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Immuno-PCR을 이용한 한국형 A형 구제역 바이러스 진단
곽경록,이정근,최소영,황춘홍,이성진 강원대학교 동물자원공동연구소 2019 동물자원연구 Vol.30 No.2
구제역은 발생 시 살처분, 백신 접종과 같은 질병 방제 비용 발생, 생산성 감소, 동물과 축산물의 국제적인 교역 제한 등으로 국가 경제에 미치는 영향이 매우 큰 질병이다. 바이러스의 혈청형을 민감하고 정확 및 신속하게 구분할 수 있는 적합한 진단법은 구제역의 조기 예방 측면에서 지속적으로 요구되고 있다. 본 연구는 한국형 구제역 바이러스를 진단하는 방법으로, 기존 연구에서 민감성이 확인된 Immuno-PCR 진단법을 적용시킬 수 있는지를 확인하기 위해 진행되었다. Immuno-PCR을 진행하기 위해 한국에서 발병한 구제역 바이러스의 서열을 모두 확인한 뒤 적합한 서열을 선정해 항원으로 사용하기 위한 재조합 FMDV를 합성하였다. 이들을 발현시켜 항원으로 삼아 다클론 항체 및 단일클론 항체를 만들었으며, 자성입자와 올리고머를 각각 항체에 고정시켜 본 실험에 사용하였다. Western blot과 ELISA 반응과 real-time PCR 결과를 토대로 immuno-PCR을 이용하여 한국형 구제역 바이러스(A형)를 검출해낼 수 있다는 결과를 도출하였다. 연구의 결과는 본 진단법이 차후 한국형 구제역 바이러스를 더 민감하게 검출할 수 있는 진단법의 토대가 될 것이라 여겨진다. In the case of foot-and-mouth disease (FMD), there is a great deal of impact on the national economy due to the disposal of diseases, the cost of disease control such as vaccination, reduction of productivity, and restriction of international trade of livestock products. Therefore, appropriate diagnostic methods for sensitive, accurate and rapid identification of virus serotypes are continuously required in terms of early prevention of FMD. This study was conducted to confirm the feasibility of immuno-PCR diagnostic method for the more sensitive detection of Korean FMD virus (FMDV). We synthesized a partial FMD type A viral gene. Protein antigen, monoclonal and polyclonal antibodies of FMDV were cloned, expressed and purified and then magnetic particles were attached to polyclonal antibodies and and oligomers to monoclonal antibodies for the immnuno-PCR. We confirmed the antigen-antibody and oligomer reaction using ELISA, Western blot, and real-time PCR. These results show that Korean FMDV can be detected by using difference of Ct values between positive group and negative group using immuno-PCR.. The results of this study also suggest that this technique will be the basis of the diagnosis method to detect Korean FMDV more sensitively in the future.
곽경록,최소영,김은영,황춘홍,이성진 강원대학교 동물생명과학연구소(구 강원대학교 동물자원공동연구소) 2017 동물자원연구 Vol.28 No.2
Foot-and-mouth disease (FMD) is a infection that can easily spread when it occurs and causes serious economic damage because of the existence of multiple serotypes of the virus and extreme contagiousness. The most effective method in preventing the transmission of FMD virus (FMDV) is the culling of livestock and additional vaccination in the other areas depending on the spreading rate and situation. Diagnostic methods are utilized not only for the definite diagnosis of FMD but also for identification of serotype, and confirmation of antibody production after vaccination. Although many methods have been developed to diagnose, they are not still enough to detect accurately the disease in a short time. Therefore, it has been needed new diagnostic methods improved from existing methods. Previous methods were based on the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) as a serological diagnostic method, or polymerase chain reaction (PCR), which is a molecular genetic method. The recent technology has been performing about the combination of both methods and how to make it faster, less costly, more sensitive and accurate way.
ALI 배양법을 이용한 비강 점막 상피세포의 미세구조와 14C-mannitol 투과도
곽경록 ( Gwag Gyeong Log ),황지윤 ( Hwang Ji Yun ),이지석 ( Lee Ji Seog ),박혜경 ( Park Hye Gyeong ),김윤성 ( Kim Yun Seong ),이민기 ( Lee Min Gi ),박순규 ( Park Sun Gyu ),김유선 ( Kim Yu Seon ),노환중 ( No Hwan Jung ) 대한결핵 및 호흡기학회 2001 Tuberculosis and Respiratory Diseases Vol.50 No.2