HIV-1 유래 렌티바이러스 벡터의 복제가능 바이러스 검출과 역가측정 분석방법 비교

장석기(Seok Kee Chang),오일웅(Il Ung Oh),정자영(Jayoung Jeong),안광수(Kwang Soo Ahn),손여원(Yeowon Sohn) 대한약학회 2005 약학회지 Vol.49 No.3

Human Immunodeficiency Virus type 1 (HIV-1) based lentivirus vector has demonstrated great potential as gene therapy vectors mediating efficient gene delivery and long-term transgene expression in both dividing and nondividing cells. However, for clinical studies it must be confirmed that vector preparations are safe and not contaminated by replication competent lentivirus (RCL) related to the parental pathogenic virus, HIV-1. In this study, we would like to establish the method for titration and RCL detection of lentivirus vector. The titration was determined by vector expression containing the green fluorescent protein, GFP in transduced cells. The titer was 1×107 Transducing Unit/ml in the GFP expression assay and 8.9×107 molecules/ml in the real-time PCR. Also, for the detection of RCL, we have used a combination method of PCR and p24 antigen detection. First, PBS/psi and VSV-G region in the genomic DNA of transduced cells was detected by PCR assay. Second, transfer and expression of the HIV-1 gag gene was detected by p24 ELISA. In an attempt to amplify any RCL, the transduced cells were cultured for 3 weeks (amplification phase) and the supernatant of amplified transduced cell was used for the second transduction to determine whether a true RCL was present (indicator phase). Analysis of cells and supernatant at day 6 in indicator phase were negative for PBS/psi, VSV-G, and p24 antigen. These results suggest that they are not mobilized and therefore there are no RCL in amplification phase. Thus, real-time PCR is a reliable and sensitive method for titration and RCL detection of lentivirus vector.

총설 - 나노기술을 적용한 식품의 독성 및 위해성평가 현황(II)

전향숙,장현주,고상훈,오일웅,Chun, Hyang-Sook,Chang, Hyun-Joo,Ko, Sang-Hoon,Oh, Il-Ung 한국식품연구원 2011 食品技術 Vol.24 No.3

나노기술을 식품에 응용하게 되면 영양소의 전달, 식품의 색, 향미, 물성 등이 향상되고 식품 포장재나 분석에 응용하는 경우 저장성 증진이나 시료 전처리 효율 및 기기 감도를 증가시키는 것으로 알려지고 있다. 이러한 장점으로 인해 유기 및 무기 나노입자, 나노섬유, 나노에멀전, 나노크레이 등의 나노물질을 식품첨가물, 건강기능소재, 식품 접촉물질 등으로 응용하는 시도가 식품산업계에서 급속히 확산되고 있다. 나노물질의 사용범위가 다양해질수록 나노물질의 환경 및 인체 노출가능성은 높아지게 된다. 그러나 아직 나노물질의 독성 및 위해성에 대해서는 초기 단계 수준의 연구가 진행되고 있는 정도이다. 또한 나노기술의 위험 평가에 대한 신뢰성이 제고될 수 있도록 나노물질에 대한 유해성 자료의 생산뿐만 아니라 나노물질의 물리화학적 특성과 노출량을 측정할 수 있는 적절한 측정수단이 확립되어야 한다. 나아가 식품에 나노기술의 적용으로 인한 이익은 최대화하고 부작용은 최소화하여 소비자의 건강을 보호하기 위해 식품나노물질의 생산, 가공, 유통, 소비, 폐기 등에 관한 전 생애(lifecycle) 평가 및 관리가 이루어지도록 적절한 제도적 장치가 마련되어야 한다.

나노기술을 적용한 식품의 독성 및 위해성평가 현황(I)

전향숙,장현주,고상훈,오일웅,Chun, Hyang-Sook,Chang, Hyun-Joo,Ko, Sang-Hoon,Oh, Il-Ung 한국식품연구원 2011 食品技術 Vol.24 No.2

지방유래중간엽줄기세포의 동결 안정성에 관한 연구

김선희 ( Sun Hee Kim ),김종환 ( Jong Hwan Kim ),박기대 ( Ki Dae Park ),최민정 ( Min Jung Choi ),권오석 ( Oh Seok Kwon ),오일웅 ( Il Ung Oh ),정승태 ( Seung Tae Chung ),홍성화 ( Seong Hwa Hong ),홍충만 ( Choong Man Hong ) 한국조직공학과 재생의학회 2010 조직공학과 재생의학 Vol.7 No.3

Adipose tissue-derived Stem Cells(ADSCs) are utilized as a useful resource in many cell-based therapies. The ADSCs are often cryopreserved for future use but some cryoprotectants may have harmful influence on the stem cell quality such as stemness or viability. In this study, we investigated the influence of cryoprotectants such as DMSO, FBS and disaccharides on cell quality. ADSCs were frozen with variable combinations of cryoprotectants. The cells were stored in liquid nitrogen for a given period. The cells were thawed and tested for viability with trypan blue, the proportion of ADSCs were determined by flow cytometry analysis and the multipotency of the cells was assessed by differentiation potential of the cells into osteocytes or adipocytes. In the preliminary study, FBS had no additional benefit on the cells and, thus, the use of cryopreservation solution with serum free and low concentration of DMSO(5%) is suitable for cryopreservation of ADSCs used for cell-based therapy. From these data, we studied cell viability, MSC phenotype and differentiation potential as parameter of stability assessment. In result, there was no significant changes of viability, phenotype and representative CD marker according to our freezing condition/duration and concentration or volume of final products.

대구·경북지방 곡류중의 Aflatoxin 생성균주의 오염에 관한 연구

김동술,문귀임,오일웅,오현숙,민충식,김은경,이삼룡,안경아,정영숙 식품의약품안전청 1998 식품의약품안전청 연보 Vol.2 No.-

대구·경북지역 농산물 중에 aflatoxin생성균주의 오염실태를 파악하기 위하여 고려, 문경, 상주, 안동, 포항, 성주, 경주, 김천, 구미, 예천, 영천, 영덕 등 12개 지역으로부터 쌀 66점, 보리 44점, 콩 94점, 당콩 36점, 조 37점, 토양 57점 등 총 334점을 수집하여 rose bengal, PDAmSLS, YES등의 배지를 사용하여 Aspergillus flavus및 parasiticus를 분리한 결과 12.6%인 42균주를 분리하엿으며 이들 중 TLC에서 형광을 나타내는 균주는 21%인 9균주였다. 또한 HPLC로 aflatoxin B₁생성능이 있는 균주를 확인하 결과 시룝점(콩)에서 분리되었으며 따라서 aflatoxin 생성능이 있는 aspergillus속 곰팡이으 ㅣ오염률은 0.3%이였다. In order to iBvestigate aflatoxin producing strains from agricultural products in the Taegu and Kyungpook dist·ricts, we collected 334 sarrlples svch as rice (66), barley(44), soybean(94), pea-nut(36), millet(37), soil(57). Using rose bengal, PDA, sLs, YES medium, we isolated the aflatoxin pro-ducing strains, fsfergiHur ffauHs and farasificur. As a result of screening by thin layer chromatography(TLC), 42 straius(21% ) from the 334 samples showed fluorescent spot. Aflatorin Bl was determinedfrom soybean(1) by HPLC- ln consequence, the contarHination percentage of fsfergiffHs sf. which pro-duce aflatoxiu sholved 0-3% .

재조합 인터페론 알파의 표준화에 관한 연구

김지현,신원,정자영,최영주,정지원,오일웅,진재호,김선미,정상미,이석호,손여원 식품의약품안전청 2001 식품의약품안전청 연보 Vol.5 No.-

우리나라에서 생산되고 있는 재조합 인터페론 알파-2 원액에 대하여 몫럽약전의 표준공통규격 설정 가능성을 확인하고 표준시험방법을 확립하기 위하여 국내에저 생산되고 있는 재조합 인터페론 알파-2· 원액에 데하석 제조사와 식품치약품안전청이 유끝약전(향P)의 재조합 인터페론 알파-2 원액의 시험방법에 따라 생물팔성시험, 전꾸영동시험(환원), 등전집속시험(IEF), 펩타이드지도 등의 확인시험, 전기영동시험(쏜원 ·비환원), 관련단백씨험(RP-HPLC), 인도톡신시험 등의 순도시험, 비활성시험, 숙주유래DN,L 시험, 숙주유래단백질시험 등의 시험을 수행하였다. 국내에서 생산되고 있는 두 회사 재조합 인떠페론 알파-2 원액에 대한 확인시험, 순도시험, 비활성시험 등의 시험 결과는 모든 시험항목에서 유럽약전의 기준에 적합한 것으로 나타나 국내에서 생산되고 있는 인터페론 알파-2 원액예 유럽약전의 표준시험방범을 적용하고 유럽약전 수준의 규격을 적용할 수 있느 가능성을 보여주었다. This study was intended to establish test methods equivalent to those of "Interferon alfa-2 concentrated solution" monograph in European Pharmacophoeia(EP). Two recombinant interferon alfa condition, peptide mapping), related proteins, impurities of molecular masses differing from that of interferon alfa-2(SDS-PAGE under reducing and non-reducing condition), bacterial endotoxin, protein, potency, host-cell-derived proteins, and host-cell or vector-derived DNA were performed in the laboratories of manufactures and division of biotechnology. KFDA. The results of this study showed that specifications of interferon alfa concentrated solutions manufactured in Korea were within the acceptance criteria of EP. Based on this study, specifications and test methods for interferon alfa concentrated solution can be established according to the monograph of EP, suggesting the revision of 「Minimum requirements for biological products」

재조합 인터페론 알파의 표준화에 관한 연구

손여원,신원,정자영,최영주,정지원,오일웅,진재호,박선영,박태성 식품의약품안전청 2000 식품의약품안전청 연보 Vol.4 No.-

우리나라에서 유통되고 있는 재조합 인터페론 알파의 역가시험을 표준화하기 위하여 국내제조 5개사,수입 1개사 및 식품의약품안전청이 참여하여 공동연구를 실시하였다. 공동연구 참여사의 역가시험법의 상대적인 감도와 상용표준품의 활성을 비교 ·보정하기 위하여 공통의 인터페론 알파 시험물질에 대하여 5회 이상의 독립적인 시험들 실시하고 시험결과의 정확도, 정밀포 및 재현성을 비교하였다. 보다 정확한 분석을 위하여 모든 참여사는 자사 제품의 품질관리에 적용되고 있는 역가시험법과 더불어 식품의약품안전청에서 제공한 참조씨험법을 함께 시험하였고 시험결과를 자사의 계산법과 동시에 평행선분석법으로 각각 계산하여 그 차이를 비교하였다. 그 결과 시험의 정밀도와 재현성은 각 참여사의 자사 뵉가시험법과 평행선분석법을 적용하였을 째 보다 우수하게 나타났고 대부븐의 참여사에서 1표시역가의 80%~l%', 신뢰구간 '표시울가의 64%~l56%' 내에 분포하여 상대적인 감도가 고르면서 정확포가 높았다. 또한 각 참여사의 자사 결과계산법과 평행선분석법 간의 차이를 't-Test'로 분석한 결과 유의한 차이를 나타내지 않았으며 모든 찹여사의 두 가지 시험법과 분석법으로부터 얻은 평균값들의 차이를 분석한 결과 유의한 차이를 나타내지 않아 모든 참여사의 인터페론 역가시헌이 '표준화'되어 있는 것으로 분석되었으며 평행선분석법 및 신뢰구간에 대한 적용가능성을 제시하였다. The specific activiw of recombinant interferons made by different manufacturers can vary and bioassay systems which are utilized to determine the biological potency ofinterferon may he affected by a number of factors, such as ceIB lines, viruses and the statisticalanalysis of the assay. Tllerefore the bioassay of interferon, like as other biological products, isessentially comparative and thus requires a fHxed reference standard and standardized assayconditions. A collaborative study was performed for standardization of interferon bloassay. Sixlaboratories of interferon Danufacturers and KFDA were participated in this study. Alllaboratories measured the potency of'the same inteferon samples'by their own routinemethods and the reference method which was offered by KFBA. The results were analysed byboth ways using their own data analysis methods and the usual statistical methods for aparallel line assay The relatiue sensitivities of each assay system and the potency of eachworking standard of the participants were compared by assessing the assay performance svchas accuracy, precision and reproducibility. The results showed best pr·ecision and reproducibiBitywhen the potency was measured by the manufacturer's routine methods and calculated byparallel line analysis. Tte estimated potency was from 80% to 125% and the confidence limitwas from 64% to 156% of the stated potency in most laboratofes, which showed goodaccuracy. Differences in data analysis between the manufacturer's routine analytical method andthe Parallel line assay were not significant by't-Test'and differences in all results fromroutine assay and reference assay also were not significant by'analysis of valiance'. Based onthe results of the collaboriltive study, all participants were'standardized'in the interferonbioassay and we may consider the change of the data analysis of Inteferon potency to thestatistical method for a parallel line assay.