포스터 발표 : C형 간염바이러스의 Core부위에서 유전자 아형 특이 multiple primer sets를 이용한 새로운 유전자 아형분석의 효율성

류종순,윤승규,왕진상,김창욱,남순우,장우임,최종영,조세현,양진모,한남익,정규원,선희식 대한간학회 2003 Clinical and Molecular Hepatology(대한간학회지) Vol.9 No.3(S)

배경/목적: C형 간염 바이러스(Hepatitis C virus, HCV)의 유전자 아형은 간염의 임상적 경과나 항바이러스 제제의 치료에 대한 반응과 밀접한 관련이 있다. HCV 유전자 유형은 적어도 6개의 주요 유전자형과 이에 속하는 일련의 아형(genotype)을 가지고 있다. 국내에서 발표된 유전자 아형의 비율은 genotype Ib가 60-65%, 2a가 25-35%보여 국내에서는 주로 이들이 주형으로 생각된다. 현재 유전자형을 측정하는 방법으로 Inno-Lipa 등의 몇가지 상업적 kit가 이용되고 있으나 가격이 상당이 비싸 일반 환자에서 적용하기에 제한점이 되어 왔다. 이러한 단점을 보완하기 위해 최근 새롭고 간편한 방법이 개발된 바 있어, 본 연구에서 Ohno 등에 의해 발표된 Core 유전자 영역을 대상으로 한 간단한 유전자 아형의 분석법을 시행하여 기존의 방법과 비교 분석하였다. 대상과 방법: 만성 C형 감염환자 80명을 대상으로 하여 혈액에서 혈청을 분리한 후 바이러스성의 리보 핵산(RNA)을 추출하였다. 분리한 HCV RNA를 주형으로 하여 임의의 소식자를 결합시켜 역전사 한 후 이 cDNA를 주형으로 Core 부위의 유전자를 중합효소 연쇄반응을 통해 일차 증폭하였다. 대표적인 유전자 아형 각각에 해당되는 소식자들(1a, 1b, 2a, 2b, 3a, 3b, 4, 5a, 6a)을 혼합하여 증폭된 Core 부위를 주형으로 하여 다시 중합효소 연쇄반응을 시행하였다. 확인된 유전자 아형 중 환자 20명에 대한 동일한 cDNA 표본을 사용하여 최근까지 사용되어온 Enomoto 등의 방법과 염기서열분석을 통해 비교 분석하였다. 결과: 80명의 환자들을 대상으로 하여 분석한 유전자 아형에서 대표적인 유전자 아형인 1b는 63%, 2a는 35%, 그 외의 유전자 아형이 2%를 보이고 있었다. Enomoto 등의 방법으로 분석한 유전자 아형의 확인은 환자 20명중 10명으로 50%의 효율성을 나타내고 있는데 반해 본 연구에서는 환자 80명중 68명의 유전자 아형이 확인되어 85%의 효율성을 보이고 있었다. 또한 확인된 유전자 아형을 염기서열분석을 통해 비교한 결과 Core 부위의 염기서열과 98%의 정확성을 보여주고 있었다. 결론: Enomoto 등의 방법은 주로 NS5B의 유전자 영역에 해당하는 1a, 1b, 2a 및 2b의 유전자 아형을 위주로 하는 방법이고 시간 및 경제적 부담이 많은데 비해 본 연구에서 시행한 Core 부위에서 유전자 아형의 전체적인 동시 분석이 가능하며 각각의 소식자들에 따라 중합효소연쇄반응을 수회 시행하는 것과 달리 혼합된 소식자들을 사용하기 때문에 실험의 수행시간과 비용을 줄일 수 있다. 이는 유전자 아형분석에서 정확성과 효율성을 높여 임상 연구에 큰 도움을 줄 것이라 사료된다.

Expression of Luteinizing Hormone (LH) and Its Receptor Gene in Rat Mammary Gland

류종순,김재만,이성호 한국발생생물학회 2000 발생과 생식 Vol.4 No.2

Gonadotropin-releasing hormone (GnRH)과 그 수용체가 흰쥐의 난소, 정소, 자궁, 태 반 그리고 유선 등의 생식기관에서 발현됨이 알려져 있다. 더욱이, 뇌하수체 전엽에 작용하는 GnRH의 표적 산물로 알려진 luteinizing hormone (LH)이 흰쥐 생식소에서도 발현됨이 알려졌는데, 이는 생식소 내에 GnRH-LH로 이루어진 국부 회로 (local circuit)가 존재함을 시사하는 것이다 본 연구는 LH와 그 수용 Recent studies have clearly shown that the expression of genes for gonadotropin-releasing hormone (GnRH) and its receptor in the rat reproductive organs including ovary, testis, placenta uterus and mammary gland. Moreover, luteinizing hormone (LH) classically known to be a main target product of GnRH in anterior pituitary has been found in rat gonads. These findings suggested the presence of local circuit composed of GnRH and LH in the rat gonads. The present study was undertaken to elucidate whether the genes for LH and its receptor are expressed in rat mammary gland. Expression of LH and its receptor genes in the rat mammary gland was demonstrated by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and specific LH radioimmunoassay (RIA). The LH transcripts in the mammary gland from cycling rats contained the pituitary type of LH exons 1~3 encoding the entire LH polypeptide but lacked the rat testis-specific LH exon(s). Presence of -subunit transcripts in the rat mammary gland were determined by RT-PCR. The cDNA fragments encoding exons 2~7 of rat LH receptor transcripts were amplified in both rat ovary and mammary gland samples. We could detect the GnRH expression in mammary gland from cycling virgin rats, and this result disagreed with previous report that mammary GnRH expression is occured in lactating rats only. Considerable amounts of immunoreactive LH molecules with good RIA parallelism in standard curve were detected in crude extracts from the rat mammary gland, indicating that the immunoreactive LH materials in the gland might be identical to authentic pituitary LH. To our knowledge, the present study demonstrated for the first time the expression of LH subunits and LH receptor in the rat mammary gland. Our findings suggested that the mammary gland might be the novel source and target of LH and the mammary LH could be act as a local regulator with auto-and/or paracrine manner under the regulation of local GnRH.

成人肺野의 크기 測定

全慶姬,柳鍾順 高麗大學校 醫學技術大學 1976 高麗醫技大雜誌 Vol.7 No.1

대한소화기학회 : 구연 ; 간 : 간암세포주 Huh7를 이용한 In Vitro Hepatitis C Virus (HCV)의 배양법 개발

윤승규,류종순,허원희,장정원,배시현,최종영,한준열,정규원,선희식 대한소화기학회 2004 대한소화기학회 추계학술대회 Vol.- No.-

포스터 발표 : C형 간염 환자 혈청에서 Real-Time RT-PCR을 이용한 HCV RNA 정량

왕진상,윤승규,류종순,김창욱,한준열,안병민,이영석,이창돈,차상복,정규원,선희식 대한간학회 2003 Clinical and Molecular Hepatology(대한간학회지) Vol.9 No.3(S)

배경/목적: 혈중내 C형 간염 바이러스(Hepatitis C Virus, HCV)의 정량은 임상적 경과나 항바이러스 치료후 예후 판정에 중요한 역할을 한다. 하지만 HCV는 혈중내 매우 미미한 농도로 존재하는 경우가 많아 일반적인 효소면역법이나 방사성 면역법에 의한 정량은 불가하고 경쟁적 역전사-중합효소연쇄반응(competitive RT-PCR)으로 정량이 가능하나 정확한 copy수를 계산하는 특이도에 문제가 있는 것으로 보고되고 있다. 또한 상업적으로 이용되는 kit로 정량하는 것은 경제적 측면에서 환자에게 많은 부담을 주는 것 같다. 최근 보다 경제적이고 정확한 방법으로 실시간 역전사-중합효소연쇄반응(Real-Time RT-PCR)이 개발되어 임상에서 응용되고 있다. 본 연구에서는 Taqman probe 와 i-cycler (BMS) 를 이용한 실시간 역전사-중합효소연쇄반응을 사용하여 HCV RNA를 정량하여 기존의 방법과 비교 분석하였다 대상과 방법: 만성 C형 간염 환자 64명, 간 경변증 환자 13명, 간암 환자 4명을 대상으로 하여 환자의 혈청에서 바이러스성 리보핵산을 추출한 후 C형 간염 바이러스의 5말단의 비 암호화된 부위에 결합하는 소식자와 이 소식자들 사이에 위치하는 이중 표식된 형광 탐침을 사용하여, 역전사 중합효소 반응에 의해 HCV RNA의 증폭시 발색되는 형광염료의 양을 측정하는 방법으로 HCV RNA를 정량하였다. 각 표본들에서의 정확한 HCV RNA copy수를 측정하기 위해 일련의 합성 HCV RNA 표준량을 5개의 희석 배수(103-107)로 하여 기본곡선으로 사용하였으며 각각의 표본들은 3회 반복 실험하였다. 또한 이들 중 10개의 표본들을 bDNA 법으로 정량하여 비교 분석하였다. 결과: 81명의 환자들을 대상으로 하여 HCV RNA를 정량 분석한 결과 최저 5.0과 최고 9.5사이의 범위에 포함되었다. 이들 기본 곡선의 계수는 평균 0.98이었다. bDNA 법으로 분석한 HCV RNA 정량 결과 정량에서의 차이는 거의 없었으나 본 연구에서의 Taqman 방법에서는 102 copies/mL 정도의 낮은 copy수까지 검출할 수 있었다. 결론: Tagman 방법을 사용한 Real-Time RT-PCR 은 HCV RNA 정량에 높은 민감성과 간단성, 재현성을 보이고 있다. 이는 많은 수의 표본들을 집단 검진하기에 매우 효율적이며 또한 임상적인 치료과정 중에도 바이러스성 RNA를 효과적으로 측정하여 C형 간염 환자들의 진단 및 치료에 도움이 될 것이라고 생각된다.

사람 간세포의 분리 및 SV40 Large T antigen에 의한 세포의 불멸화

허원희 ( Heo Won Hui ),윤승규 ( Yun Seung Gyu ),신주엽 ( Sin Ju Yeob ),류종순 ( Lyu Jong Sun ),왕진상 ( Wang Jin Sang ),김창욱 ( Kim Chang Ug ),최종영 ( Choe Jong Yeong ),정규원 ( Jeong Gyu Won ),선희식 ( Seon Hui Sig ) 대한소화기학회 2003 대한소화기학회 추계학술대회 Vol.2003 No.-

<목적> 간세포는 간의 해독 작용이나 운반체 단백질의 합성 저장과 같은 중요 기능을 수행한다. 간세포를 이용한 연구에는 간의 재생(regeneration)과 분화(differentiation) 기작과 간염 바이러스(hepatitis virus) 관련 연구 등이 있다. 특히 간염 바이러스 연구는 형질전환 동물로만 이용해야 한다는 한계를 안고있기에 새로운 신약 백신이 개발되었더라도 신약에 대한 간염 바이러스의 치료 효과를 입증하기가 어려운 실정에 있다. 이

간경변 백서 모델에서 아데노바이러스 벡터를 이용한 Matrix Metalloproteinase-3 유전자 치료

김소연 ( So Yeon Kim ),허원희 ( Won Hee Her ),류종순 ( Jong Soon Ryu ),왕진상 ( Jing Sang Wang ),배시현 ( Si Hyun Bae ),장정원 ( Jeong Won Jang ),김창욱 ( Chang Wook Kim ),동미숙 ( Mi Sook Dong ),윤승규 ( Seung Kew Yoon ) 대한내과학회 2006 대한내과학회지 Vol.71 No.6

목적: 간경변은 활성화된 간성상 세포에 의해 이상 증식된 세포외기질이 축적되는 것을 특징으로 하며 matrix metalloproteinase (MMP)에 의해 분해되는 것으로 보고되고 있다. 본 연구의 목적은 간경변 모델 흰쥐에서 MMP-3를 발현하는 아데노바이러스를 이용한 유전자 치료로 간섬유화가 경감되는지를 알아보고자 하였다. 방법: 몸무게 200~250 g의 6주령된 수컷 백서에 8주 동안 DMN을 복강에 주사하여 간경변 동물 모델을 만들었다, 일주일 후에 AdMMP3.GFP, Ad.GFP, PBS를 문맥에 주사한 후 매주마다 백서를 희생시켜 조직을 채취하였다. 간경변의 개선정도는 활성형의 간성상 세포지표인 a-SMA, Desmin, TGFβRⅡ의 면역화학적 염색, 간세포 성장 표지자인 PCNA 및 dry liver weight 측정을 통해 분석하였다. 결과: MMP-3를 주사한 군에서 Masson`s trichorm 염색 시의 교원질과 hydroxyproline의 양은 현저히 감소하였다. MMP-3올 주사한 군에서 α-SMA, Desmin, TGFβRⅡ 양성 세포수는 감소하며, PCNA 양성 세포수와 dry liver weight은 증가하였다. 결론: 본 연구의 결과를 종합해 볼 때 MMP-3를 이용한 유전자 치료가 비가역적으로 알려진 간경변을 최소한 경감시킬 수 있는 가능성을 보여주어 향후 항섬유화 분자치료적 관점에서 긍정적인 가능성올 제시하고 있다. Background: Liver cirrhosis is characterized by fibrous scarring and hepatocellular regeneration. Matrix metalloproteinases (MMPs) comprise a family of zinc-dependent enzymes that degrade the extracellular matrix (ECM) components. This study examined whether or not gene delivery of human MMP-3 can attenuate established liver cirrhosis in a rat. Methods: Rat liver cirrhosis was induced by an intraperitoneal injection of dimethylnitrosamine (DMN) three times a week for 8 weeks. The rats were infected once with either a recombinant adenovirus. AdMMP3.GFP, or a control adenovirus, Ad.GFP, into a portal vein and followed up for 3 weeks. In the rat liver tissues, the collagen content, histopathology and immunohistochemical staining were measured. Results: Liver fibrosis in the DMN induced cirrhotic rat was attenuated along with a diminished hydroxyproline content and increased dried liver weight after the gene delivery of AdMMP3.GFP. In addition, the number of activated hepatic stellate cells was lower whereas the proliferation of hepatocytes, which was confirmed by immunohistochemical staining using anti-proliferating cell nuclear antigen (PCNA) antibody, was observed in the AdMMP3.GFP infected rats, suggesting that human MMP-3 stimulated hepatocyte proliferation. Conclusions: These results suggest that the gene transfer of human MMP-3 in the liver attenuates established fibrosis and induces hepatocyte proliferation. Therefore, gene therapy using MMP-3 in liver cirrhosis might be a promising therapeutic option in the future. (Korean J Med 71:609-619, 2006)

시험관내 공동배양법을 이용한 C형 간염 바이러스 Core 단백이 간섬유화 기전에 미치는 영향

신주엽 ( Sin Ju Yeob ),윤승규 ( Yun Seung Gyu ),왕진상 ( Wang Jin Sang ),허원희 ( Heo Won Hui ),류종순 ( Lyu Jong Sun ),배시현 ( Bae Si Hyeon ),최종영 ( Choe Jong Yeong ),양진모 ( Yang Jin Mo ),양세환 ( Yang Se Hwan ),성영철 ( Seo 대한소화기학회 2003 대한소화기학회지 Vol.42 No.5

The study of liver fibrogenesis by hepatitis C virus (HCV) has been limited due to the lack of an efficiency in vitro culture systems. In the present study, we investigated whether or not HCV core protein is directly related to liver fibrogenesis through stimulation of hepatic stellate cells (HSC). Methods: Human and rat HSC were isolated and we established an in vitro co-culture system of a stable HepG2-HCV core cell line which was transfected with HCV core gene and primary HSC. We performed immunocytochemical staining and Western and Northern blot analysis in the stimulated HSC by HCV ocre protein to identify the expression of transforming growth factor β1 (TGF-β1), transforming growth factor β receptor II (TGFβRII), α-smooth muscle actin (α-SMA) and connective tissue growth factor (CTGF). The expression of matrix metaloprotinase-2 (MMP-2) and collagen type I (Col I) in the culture media were measured by zymogram and ELISA, respectively. Results: The expression of TGF-β1 and CTGF was significantly higher in the stable HepG2-HCV core cell line than in HepG2 cells. Furthermore, the makers related to fibrosis such as α-SMA, TGF-β1, Col I, TGFRII and MMP-2 were highly experssed in the co-culture of stable HepG2-HCV core with HSC. Conclusions: HCV core protein may play a direct role in the fibrogenesis of chronic liver disease with HCV infection. (Korean J Gastroenterol 2003;42:400-408)

Role of Expression of E-Cadherin/Catenins Complex in Gastric Carcinoma

주영은 ( Young Eun Joo ),나호영 ( Ho Young Na ),유상두 ( Sang Doo You ),이환식 ( Wan Sik Lee ),김현수 ( Hyun Soo Kim ),류종순 ( Jong Sun Rew ),박창수 ( Chang Soo Park ),김세종 ( Sei Jong Kim ) 대한내과학회 1999 대한내과학회 추계학술대회 Vol.57 No.-