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유세포 분석에 의한 각종 칸디다 균종의 Rhodamine 6G 축적 분석
문창진,신종희,김수현,신명근,서순팔,양동욱,김다운,기승정 대한진단검사의학회 2009 Annals of Laboratory Medicine Vol.29 No.2
Background : Fluorescent dye Rhodamine 6G (R6G) is a substrate of multidrug resistance pumps and its accumulation is reduced in some azole-resistant Candida isolates with the upregulation of multidrug efflux transporter genes. Despite reports on species-specific differences in azole susceptibility in various Candida species, only a few studies have been reported on the R6G accumulation among clinical isolates of Candida species. In this study, we compared R6G accumulation between six different Candida species. Methods : The intracellular accumulation of R6G and minimal inhibitory concentrations (MICs) of three triazole agents were investigated in 48 strains of six Candida species (14 C. albicans, 9 C. tropicalis, 8 C. glabrata, 8 C. krusei, 7 C. parapsilosis, and 2 C.haemulonii ). R6G accumulation was measured by using flow cytometry and the geometric mean of the fluorescence intensity (GMF) was used to compare the accumulation between the Candida isolates. Results : The GMF values for the C. tropicalis, C. albicans, C. krusei, C. parapsilosis, and C. glabrata isolates were 167.3±18.5, 126.9±6.6, 88.5±18.5, 50.8±7.0, and 38.1±3.9, respectively. C. glabrata had a significantly lower mean GMF than all the other Candida species (P<0.05). While some Candida strains with trailing growth phenomenon and increased fluconazole MIC did not have a reduced GMF, three Candida strains with increased MICs to all three triazole agents had a reduced GMF. Conclusions : This study found species-specific differences in R6G accumulation in Candida. In addition, the intracellular R6G accumulation can be used to investigate the drug efflux mechanism in azole-resistant Candida strains. 배경 : 형광물질인 rhodamine 6G (R6G)는 칸디다의 다약제 내성 펌프를 통해 균 밖으로 배출되는데, 다약제 내성 유출 유전 자가 과발현된 azole 내성 칸디다 균주에서 R6G의 세포내 축적 이 감소됨이 밝혀졌다. 칸디다의 azole 약제에 대한 감수성 정도 는 균종에 따라 서로 다름이 관찰되고 있는데, 서로 다른 칸디다 균종 간의 세포내 R6G 축적을 비교한 연구는 아직 시행된 바가 없다. 본 연구에서는 6종의 칸디다 균종을 대상으로 세포내 R6G 축적양을 측정하여 비교하여 보았다. 방법 : 칸디다 임상균주 및 표준균주 48주(Candida albicans 14주, Candida tropicalis 9주, Candida glabrata 8주, Candida krusei 8주, Candida parapsilosis 7주 및 Candida haemulonii 2주)를 대상으로 하였다. 3가지 azole 항진균제(fluconazole, itraconazole, voriconazole)에 대한 감수성 검사는 CLSI M27-A2의 broth microdilution법을 이용하여 minimal inhibitory concentration (MIC)를 측정하였고, 칸디다 균 주의 세포내 R6G 축적 정도는 FACscan flow cytometer (BD biosciences, USA)를 이용하여 geometric mean of fluorescence intensity (GMF)를 측정하였다. 결과 : 세포내 R6G 축적을 측정하여 얻은 GMF의 평균은 균 종별로 C. tropicalis, C. albicans, C. krusei 및 C. parapsilosis에서 각각 167.3±18.5, 126.9±6.6, 88.5±18.5 및 50.8± 7.0순이었고, 가장 낮은 GMF를 보인 균종은 C. glabrata로서 (평균 38.1±3.9) 다른 균종에 비해 의의 있게 낮았다(P<0.05). Trailing성장을 보인 5주와 fluconazole에서만 약제의존성 내 성(MIC 16-32 μg/mL)을 보이는 2주에서는 GMF의 감소가 관 찰되지 않은 반면, 세 가지 azole 항진균제 모두에 대한 MIC가 증가된 4주 중 3주(C. glabrata 2주 및 C. parapsilosis 1주)에 서 낮은 GMF가 관찰되어 다약제 유출에 의한 내성기전이 시사 되었다. 결론 : 6종의 칸디다를 대상으로 세포내 R6G 축적량을 측정 한 결과, GMF의 평균값은 다른 칸디다 균종에 비해 C. glabrata에서 낮게 측정되어 칸디다 균종에 따라 R6G 축적량에 차이 가 있음을 알 수 있었다. 또한, R6G의 축적 검사는 azole 계열 132 문창진∙신종희∙김다운 외 5인 항진균제에 내성을 보이는 칸디다 균주에서 다약제 약물 유출에 의한 내성기전을 조사하는데도 이용될 수 있으리라 생각된다.
Microbacterium 에 의한 중심정맥관 연관 균혈증 1예: 16S rRNA 유전자 염기서열분석을 이용한 균 동정
문창진,신종희,정은선,기승정,김수현,신명근,서순팔,양동욱 대한임상미생물학회 2009 Annals of clinical microbiology Vol.12 No.2
We describe here a case of central venous catheter (CVC)-related bacteremia caused by Microbacterium species in a 14-year-old patient, who had received chemotherapy for acute lymphoblastic leukemia. All nine blood cultures obtained from admission day 2 to day 62 yielded the same yellow-pigmented coryneform rod. Both Vitek 2 (bioMerieux, USA) and MicroScan (Dade Behring, USA) identified the isolate as Micrococcus species, and the API Coryne (bioMerieux, France) identified the isolate as Rhodococcus or Brevibacterium species. However, the 16S rRNA gene sequence showed a 99% identity with Microbacterium species. The bacteremia was recurrent or persistent over 60 days despite alternate systemic antibiotic therapy, but blood culture became negative after an addition of teicoplanin lock therapy for eradicating CVC-related bacteremia. This represents the first report of CVC-related Microbacterium bacteremia cured by antibiotic lock therapy in Korea.