췌장 콜레스테롤 에스터레이즈 저해제인 초두구 추출물의 혈중 콜레스테롤 저해효과

김희숙(Hee Sook Kim),김지영(Ji Young Kim),최종원(Jong Won Choi),허영미(Young Mi Huh),서판길(Pann-Ghill Suh),류성호(Sung Ho Ryu) 한국식품과학회 2000 한국식품과학회지 Vol.32 No.1

분화된 HL60 세포에서 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor에 의한 95 kDa 단백질의 Tyrosine잔기 인산화

이영한,김정옥,민도식,김희숙,김용식,이창연,류성호,서판길,Lee, Young-Han,Kim, Jeong-Ock,Min, Do-Sik,Kim, Hee-Sook,Kim, Yong-Sik,Lee, Chang-Youn,Ryu, Sung-Ho,Suh, Pann-Ghill 생화학분자생물학회 1994 한국생화학회지 Vol.27 No.5

사람의 granulocyte-macrophage colony-stimulating factor(GM-CSF)는 세포 표면에 존재하는 특이 수용체 자극을 통하여 각종 분화단계에 있는 골수세포의 성장과 분화에 중요한 cytokine이다. HL60 세포에 분화 유도 인자인 phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA), $1{\alpha}$,25-dihydroxyvitamine $D_3$[1,25-$(OH)_{2}VD_{3}$] 및 dimethyl sulfoxide(DMSO) 등을 전처리한 후 GM-CSF 자극에 대해 특정 분화단계에서만 활성화되는 세포내 단백질을 조사하였다. SH2-SH3 domain을 인지하는 F7-2 항체로 면역 침전하여 면역 블롯한 결과 미분화 세포와 DMSO를 처리한 세포에서는 GM-CSF 자극에 의해 tyrosine 인산화되는 단백질을 발견할 수 없었지만, PMA와 1,25-$(OH)_2VD_3$를 전처리한 세포에서는 95kDa 단백질의 tyrosine 인산화가 일어남을 관찰하였다. Kinetics 분석결과 95 kDa 단백질의 tyrosine 인산화 반응은 GM-CSF 처리 후 1분 이내에, 1,25-$(OH)_{2}VD_{3}$를 전처리한 세포에서는 2분 이내에 나타나는 신속한 반응이었다. 이 단백질이 세포에서 발현되는 양은 PMA 전처리 시간에 무관하게 일정하였으나 GM-CSF에 의한 인산화는 PMA 전처리 시간에 따라 변화하였다. 또한, 95 kDa 단백질은 in vitro에서도 autophosphorylation되었다. 이러한 결과로부터 95 kDa 단백질은 PMA나 1,25-$(OH)_{2}VD_{3}$로 분화 유도된 HL60 세포에서 GM-CSF의 초기 신호전달 경로에 관여하고 있음을 추측할 수 있었다. Human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) is a multipotent cytokine which stimulates the proliferation and differentiation of various lineage of hematopoietic cells. We examined whether GM-CSF stimulates protein phosphorylation in HL60 cells pretreated with differentiation-inducing factors such as PMA, 1,25-$(OH)_{2}VD_{3}$ and DMSO. GM-CSF induced tyrosine phosphorylation of 95 kDa protein in PMA- or 1,25-$(OH)_{2}VD_{3}$ but not in DMSO-pretreated cells. Tyrosine phosphorylation of 95 kDa was detected at 1 min and 2 min after stimulation of GM-CSF in PMA- and 1,25-$(OH)_{2}VD_{3}$-pretreated cells, respectively. Kinase activity which phosphorylates tyrosine residue(s) of the 95 kDa protein appeared to increase in a time dependent manner in PMA-pretreated cells, whereas the expression level of 95 kDa protein was not changed. We also observed that 95 kDa protein was autophosphorylated in immunecomplex kinase assay, suggesting that this 95 kDa protein may be tyrosine kinase which is activated in lineage specific manner. These results suggest that 95 kDa protein may be involved in an early signal transduction pathway of GM-CSF.

T Cell에서의 Lectin에 의한 Phospholipase $C-{\gamma}1$ Tyrosine 잔기 인산화를 통한 Phospholipase C의 활성화

김희숙,문경호,이영한,윤두희,류성호,서판길,Kim, Hee-Sook,Moon, Kyoung-Ho,Lee, Young-Han,Yun, Doo-Hee,Ryu, Sung-Ho,Suh, Pann-Ghill 생화학분자생물학회 1993 한국생화학회지 Vol.26 No.8

사람의 $CD4^+$ T임파구 암세포인 Jurkat cell에는 phosphatidyl inositide-specific phospholipase C(PI-PLC 또는 PLC)의 이성화효소인 PLC-${\beta}1$, $-{\gamma}1$, $-{\delta}1$이 존재한다. Jurkat cell에 여러 lectin들을 처리하여 $PLC-{\gamma}1$의 인산화반응, tyrosine잔기 인산화반응 및 PI-PLC의 활성도 등을 측정하므로써 lectin들에 의한 T세포의 선호전달에 $PLC-{\gamma}1$이 관여하는지 검토하였다. Phytohem-agglutinin(PHA), Concanavalin A(Con A), Trichosanthis radix aggutinin(TRA) 등의 lectin을 T세포에 처리하였을 때 PLC의 활성에 의하여 세포의 막지질성분인 phosphatidyl inositide의 가수분해물인 inositol phosphate들의 축적이 증가하였다. 그중 세포신호전달에 있어 second messenger인 inositol 1,4,5-trisphosphate(IP3)는 30초 내에 이미 최고수준에 달하였다. 또한 처리 후 30초 이내에 $PLC-{\gamma}1$의 tyrosine잔기에 인산화가 일어났다. 인산화된 tyrosine잔기의 위치는 T cell의 CD3의 항체인 OKT3를 처리하거나 fibroblast에 성장인자인 PDGF 또는 EGF를 처리한 경우와 같음을 tryptic phosphopeptide mapping으로 확인하였다. 이와 같은 결과들은, T세포의 분화를 유도하는 lectin들이 T세포의 항원수용체와 CD3 복합체(TCR-CD3 Complex) 또는 표면당단백질인 CD4, CD8 등과 결합하거나 상호작용하고 있는 nonreceptor tyrosine kinase(fyn 또는 lck)를 활성화시키고 이들에 의해 phospholipase $C-{\gamma}1$의 tyrosine잔기가 인산화됨으로써 세포 외부 신호가 세포내로 전달되고 있음을 암시하고 있다. 이렇게 tyrosine잔기가 인산화되어 활성화된 phospholipase $C-{\gamma}1$은 다시 phosphatidyl inositide를 가수분해시켜 second messenger인 1,2-diacylglycerol(DG)과 inositol 1,4,5-trisphosphate(IP3)를 생성하게 하여 T세포의 분화 및 성장을 유도할 것으로 생각된다. Stimulation of the human T cell line, Jurkat, by the addition of mitogenic lectin activates phospholipase $C-{\gamma}1$($PLC-{\gamma}1$), generating two second messengers, inositol-l,4,5-trisphosphate and diacylglycerol, from phosphatidyl inositide. To investigate the effect of mitogenic lectins, Jurkat cells were treated with PHA, TRA (one of Trichosanthes radix agglutinins) or Can A. The tyrosine phosphorylation of $PLC-{\gamma}1$ occurred rapidly and reached maximum level less than 0.5 min after PHA stimulation in the presence of orthovanadate. In cells prelabeled with [$^3H$]myo-inositol, PHA quickly but persistently stimulates the formation of [$^3H$]inositol-1,4,5-trisphosphate within 0.5 min after stimulation. Two-dimensional phosphopeptide map analysis revealed that the major sites of tyrosine and serine phosphorylation in $PLC-{\gamma}1$ from stimulated Jurkat cells are the same as those in $PLC-{\gamma}1$ from Jurkat cells treated with antibody to CD3 or A43l cells with EGF. Thus, we suggests that mitogenic lectin-dependent increase in phosphoinositide hydrolysis in Jurkat cells can be occur through the phosphorylation of tyrosine residues on $PLC-{\gamma}1$ by a nonreceptor tyrosine kinase(s) coupled to the TCR-CD3 complex.

T Cell 에서의 Lectin 에 의한 Phospholipase C - γ1 Tyrosine 잔기 인산화를 통한 Phospholipase C 의 활성화

김희숙,문경호,이영한,윤두희,류성호,서판길 ( Hee Sook Kim,Kyoung Ho Moon,Young Han Lee,Doo Hee Yun,Sung Ho Ryu,Pann Ghill Suh ) 생화학분자생물학회 1993 BMB Reports Vol.26 No.8

Stimulation of the human T cell line, Jurkat, by the addition of mitogenic lectin activates phospholipase C-γ1(PLC-γ1), generating two second messengers, inositol-1,4,5-trisphosphate and diacylglycerol, from phosphatidyl inositide. To investigate the effect of mitogenic lectins, Jurkat cells were treated with PHA, TRA (one of Trichosanthes radix agglutinins) or Con A. The tyrosine phosphorylation of PLC-γ1 occurred rapidly and reached maximum level less than 0.5 min after PHA stimulation in the presence of orthovanadate. In cells prelabeled with [³H]myo-inositol, PHA quickly but persistently stimulates the formation of [³H]inositol-1,4,5-trisphosphate within 0.5 min after stimulation. Two-dimensional phosphopeptide map analysis revealed that the major sites of tyrosine and serine phosphorylation in PLC-γ1 from stimulated Jurkat cells are the same as those in PLC-γ1 from Jurkat cells treated with antibody to CD3 or A431 cells with EGF. Thus, we suggests that mitogenic lectin-dependent increase in phosphoinositide hydrolysis in Jurkat cells can be occur through the phosphorylation of tyrosine residues on PLC-γ1 by a nonreceptor tyrosine kinase(s) coupled to the TCR-CD3 complex.

분화된 HL60 세포에서 Granulocyte - Macrophage Colony - Stimulating Factor 에 의한 95kDa 단백질의 Tyrosine 잔기 인산화

이영한,김정옥,민도식,김희숙,김용식,이창연,류성호,서판길 ( Young Han Lee,Jeong Ock Kim,Do Sik Min,Hee Sook Kim,Yong Sik Kim,Chang Youn Lee,Sung Ho Ryu,Pann Ghill Suh ) 생화학분자생물학회 1994 BMB Reports Vol.27 No.5

Human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) is a multipotent cytokine which stimulates the proliferation and differentiation of various lineage of hematopoietic cells. We examined whether GM-CSF stimulates protein phosphorylation in HL60 cells pretreated with differentiation-inducing factors such as PMA, 1,25-(OH)₂VD₃ and DMSO. GM-CSF induced tyrosine phosphorylation of 95 kDa protein in PMA- or 1,25-(OH)₂VD₃ but not in DMSO-pretreated cells. Tyrosine phosphorylation of 95 kDa was detected at 1 min and 2 min after stimulation of GM-CSF in PMA- and 1,25-(OH)₂VD₃-pretreated cells, respectively. Kinase activity which phosphorylates tyrosine residues) of the 95 kDa protein appeared to increase in a time dependent manner in PMA-pretreated cells, whereas the expression level of 95 kDa protein was not changed. We also observed that 95 kDa protein was autophosphorylated in immunecomplex kinase assay, suggesting that this 95 kDa protein may be tyrosine kinase which is activated in lineage specific manner. These results suggest that 95 kDa protein may be involved in an early signal transduction pathway of GM-CSF.

마황으로부터 췌장 Cholesterol Esterase 저해물질 분리 및 규명

조은정(Eun-Jung Cho),류병호(Byung-Ho Ryu),송병권(Byung-Kwon Song),이태훈(Taehoon G. Lee),서판길(Pann-Ghill Suh),류성호(Sung-Ho Ryu),김희숙(Hee-Sook Kim) 한국식품영양과학회 1999 한국식품영양과학회지 Vol.28 No.4

췌장으로부터 분비되는 cholesterol esterase(pCEH, pancreas cholesterol ester hydrolase, E.C.3.1.1.13)는 콜레스테롤 흡수에 관련되는 중요한 지질가수분해효소로 알려져 있다. 식이로부터 섭취되는 cholesteryl acyl ester(이하 콜레스테롤 에스테르)는 소장에서 흡수되기 전에 cholesterol esterase에 의하여 유리콜레스테롤과 지방산으로 가수분해되어야 한다. 천연물질들로부터 동맥경화 또는 고지혈증의 예방제 및 치료제를 개발할 목적으로 본 실험실에서는 여러 가지 한약재료의 추출물들을 이용하여 cholesterol esterase에 대한 저해제활성을 시험관법으로 검색하였는데 마황의 에탄올추출물이 강한 저해활성을 보였다. 마황의 에탄올추출물로부터 용매분획법과 silica gel column chromatography 등을 이용하여 cholesterol esterase활성을 저해하는 물질을 분리 정제하였으며 저해활성을 가진 흰색 결정은 UV, ¹H NMR, ^(13)C-NMR 및 GC/Mass로 분석한 결과(-)-ephedrine으로 동정되었다. 이러한 결과들은 (-)-ephedrine이 콜레스테롤 에스터레이즈를 저해하므로서 식이중 콜레스테롤의 흡수를 저해하는 흡수저해제를 개발하기 위한 기본 물질로 이용될 수 있을 것으로 생각된다. Cholesterol esterase(pCEH, pancreas cholesterol ester hydrolase, E.C.3.1.1.13) which is secreted from pancreas has been known as an important lipase for cholesterol uptake. cholesteryl acyl esters from a diet must be hydrolyzed to free cholesterol and fatty acid by cholesterol esterase before the absorption in small intestine. For the development of inhibitory substances from natural source, we screened many extracts of oriental herbs for the inhibition of cholesterol esterase in vitro. The ethanol extract of Ephedra herba showed strong inhibitory activity. Solvent fractionation and silica gel column chromatography with the extract lead to the purification of the inhibitory principle in Ephedra herba. Crystallized inhibitor was identified as (-)-ephedrine by using UV, FT-IR, ¹H-NMR, ^(13)C-NMR and GC/Mass. These results suggest that (-)-ephedrine can be used as a potential lead compound for the development of inhibitor for cholesterol uptake by cholesterol esterase inhibition.

방사선과 5-fluorouracil 투여후 백서 공장 점막의 재생과정에서 Phospholipase C-γ1의 발현에 관한 면역조직화학적 연구

박경란,이종영,김성숙,고창민,정순희,이영한,서판길 연세대학교 원주의과대학 1995 원주의대논문집 Vol.8 No.1

Plasma Cell Granuloma in Cyclosporin-induced Gingival Overgrowth : Four Cases Report with Interleukin-6 and Phosphlipase C-γ1 Immunohistochemistry Interleukin-6 과 phospholipase C-γ1 면역조직화학적 분석-4증례

Sung, lel-Yong,Son, Jang-Ho,Ryu, Sung-Ho,Seo, Jae-Hee,Kim, Sung-Sook,Choi, In-Pyo,Ryu, Sung-Ho,Suh, Pann-Ghill,Byeon, Ki-Jeong 大韓顎顔面成形再建外科學會 2003 Maxillofacial Plastic Reconstructive Surgery Vol.25 No.2

Cyclosporine-A(CsA)는 이식 장기의 면역거부반응을 억제하고 또한 면역학적으로 이상이 있는 여러 질병의 치료제로 널리 시용된다. CsA는 세포 매개성 면역시스템의 변환에 중요한 역할을 하지만 몇가지 T-림프구 유도 사이토카인의 방출을 억제하여 간접적으로 단핵구의 기능에도 영향을 미친다. CsA는 치은 과증식을 포함한 많은 CsA유도 치은 과증식증의 병인론에 대해서는 아직 완전히 밝혀지지 않았다. 저자들은 CsA와 을 함계 사용한 4명의 신장 이식 환자에서 치은 형질세포 육아종을 interleukin-6 을 이용한 면역조각화학볍으로 분석하였다. 비록 약물성 유도성 치은 과식증의 병인론은 불분명하지만,CsA가 여러 성장인자(growth factor)와 platelet-derived growth factors-B(PDGF-B) 및 interleukin-6에 작용하여 섬유모세포의 활동성을 변화시킨다고 여겨진다.