잠복감염시의 해양버나바이러스의 세포내에서의 동태

정성주,오명주 한국어병학회 2002 한국어병학회지 Vol.15 No.1

본 연구는 해양버나바이러스 (Marine birnavirus,MABV)가 이 바이러스에 감수성이 약한 세포내에서 잠복감염을 일으키는 메카니즘을 밝히기 위해 행했다. MABV는 CHSE-214, RTG-2와 RSBK-2세포내에서 전형적인 세포변성효과 (CPE)를 나타내며 높은 역가를 나타내지만, EPC, FHM과 BF-2세포에서는 CPE가 나타나지 않았다. 항바이러스입자항체와 항VP2항체로 ELISA법에 의하여 발현된 바이러스단백질의 양을 측정한 결과 두 경우 모두에서 생성되는 바이러스의 항원의 양은 거의 같았다. 전자현미경 관찰에서 CHSE-214, RTG-2와 RSBK-2세포에서는 다수의 바이러스입자가 관찰되었으나 EPC, FHM과 BF-2세포에서는 관찰되지 않았다. 이상의 결과로부터, MABV는 EPC, FHM과 BF-2세포와 같은 감수성이 약한 세포에 있어서는 바이러스입자의 조립은 이루어지지 않으나, 높은 역가의 바이러스를 생산하는 CHSE-214, RTG-2와 RSBK-2세포와 같은 정도의 바이러스단백질이 발현되고 있으며 이러한 형태로 숙주내에서 잠복감염을 일으키는 것으로 생각된다. The objective of the study was to clarify the mechanism of persistent infection of marine birnavirus (MABV) in various nonpermissive cell lines. It was observed in CHSE-214, RTG-2 and RSBK-2 that the virus produced at high yield with typical cytopathic effect (CPE). On the contrary, the CPE was not produced in EPC, FHM and BF-2 cells. However amount of virus protein in both permissive and nonpermissive cell lines detected by ELISA was almost the same. Electron microscopy showed virions in permissive cells but not in nonpermissive cells. From the results, it is clear that virus protein and RNA were produced in nonpermissive cells as observed in permissive cells; however, assembly of the virus particles did not occur in nonpermissive cells.

소아 신경심장성 실신환자에서 비정상적 심박수 프랙탈 상관에 대한 연구

김경용,주은영,염명걸,오재원,김창렬,김남수,이철범,노정일 대한소아과학회 2002 小兒科 Vol.45 No.9

Edwardsiella tarda에 대한 계란난황항체의 분리와 정제

김영대,오명주,정태성,정성주 한국어병학회 2004 한국어병학회지 Vol.17 No.1

Edwardsiella tarda로 면역한 닭은 난황항체(IgY) 정제 방법을 비교하였다. Anti-E.tarda IgY의 정제는 PEG법, chloroform-PEG법, ammonium sulfate법과 정제 kit를 사용한 4가지 다른 방법으로 실시하였다. 정제된 I&Y는 64kDa의 heavy chain과 27 kDa의 light chain을 나타내었다. E.tarda로 면역된 IgY는 면역되지 않은 대조 IgY보다 높은 ELISA가와 응집항체가를 나타내었으며, 정제된 IgY는 western blotting에서 anti-E.tarda 토끼혈청과 유사한 E.rarda 단백질을 인식하였다. PEG법과 ammonium sulfate법에 의해 정제된 IgY는 응집항체가가 1:512, chloroform-PEG법과 정제 kit에 의해 정제된 IgY를 정제하기 위한 가장 빠른 방법이었다. 이 연구의 결과로 PEG법이 IgY의 생물학적 활성을 유지함과 더불어 신속하고 효과적인 정제방법임을 알 수 있었다. The present study compared purification methods of hen egg yolk immunoglobulin (IgY) from the hen immunized with Edwardsiella tarda. The purification of anti-E. tarda IgY was performed by four different methods, polyethylene glycol (PEG), chloroform polyethylene glycol (Chloroform-PEG), ammonium sulfate and purification kit. Purified IgY had heavy chain of 64 kDa and light chain of 27 kDa size. IgY purified from the hen immunized with E. tarda showed higher ELISA values and agglutination titers than those with IgY purified from the non-immunized hen as a negative control. In addition, purified IgY recognized similar E. tarda proteins to those with anti-E. tarda rabbit serum by western blotting. Purified IgY had an agglutination titer of 1 : 5 12 by PEG method and ammonium sulfate method, and 1 : 128 by chloroform-PEG method and purification kit. Moreover, PEG method was the most rapid method among the four different IgY purification methods. These results indicate that PEG method is effective purification method maintaining biological activity of the IgY.

감성돔(Acanthopagrus schlegeli) 유래의 주화세포의 확립과 확립된 세포의 특성

임은영,강민수,오명주,정태성,정성주 한국어병학회 2003 한국어병학회지 Vol.16 No.3

감성돔 (Acanthopagrus schlegeli)의 비장에서 주화세포인 BSBS를 확립하고 세포의 특성을 검사하였다. BSBS세포는 60회 이상의 계대배양이 가능하였고 형태학적으로는 상피성 세포였다. 세포는 20℃, 10%의 FBS가 든 L-15배지에서 배양하는 조건에서 잘 자랐다. BSBS세포는 해양버나바이러스 (MABY Y-6), 잉어의 봄바이러스병바이러스 (SVCV), 넙치의 랍도바이스(HIRRV)와 연어바이러스 (CSV)를 접종했을 때 세포변성효과가 나타났다. 새로 확립된 주화세포는 앞으로 많은 바이러스병의 연구에 유용하게 사용할 수 있을 것으로 생각된다. A stable cell line, BSBS (black seabream spleen), was established from the cells in spleen of black seabream, Acanthopagrus schlegeli, and characterized. Subculture maintained more than 60 passages and mophologically, BSBS cell was epithelioid cell. The cells grew optimally at 20℃ in Leibovitz's L-15 medium supplemented with 10% fetal bovine serum with incubation temperature of 20℃. BSBS cells supported the growth of marine birnavirus (MABV Y-6), chum salmon reovirus (CSV), spring viremia of carp virus (SVCV) and hirame rhabdovirus (HIRRV). Thus, the new cell line may be useful for studying wide range of fish viruses.

Purge & Trap-GC를 이용한 의약품 필름코팅 정제 중 잔류용제에 관한 연구

장준식,이명자,소유섭,문춘선,이주헌,박희라,김진숙,강경모,이선옥,방성연,유미자,유문균,금오성,이병욱 식품의약품안전청 2000 식품의약품안전청 연보 Vol.4 No.-

의약품은 약물을 생체에 적풋하기 위하여 유효성분의 효과가 언제나 일정하게 확보되고 사응에 편리하도록 만들어지는 것이므로 유효썽분 이외에 약효에 영향을 주지 않는 성분이 첨가되는 경운가 많다. 이 때 사용되는 용매들은 제피의 광택 및 건쪼시간의 단축 등을 위하여 휘발점이 낮을 용매들이 주로 사용되어진다. 본 연구는 의약품 필름코팅정제 중 잔류용매 4종(chlorofonr benzen, trichloro ethylen, 1,4-dioxane)에 대한 변형된 pirge & trap-GC 장치를 이용한 동시분석방법을 개발하였으며, 각 표준품의 RSD 값은 chloroform 3.03%, benzen 3.17%, trichloroethylen 3.69% and 1,4-dioxane 3.41%였다. 또한 시중 유통중인 의약품 50종에 대하여 잔류웅매 양을 측정하였으며, 검출되는 잔류용매는 한 건도 없었다. This study nras carried out to develope the analytical method for the mixture of chlorefonn, benzen, trichloroethylen and 1,4-dioxane simultaneously and determine the remainingorgauic solvents in coating tablets by Purge & Trap-GC. The results were as follouFs ; 1. Chloroform, benzen, trio:tloroethylen and 1,4-dioxane separated by tenax #5 trap by HP-624GC column by terrlperature programming. The peaks were separated completely at retentiontime of 6.88min for chloroform, 8.21min for benzen, 10.38miu for trichloroethylen and 11.95minfor 1,4-dioxane. 2. Standard RSD were individually chloroform 3.03%, benzen 3.17%, trichloroethylen 3.69%and 1,4-diorane 3.41%. 3. 60 samples were not detrcted chloroform, benzen, trichloroethylen and 1,4-dioxane.

갑상선 종양에서 thrombin receptor (PAR-1)의 발현 양상

박지영,목지오,김여주,박형규,김철희,변동원,서교일,유명희,조현득,오미혜,김상진 순천향의학연구소 2006 Journal of Soonchunhyang Medical Science Vol.12 No.2

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3-Joint Planar Type 로봇 매니퓰레이터의 자기동조적응제어에 관한 연구

김규로,양희주,유용석,최명진,오택열 慶熙大學校 大學院 院友會 1996 高凰論集 Vol.17 No.-

This study has parallelogram trajectory tracking of Three Joint Planar type Robot Manipulator. The equation of motion for the three joint planar manipulator are obtained by substituting Lagrange's energy expression into Euler-Lagrange's equation and forming the appropriate derivative. Lagrangian method allows us to obtain the dynamics equations for very complicated systems in the simplest manner possible. SISO model is used for design of the controller. The design of controllers may be considered primary controller for manipulators to track the desired trajectory under ideal conditions and secondary controller to compensates for undesirable deviations of the motion from the trajectory caused by external and internal disturbances. The aim of this paper is to evaluate the efficiency by self-tunning adaptive control and considering a characteristic of control. Through the computer simulation, obtained the following results 1) selt-tunning adaptive control is superior to PD control, 2) During the learning period, the adaptive control algorithm is searching proper estimates and controller gains. After this period, the outputs of the joints start tracking closely the desired valued.

The HBV DNA Amounts in Serum Have No relationship with ALT level and Hetergeneous Population Coexits in Chronic Hepatitis B Virus Infection

Chun, Yoon-Keun,Ha, Joo-hun,Hong-Jung-Woo,Oh, Soo-Myung,Kim, Sung-Soo 경희대학교 동서의학연구소 1999 INTERNATIONAL SYMPOSIUM ON EAST-WEST MEDICINE Vol.1999 No.1

Yoon-Keun Chun¹,Joohun Ha□Hong-Jung Woo□, Soo Myung Oh□,Sung Soo Kim□ ¹Department of Molecular Biology, College of Medicine,²Department of Surgery, college of Medicine,³Department of Internal Medicine, College of Oriental Medicine,and ⁴East-Weat Medical Reserch Institute,Kyung Hee University, Seoul, Korea. The HBV DNA Amounts in Serum Have No relationship with ALT level and Hetergeneous Population Coexits in Chronic Hepatitis B Virus Infection. Proceedings of International Symposium on East-West Medicine, Seoul. 212-230, 1999. -Hepatitis B is caused by hepadnavirus. Hepatitis B virus replicates through 3.5kb pregenomic RNA intermediate which is regulated by core promoter. Pathogenesis of hepatitis B virus has been bilieved the result of host immune response. But recently many studies have reported that high level of viral replication caused by mutation in core promoter might result in severs hepatitis. But these studies were performed in vitro, not in vivo. So there is yet debate about which factor, viral of host factor, is more important in pathogenesis of hepatitis B virus. So we measured real viral replication level in 204 chronic hepatitis B patients by quantifying HBV DNA from sera by our novel PCR-based more sensitive method, and compared these results with ALT level measured from same sera, which indicates liver cell damage. Surprisingly there are no significant correlation between HBV DNA quantity and ALT level. Then we cloned core promoter region. In SSCP, we found that many viral mutants coexist in one patient. Base on SSCP result, we chose main viral core promoter type in each patients, which is thought to determine overall viral replication level in this patient. Main type of core promoter region of each 41 patients were directly sequenced. And with these we measured promoter activity by luciferase assay system and compared promoter activity with on another. We found tha there were some differences in promoter activity according to core promoter sequences. And we constructed replication-competent viral constructs with core promoter from 41 patients and Transfected these into HepG2 cell and measured HBV DNA by southern blot. There were also differences in HBV DNA quantity according to core promoter sequences. On these all results we investigated correlation between the effect of HBV core promoter on viral replication in vitro and HBN DNA quantity, ALT level from sera of each patients. We found there is no significant correlation among them. As a result, we concluded that in determining severity chronic hepatitis B patients, host factors of each patient is more important rather than replicative activity of virus itself.

제1형 당뇨병 환자에서 췌도세포 동종이식의 반복시행

양태영,정인경,서인아,오은영,조건영,오승훈,김성주,정재훈,민용기,이명식,이문규,김광원,도영수,주성욱 대한당뇨병학회 2002 Diabetes and Metabolism Journal Vol.24 No.4

연구배경:췌도세포 이식은 시술이 간편하고 안전하기 때문에 반복이식이 가능하여 그 동안 여러 센터에서 반복이식의 성공을 보고한 바 있다. 국내에서도 본 병원을 비롯하여 몇몇 센터에서 췌도세포 이식이 활발히 시도되고 있으나 사람에서의 동종이식 및 동종 이식의 반복시행은 보고된 바 없는 실정이다. 저자 등은 국내 최초로 췌도세포 동종이식을 시행하여, 혈청 C­펩타이드가 증가하고 인슐린 요구량이 감소하였으며, 혈당농도와 당화혈색소의 안정을 보였다. 그러나 이식 70일 후 다시 인슐린 요구량이 증가하고 C­펩타이드가 감소하여 췌도세포 이식을 다시 시행한 바 있다. 2차 이식 후 70여일이 지난 현재 다시 혈청 C­펩타이드가 증가하고, 인슐린 요구량이 더 감소되어 췌도세포 이식에서 반복 시행의 유용성을 보고하는 바이다. 방법:환자는 32세 남자로 17년전 당뇨병 진단 후 인슐린 치료 중이었으며, 3년전 부터는 만성신부전증으로 혈액툭석을 하고있었다. 1999년 12월 25일 신장이식을 하였고 3일 후 췌도이식을 하였으며, 두번째 이식은 70일 후 시행하였다. 췌도분리는 변형된 Recordi방법과 비연속성 자당 농도차(discontinuous density gradient)를 이용하였으며 분리한 췌도는 배양 후 환자의 신장기능이 정상화되고 미생물학 검사에서 음성을 확인한 후 경피경간으로 간문맥을 접근하여 16G 폴리 에틸렌 카테터를 이용하여 간실질에 이식하였다. 결과:1차 췌도이식시 순수분리전 췌도수는 210,000개, 순수분리후 획득한 췌도수는 90,000개, 순도 95%, 세포양 1.0mL 이었고, 2차 췌도이식시 순수분리전 췌도수는 420,000개, 순수분리후 획득한 췌도수는 370,000개, 순도 95%, 세포양 1.5mL 이었다. 1,2차 모두 간문맥을 통해 약 20분에 걸쳐 간실질에 주입하였다. 췌도이식전 인슐린요구량은 75∼75U/일, HbA1e 8∼10%, C­펩타이드 0.6ng/mL 였으며, 1차 췌도이식수 7일째 인슐린 요구량은 40U/일, C­펩타이드 1.5ng/mL, FPS 109mg/mL 였고, 40일 추적관찰 후 인슐린 요구량이 36U/일, C­펩타이드 1.8ng/mL, HbA1e 6.5∼7.0%로 안정되었다. 그러나 이식 50일째부터 인슐린 요구량이 50∼56U/일, C­펩타이드 0.6ng/mL, FPS 130∼200mg/dL로 혈당 조절이 불안정하여 다시 췌도이식을 시행하였다. 2차 이식후 50일이 경과한 현재, 인슐린 요구량은 26U/일, C­펩타이드 1.8ng/mL, FPS 90∼120mg/dL로 다시 안정되었다. 결론:췌도이식은 반복이식이 가능하며, 본 환자의 경우 인슐린요구량 감소, 혈당의 안정화 및 C­펩타이드가 상승하여 이식한 췌도의 기능을 확인할 수 있었고, 향후 스테로이드 등 면역억제가 유지 용량으로 감량되면 인슐린 요구량은 더 감소될 것으로 기대된다. Over the past 20 years, significant advances have been made in human islet transplantation. However, cases of prolonged insulin independence after islet allotransplantation have rarely been reported and over time, a slight, gradual decrease in insulin secretion appears to occur, as suggested by the lower C-peptide. Although preliminary clinical success achieved over the past few years has been considerably higher with whole pancreatic transplant than with isolated islet grafts, both approaches remain experimental. Islet grafts might gain, over time, increasing credibility and might eventually provide an easier alternative in terms of grafting procedures and patient management, as compared with the more "traumatizing" whole-pancreas transplantation. Also, using islet, re-transplantation is possible. But it is not known whether re-transplantation of islet could be suitable for those patients who lost grafted islet function. The aim of the present study was to investigate the benefits of re-transplantation of islet in previously simultaneous islets-kidney transplant (SIK) patient who have lost graft function. Methods : The recipient was a 32 year old male. First islet transplantation was underwent at December 25, 1999. However, the grafted islets lost function after 70 days. So we performed re-transplantation of islets. The isolation of islet was conducted sterilely on a laminarflow hood and isolated by a modified Recordimethod. The islet was injected slowly into the liver via a cannular placed in the potalvein for 20 minutes. Results : Transplanted islets were 90,000 IEq at first islet transplantation, 370,000 IEq at second islet transplantation. The insulin requirement was reduced from 75-85 to 35-40 U/day, the basal C-peptide level was 1.5 ng/mL at 7 days posttransplant Unfortunately, the grafted islets lost function after 70 days. After second transplantation, the insulin requirement was reduced to 26 U/day. Conclusions : Despite the continuous need for exogenous insulin therapy, islet transplantation can prevent wide glucose fluctuations, thus resulting in normalization of glycemic control and improvement in HbAlc, and also, show that islets can be successfully and safely re-transplanted intraportally in patients who have lost previously grafted islet function (J Kor Diabetes Asso 457~466, 2000).

Competitive PCR법을 이용한 Marine birnavirus(MABV)의 정량적 검출

김영진,김석렬,정성주,오명주 한국어병학회 2001 한국어병학회지 Vol.14 No.3

기존의 어류 병원성 바이러스 연구에 있어 주화세포를 이용한 TCID_50과 plaque assay는 미량의 바이러스에 대해, 그리고 현재 많이 사용되고 있는 polymerase chain reaction(PCR)은 정확한 정량이 힘들다는 것이 각각 단점으로 지적된 바 있다. 이에 어류 병원 바이러스를 효율적으로 조사하기 위한 방법을 개발하고자 연안 양식장에 만연해 있는 marine birnavirus(MABV)를 대상으로 competitive PCR을 이용하여 그 감도 및 정량성 여부를 시험하였다. 본 연구에서 1.44×10^7 PFU/㎖의 바이러스 액에 대해 10^4배 희석한 바이러스 시료까지 검출이 가능하였고, 이 바이러스 액 200㎕에는 약 100 copy의 MABV cDNA가 존재함을 확인할 수 있어 이와 같은 바이러스 유전자의 양을 토대로 간접적인 추정이 가능할 것으로 판단되었다. 감염된 개체에 있는 viral genome의 수는 질병의 진행을 monitor하는 데 중요한 parameter의 하나로서 이 방법을 이용하여 얻어진 정보는 infection stage의 구분에 대한 기초자료로 이용할 수 있을 것으로 판단된다. It has been shown that TCID_50 and plaque assay might be hard to apply for the analysis of small amount of virus. Additionally polymerase chain reaction(PCR) does reply the quantity of virus correctly. Thus we developed the competitve PCR, and effective mean to investigate fish pathogenic virus, and analyzed the sensitivity against marine birnavirus (MABV). In this study, the virus sample of 1.44×10^7PFU/㎖ was detected after up to 10^4 dilution. And the existence of 100 copies MABV cDNA was identified with the competitive PCR in this virus sample. These results indicated that the indirect presumption was available on the basis of the amounts the viral genome. Viral genome's number in the infected individual can be used as the fundamental data to divide the infection stage and to monitor the progress of disease.