Replacement of Chromosomal nha4 Gene of Escherichia coli with in Vitro Mutated Gene

서승염 한국유전학회 1995 Genes & Genomics Vol.17 No.2

Designed deletion and insertion were constructed on plasmids into nhaA gene, coding a Na^+/H^+ antiporter A (NhaA) of Escherichia coli. The chromosomal nhaA gene was replaced with the mutated genes, resulting deletion and insertion mutants. The designed mutations in chromosomal nhaA genes of the mutants were confirmed by genetic analysis and after retrieval of the chromosomal mutations on plasmids. The deletion and insertion mutants displayed sodium (lithium) and alka-linity sensitive phenotypes. The Na^+/H^+ antiport activity of the mutants is not significantly altered, due to another Na^+/N^+ antiporter (NhaB) in E. coli (Seo, 1992, Kor. J. Microbiol. 30 : 269-277).

한약재로부터 Tyrosinase 저해제의 탐색

서승염 한국자원식물학회 2001 한국자원식물학회지 Vol.14 No.1

한약재 174종으로부터 tyrosinase 저해제를 탐색하였다. 한약재는 30일간 methanol에 담가 놓은 후, 그 추출액을 제조하여 사용하였다 Tyrosinase의 활성을 측정하기 위해서는 효소 mushroom Tyrosinase와 기질 L-DOPA, phosphate buffer를 사용하였다. 탐색 결과, 한약재 174종 중 14개종이 tyrosinase를 저해 효과를 보였고, 그중 오배자 추출액이 inhibition activity가 가장 높게 나타났다. Mammalian tyrosinase plays an important role in the process of melanin polymer biosynthesis by catalyzing the hydroxylation of tyrosine to 3,4-dihydroxyphenylalanine(DOPA) and the oxidation of DOPA to dopaquinone. These processes are major determinant of human skin color and involved in localized hyperpigmentation. Therefore, the enzyme inhibitors have been of great concern as skin-whitening cosmetics. Methanol extracts of 174 oriental herbs were screened for the mushroom tyrosinase inhibitory activity.

미생물을 이용한 축산 폐기물 처리제의 개발

서승염 공주대학교 자원재활용신소재지역협력센터 2000 2차년도 센터 사업 성과집 Vol.2000 No.1

대장균의 형질전환을 위한 Electroporation 最適條件

서승염,김준기,김주연 公州大學校 基礎科學硏究所 1995 自然科學硏究 Vol.4 No.-

형질전환을 위한 기존의 electroporator들이 일회용 cell과 고전압을 사용하지만, 한국생공에서 만들어진 Jetgene electroporator는 영구용 cell과 저전압을 사용하여 형질전환할 수 있도록 한 한국실정에 맞는 새로운 기기이다. 이 기기를 사용하여 대장균의 형질전환을 위한 electroporation 최적조건을 찾기 위하여 전기장의 세기, 펄스의 길이, plasmid DNA의 크기, 균주, DNA 농도, 세포의 농도, 세척 용액과 횟수, 배지의 종류가 Electroporation의 효율에 영향을 미치는 영향을 조사했다. 전기장의 세기는 12.14 - 12.85 kV/cm에서, 시정수 (τ)가 4-5 msec에서, 조사한 대장균주 중에서 BW 13745에서 최고의 효율을 나타냈다. DNA 양에 형질전환 효율이 비례적으로 증가하지는 않았지만 DNA 양이 많아질수록 많은 형질전환체가 얻어져 DNA 1-2㎍에서 109의 형질전환체가 얻어졌다. 수확시 세포의 밀도가 OD600이 0.6-0.8일 때 최고의 효율을 나타냈다 여러 세척액 중에서 10 % glycerol로 세척했을때, 2회 세척했을 때, 여러 배지 가운데 SOC에서 자란 균을 사용했을 때 최고의 효율을 나타냈다. 이 조건들을 조합해 실험을 해본 결과 DNA 1㎍당 1점에서 1010까지의 형질전환체를 얻을 수 있었다. 다른 electroporator에 비하면 상당히 저가인 한국생공의 Jetgene electroporator를 사용하여 적은 비용으로 높은 효율의 형질전환을 할 수 있었다. Although disposable cells and high voltage are used for electroporators, a new electroporator for which permanent cells and low voltage can be used was manufactured from Korea Biotech. Inc We wanted optimize the procedures for electroporation using this electroporator. The effect of electric field strength, pulse length, sizes of plasmid, host strains, washing solutions and times, growth media were studied. Maximum transformation efficiency for E. coli strain CC118 was obtained at electric field strength of 12.14-12.85 kv/cm and retention time of 4-5 msec. Although the number of transformants was not proportional to the amount of plasmid DNA, larger amount of DNA gave higher number of transformants. 109 transformants were obtained with 1-2㎍ DNA. The highest number of transformants were obtained using cells harvested at OD600 0.6-0.8. 10% glycerol out of washing solutions, 2 times washing, SOC medium out of growth media were best for high efficiency of transformation. 109-1010 transformants were routinely obtained. Jetgene electroporator seems adequate for electroporation at lower price and working cost.

미생물을 이용한 축산 분뇨 퇴비화 촉진제의 개발

서승염 공주대학교 자원재활용 신소재 연구센터 2002 센터사업 성과집 Vol.- No.1

깨끗한 물 만드는 '연꽃의 미소'

서승염,Seo, Seung-Yeom 한국과학기술단체총연합회 2003 과학과 기술 Vol.36 No.9

농산 폐기물 재활용을 통한 유용물질 개발

서승염 공주대학교 자원재활용 신소재 연구센터 2003 센터사업 성과집 Vol.- No.4

Escherichia coli 의 Na+/H+ antiporter 유전자(ant)에 있어서 sodium 과 alkalinity 감수성 돌연변이체 mapping 의 분리 및 특성

서승염 한국유전학회 1992 Genes & Genomics Vol.14 No.2

Mutants of Escherichia coli displaying a pleiotropic phenotype including sensitivity to Na^+, Li^+, and alkaline pH were isolated using insertion mutagenesis (Tn10 and λplacMU53). Genetic mapping by both conjugation (F and Hfr) and transduction (Pl) located the mutations near the region of the Na^+/H^+ antiporter gene(s). The mutations were further pinpointed via complementation using recombinant plasmid pNHA7. The presence of the ant gene alone on this plasmid is sufficient for complementation. To study whether the ant gene is a regulatory of structural gene, in vitro mutagenesis was used to generate a class of mutants displaying altered transport of Na^+ versus Li^+. These results suggest that E. coli has evolved two or more Na^+/H^+ antiporter genes including ant as well as other unmapped systems.

HnRNP L 단백질에서의 핵수송에 중요한 영역의 동정

이소영,서승염,박홍규,최미영 한국유전학회 2001 Genes & Genomics Vol.23 No.3

The heterogeneous nuclear ribonucleoprotein (hnRNP) L is one of the major pre-mRNA binding proteins in human cells. It is localized in the nucleoplasm. It has not been identified whether the domain of hnRNP L is important for nuclear localization yet. For determination of the domain in hnRNP I, that localizes it to the nucleus, a series of amino terminal and carboxy terminal deletions of hnRNP L were Fused to the 3' end of the myc epitope-tagged chicken muscle pyruvate kinase cDNA. The suhcellular localization of transiently expressed polypeptides was investigated by immunofluorescence microscopy. Here, we report that an amino terminal domain of the hnRNP L protein is necessary and sufficient for nuclear localization. This amino terminal domain confers complete nuclear localization onto pyruvate kinase, a cytoplasmic reporter protein when expressed as a fusion protein.

Pst I 제한효소의 유전자 재조합과 발현

이귀숙,서승염,이승환,노현모,Lee, Kee-Sook,Seo, Sung-Yum,Lee, Sung-Whan,Rho, Hyune-Mo 생화학분자생물학회 1982 한국생화학회지 Vol.15 No.4

본 실험에서는 Providencia stuartii 164로부터 Pst I restriction-modification system을 E. coli에 유전공학적으로 도입시켰다. Pst I 제한효소 자연생산균주인 P. stuartii 164로 부터 DNA를 분리하여 Hind III 제한효소로 완전히 절단한 후 유전자 운반체인 pBR 322의 Hind III 절단자리에 끼어 넣었다. 이렇게 재조합된 plasmid로 형질 전환되어 Pst I system이 도입된 E. coli 균주는 용균성 박테리오파아지 ${\phi}80v$에 대한 저항성과 Pst I 제한 효소 생산여부에 근거하여 선별하였다. 이와 같이 선별된 균주, 즉 Pst I system이 cloning된 균주는 그 숙주 DNA와 plasmid DNA가 Pst I 제한효소에 의해 잘라지지 않았으며 Pst I 제한효소를 생산하였다. 이런 결과들은 제한효소 유전자와 수정효소 (Pst I site methylase)유전자가 둘다 cloning되어 E. coli 세포 내에서 발현되었음을 의미한다. Pst I system 이 cloning된 대장균주에 존재하는 재조합된 plasmid(pRL 829)는 원래 사용한 유전자 운반체에 약 3,700 염기쌍 크기의 DNA 조각이 끼어 들어간 것이었으며 이 대장균주는 같은 배양 조건에 서 자연생산 균주인 Proνidencia stuartii 164보다 약 15배 정도의 제한효소를 더 생산하였다. We report the cloning of the Pst I restriction-modification system of Providencia stuartii 164. The DNA isolated from the native Pst I producing strain, P. stuartii 164, was completely digested with Hind III and inserted into the Hind III target site of pRL 322. The cloned strain of E. coli was selected on the basis of acquired resistence to bacteriophage ${\phi}80v$ infection and Pst I endonuclease productivity. Plasmid and host DNA from the cloned E. coli were not digested by Pst I, and strain produced Pst I restriction endonuclease. These results indicated that both the restriction enzyme and modification (methylase) genes had been cloned and were being expressed. The plasmid (pRL 829) isolated from the cloned strain contains an insert of approximately 3,700 base pairs. The cloned E. coli produces approximately 15 times more Pst I endonuclease activity than does the native strain under the similar condition of culture.