypes are aneuploid. The hybrids showed 1.1~1.4 fold higher xylanase activities than parental strains did. The xylanase of Aspergiilus sp. TAVD514-3 was purified and some of it's enzymatc characteristics were investigated. The enzyme was purified about 85 fold with an overall yield of 17% from the culture medium by ammonium sulfate fractionation, Sephadex G-75 gel permeation chromatography, and CM-sephadex A-50 ion exchange chromatography. The purified enzyme functions optimally at pH 9.0 and 80℃. The enzymatic activity was increased by the presence of Mg^2+ and Mn^2 ions.

        • SCOPUSKCI등재

          핵전이에 의한 Aspergillus oryzae var. oryzae와 Penicillium chrysogenum의 잡종형성 및 Alkaline Protease 생성

          양영기,강희경,임채영,문명님 한국산업미생물학회 1998 한국미생물·생명공학회지 Vol.26 No.4

          Alkaline protease 생산력이 우수한 야생형인 A. oryzae var. oryzae의 핵을 순수 분리하여 영양요구성 변이주인 P. chrysogenum(Tyr^-)의 원형질체에 전달하는 핵전이를 이용하여 종간잡종을 형성시킨 후 이들 형질전환체으로 부터 alkaline protease 고생산 균주를 획득하였다. 핵전이를 위한 원형질체 형성 및 재생 조건에서는 Novozym 234의 농도 1%, 삼투안정제는 0.6 M KC1, 효소의 처리 시간은 180분 그리고 최적 pH는 5.8로 나타났다. 핵전이에 의한 형질전환의 빈도는 1.3~3.8×10 exp (-4)으로 비교적 낮은 편이었으며, 유전적 안정성, conidia의 크기, DNA 함량의 측정 그리고 핵염색의 결과 형질전환체의 핵형은 aneuploid로 추정되었다. 형질전환체의 alkaline protease 활성은 모균주와 비교하여 1.1~2.2배 증가하였다. Interspecific hybrids between Aspergillus oryzae var. oryzae and Penicillium chrysogenum (Tyr^-), high alkaline protease producing fungi, were obtained by nuclear transfer technique. Nuclei isolated from the wild type Aspergillus oryzae var. oryzae strain were transfered into auxotrophic Penicillium chrysogenum mutants and selected the new strains showing an increased protein degrading capability. Maximum production of protoplasts were obtained by 1% Novozym 234 at 30℃ for 3 hours and the most effective osmotic stabilizers for the isolation of protoplasts were 0.6M KCl. Frequencies of hybrid formation by nuclear transfer were 1.3×10 exp (-3)∼2.8×10 exp (-3). They could be suggested as an aneuploid by the observation of genetic stability, conidial size, DNA content, and nuclear strain. The hybrids showed 1.1~2.2 fold higher alkaline protease activities than parental strains.

        • SCOPUSKCI등재

          Saccharomycopsis속과 Saccharomyces속의 잡종형성 균주에서 생산하는 ${\alpha}$-amylase의 특성

          양영기,문명님,임채영,이영하,김정호,Yang, Young-Ki,Moon, Myeng-Nim,Lim, Chae-Young,Rhee, Young-Ha,Kim, Jeong-Ho 한국미생물학회 1999 미생물학회지 Vol.35 No.4

          핵전이 방법을 이용하여 효모에서 전분분해능이 향상된 새로운 우수 균주를 개발하고자 하였다. Saccharomycopsis fiburigera KCTC 7393과 Saccharomyces cerevisiae KCTC 7049에서 핵을 분리한 후 영양요구 돌연변이주인 S. cerevisiae의 안으로 전달시켜 잡종(MN-16)을 형성하여 전분 분해능이 증가된 잡종을 선별하였다. 세포 배양액으로 조효소 용액을 만든 후 ammonium sulfate 침전, DEE-Sephacel column chromatography, Sephacryl S-200 column chromatography 등의 정제과정을 통해 9.7%의 회수율로 약 10.6배 정제 된 효소를 얻을 수 있었다. 정제된 효소는 SDS-PAGE 전기영동을 통해 단일 band를 보여 주었으며, SDS-PAGE 와 Sephacryl S-200 column chromatography를 통해서 53kDa으로 나타났다. 정제효소의 최적 활성 온도는 40${\circ}C$이고, 안정성은 40~45${\circ}C$로 나타났다. 최적 활성 pH는 5.5이었고, pH 5.0~7.0 정도에서 pH안정성이 80%정도 유지되었다. 가용성 전분에 대한 $K_{m}$ 값은 2.5㎎/㎖이었다. 또한, 정제 효소의 금속 이온의 효과로 $Ca^{2+}, Co^{2+}, EDTA, Mg^{2+}, Mn^{2+}, Zn^{2+}$ 첨가시 활성이 촉진되었고, $Ca^{2+}$의 경우 가장 높은 반면 $Cu^{2+}, Fe^{2+}, Ni^{2+}$의 경우는 오히려 활성이 감소되었다. This study has been performed to deveope a yeast strain having high ${\alpha}$-amylase production ability using nuclear transfer method. Hybrids formed between the strains of Saccharomyces fiburigera KCTC 7393 and Saccharomyces cerevisiae KCTC 7049 (tyr-, ura-)were obtained by nuclear transfer technique. Nuclei isolated from the wild type S. fiburigera strain were transfered into auxotrophic mutants S. cerevisiae and selected the hybrids showing an increased starch degrading capability were selected (MN-16). This transformant grew best and produced maximal ${\alpha}$-amylase activity on the medium containing 2% (V/V) soluble starch. ${\alpha}$-Amylase from MN-16 was purified electrophoretically homogenety and its properties were investigated. The enzyme was purified about 10.6 fold with an overall yield 9.7% from the culture medium by ammonium sulfate fractionation. DEAE-Sephacel column chromatography, and Sephacryl S-200 column chromatography. The purified enzyme showed a single band on SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The molecular weight of the ${\alpha}$-amylase was estimated to be 53,000 daltons by SDS-PAGE and by gel permeation chromatography on Sephacryl S-200. The purified enzyme showed the maximum activity at pH 5.5 and 40${\circ}C$. The km value for soluble starch was 2.5㎎/㎖. The enzyme activity increased in the presence of $Ca^{2+}, Co^{2+}, EDTA, Mg^{2+}, Mn^{2+}, Zn^{2+}$, but inhibited by $Cu^{2+}, Fe^{2+}$, and $Ni^{2+}$

        • SCOPUSKCI등재

          핵전이에 의한 Aspergillus oryzae var oryzae와 Penicillium verruculosum F-3의 잡종으로부터 Amylase 생산

          양영기,박열,김성준,문명님,박형남,임채영,이영하 한국산업미생물학회 1994 한국미생물·생명공학회지 Vol.22 No.1

          핵전이에 의해 Aspergillus oryzae var oryzae와 MPV 31 사이의 잡종을 획득하였고, 그 특성과 Amylase 활성 및 동위효소 양상을 조사한 결과는 다음과 같다. UV와 MNNG의 이중처리에 의해 A. oryzae var oryzae와 P. verruculosum F-3의 영양요구성 돌연변이를 각각 3주, 6주를 획득하였으며, 핵전이를 위한 원형질체 형성의 최적조건은 pH 5.8, 1.0% Novozym234, 0.6 M KCI 그리고 효소의 처리시간은 2시간으로 하였다. 또한 원형질체 재생을 위한 삼투안정제도 역시 0.6 M KCI이었으며, 재생율은 각각 56.4%, 52.3%로 나타났다. 핵전이에 의한 형질전환율은 3.0×10exp(-5)∼1.0×1^(-5)으로 나타났으며, 형질전환체의 유전적 안정성과 conidial size, 핵염색, 그리고 DNA 함량의 측정결과 핵형은 aneuploid로 추정되었고 total amylase의 측정 결과 형질전환체가 모균주에 비해 1.3∼2.2배 가량 증가하였으며, 동위효소 양상은 형질전환체와 모균주에서 유사하게 나타났으나 amylase 활성에 차이가 있음을 알 수 있었다. Intergeneric hybrids formed between Aspergillus oryzae var oryzae and Penicillium verruculosum F-3 were obtained by nuclear transfer technique. Several auxotrophic mutants isolated from conidio-spores of theh two strains mutagenized with ultraviolet and N-methyl-N-nitrosoguanidine. Optimal conditions for formation of intergeneric hybrids were investigated. Frequencies of hybrid formation by nuclear transfer were 3×10exp(-5)∼1×10exp(-5). From observation of genetic stability, conidial size, DNA content, nuclear stain, it was suggested that their karyptypes are aneuploid. The hybrid posses the 1.3∼2.2 fold higher amylase activities than those of parental strains. It was also revealed that some hybrids had different isozyme patterns compared to those of parental strains by amylase activity assays.

        • KCI등재

          Al-0.7wt%Cu 합금의 일방향응고시 평활계면형태에 미치는 원심력의 영향

          양영기,강춘식,이진형,이경환,백홍구,황창모,윤우영 대한금속재료학회(대한금속학회) 1998 대한금속·재료학회지 Vol.36 No.8

          To clarify the effect of centrifugal force in unidirectionally solidified metals, Al-0.7wt% Cu alloy system was selected as test material. Centrifugal force was added from 1G(G: territorial acceleration=9.8m/s²) to 20G ; test pieces were quenched at about 50% solid fraction. Planar interface morphology became unstable with increasing centrifugal force, but at the centrifugal force is about 15G, the interface morphology of this alloy became stable again. In order to understand this interface stability under the high centrifugal force apparent diffusion coefficient were measured and also flow modes over solid-liquid interface were analyzed by Favier Method. The Be´rnard cell formed by centrifugal force enhances the heat flow from top of test piece to solid-liquid interface but it and gravitational segregation also restrict enhancement of diffusion in some extant. We could infer qualitatively that solid-liquid interface stability was due to this enhancement of heat flux by centrifugal force at solid-liquid interface.

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