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형질전환된 식물세포에서 Sucrose 농도가 hGM-CSF 생산에 및 미치는 영향
이진옥,심두희,주치언,김동일,이동근,이재화,Lee, Jin-Ok,Shim, Doo-Hee,Joo, Chi-Un,Kim, Dong-Il,Lee, Dong-Geun,Lee, Jae-Hwa 한국식물생명공학회 2004 식물생명공학회지 Vol.31 No.2
본 연구에서는 hGM-CSF 유전자가 도입된 형질전환 담배세포에서 sucrose의 농도가 배양 배지내 분비된 hGM-CSF, 총분비 단백질, 그리고 단백질 분해효소에 미치는 효과를 보았다. 10, 30, 60, 90, 120, 150 g/L의 sucrose 농도로 배양한 결과 sucrose농도가 30g/L일 때 건조중량은 11.22g/L, 분비된 hGM-CSF의 양은 181.53 $\mu\textrm{g}$/L, 그리고 총단백질은 66.8 mg/L.로 시료채취 5일 때 가장 높은 값을 나타내었고, 단백질 분해효소는 sucrose농도가 120 g/L일때 2660 U/L.의 값을 나타내었다. 그러나 배양 10일째 sucrose농도 60 g/L에서 건조중량이 28.36g/L로 가장 높은 값을 나타낸 반면 분비된 hGM-CSF의 최대 값은 95 $\mu\textrm{g}$/L.로 sucrose농도가 150 g/L일 때 가장 높은 값을 나타내었다. The effects of sucrose concentration on the secretion of hGM-CSF, total protein and protease into the medium were investigated in transgenic tobacco cells. The dry cell weight (11.22 g/L), hGM-CSF (181.53 $\mu\textrm{g}$/L) and total protein (66.8 mg/L) were detected as highest at 30 g/L sucrose and protease activity (2660 U/L) was highest at 120 g/L sucrose after 5-day culture. However after 10-day culture, the maximum dry cell weight (28.36 g/L) was found at 60 g/L sucrose while the maximum hGM-CSF (95 $\mu\textrm{g}$/L) was appeared at 150 g/L sucrose. The total protein and protease activity was secreted as 52.28mg/L and 3430 U/L, respectively in the same culture.
이동근,이재화,이상현,하배진,심두희,박은정,김진욱,이화월,남천석,김남영,이어진,백진욱,하종명,Lee Dong-Geun,Lee Jae-Hwa,Lee Sang-Hyeon,Ha Bae-Jin,Shim Doo-Hee,Park Eun-Kyung,Kim Jin-Wook,Li Hua-Yue,Nam Chun-Suk,Kim Nam Young,Lee Eo-Jin,Back J 한국생명과학회 2005 생명과학회지 Vol.15 No.2
생명체의 본질적 기능에 중요한 역할을 담당하는 유전자들을 밝히기 위해 미생물 유전체들 사이의 공통적 유전자를 밝히는 COG알고리듬을 이용하였다. 진핵생물 3종을 포함한 66종의 미생물에서 63개의 유전자가 보존적이었으며, 단백질 합성에 관여하는 유전자들이 총 52개로 생명현상에서의 단백질의 중요성을 알 수 있었다. 각 보존적 유전자들의 distance value를 이용하여 종간의 유전자 변이의 정도를 보면, ribosomal protein S12 (COG0048)와 ribosomal protein L14 (COG0093)의 보존성이 가장 높았다. 보존적 유전자들의 평균과 분산으로 유전체 분석을 수행한 결과, 고세균과 진정세균의 각 그룹 등 근연종들이 독자적 그룹을 형성하였다. 하지만 각 그룹내의 속 및 유전체의 수와 유전체 변이의 정도는 비례하지 않는 것을 알 수 있었다. To figure out conserved genes in 66 microbial species and measuring the degree of conservation, analyses based on COG (Clusters of Orthologous Groups of proteins) algorithm were applied. Sixty-six microbial genomes, including three eukaryotes, hold 63 conserved orthologs in common. The majority $(82.5\%)$ of the conserved genes was related to translation, meaning the importance of protein in living creatures. Ribosomal protein S12 (COG0048) and L14 (COG0093) were more conserved genes than others from the distance value analysis. Phylogenetically related microbes grouped in genome analysis by average and standard deviation of 63 conserved genes. The 63 conserved genes, found in this research, would be useful in basic research and applied ones such as antibiotic development.
TNF-α 유전자로 형질전환된 효모의 성장양태 및 단백질 생산
심두희,이진옥,이동근,이재화 신라대학교 자연과학연구소 2004 自然科學論文集 Vol.13 No.-
사람 TNF-a를 생산하도록 GPD promoter와 AG promoter로 형질전환된 S. cerevisiae가 보이는 성장양상, 총분비단백질, pretease 활성을 측정하였다. GPD promoter로 형질전환 된yeast는 63.6 g/L의 성장이 일어났고 총분비단백질은 9 mg/L이며, pretease 활성은 2.55 X10^(4) unit/L 였다. AG promoter로 형질전환된 yeast의 경우엔 68 g/L의 성장이 측정되고 총분비단백질은 27 mg/L, pretease 활성1.55 X10^(4) unit/L였다. 단백질과 protease 분비량은 세포의 성장과 비례하는 것을 알 수 있었고, GPD promoter로 발현되는 TNF-a의 양은 배양초기에는 검출 한계 이하였고 15시간 이후에 증가하는 양상을 보여 배양 후 35시간째에 가장 많은 양 약 2535 ng/ml 정도가 분비되는 것으로 나타났다. We measured growth, total secreted protein and total secreted protease of transformed Saccharomyces cerevisiae with human TNF-α gene. Two different promoters, GPD promoter and AG promoter, were used for heterologous expression of human TNF-α gene. The growth which transformed TNF-α:GPD promoter was 63.9 g/L and total secreted protein was 9mg/L, protease activity was 2.55 x 10^(4) unit/L. In another case at TNF-α:AG promoter the growth was 68 g/L, total secreted protein was 27 mg/L and protease activity was 1.55 X 10^(4) unit/L. We could know total secreted protein and protease were directly proportional increase with growth. In initial time of culture, we could not see the TNF-α content in GPD promoter but after 15hours the yeast produced TNF-α. The highest level of product of TNF-a was 2535 ng/ml at 35hours after culture.