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- 저자 : 류강 (검색결과 17 건)
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류강,정원,압둘 무탈립 한국산업경영시스템학회 2010 한국산업경영시스템학회 학술대회 Vol.2010 No.춘계
제품의 제제조에 관한 연구는 최근 녹색사업(green business)으로서 주목을 받고 있는 청정생산 중 재활용의 한 부분으로서 관심을 받고 있다. 본 연구의 목적은 리스크분석방법을 활용하여 재제조 가능성을 진단하는 실용적 기술을 개발하는 것이다. 본 연구에서는 재제조 설계과정에서 리스크평가를 지원하기 위해 각 프로세스의 안전수준을 반영할 수 있는 위험성분석표와 리스크 분류매트릭스를 개발하였다. 평가를 위한 분석표는 고품(core)을 재제조할 가치가 있는지에 대한 의사결정을 하는데 필요한 기준자료가 된다.
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Alcaligenes faecalis에 의한 $\beta$-glucan의 생합성과 구조 분석
류강,이기영,이은규,Ryu, Kang,Lee, Ki-Young,Lee, Eun-Kyu 한국생물공학회 2001 KSBB Journal Vol.16 No.4
본 연구에서는 Alcaligenes faecalis에 의해 생산되는 세포 외 다당류인 $\beta$-glucan의 생합성에서 탄소원, 질소원의 영향과 생합성된 curdlan의 구조를 살펴보았다. 먼저 $\beta$-glucan의 생합성을 확인하기 위해 Aniline Blue 배지에서 청색 colony들을 선별하고 Cellufluor 배지에서 형광성을 보임으로 $\beta$-1,3 glucan의 생합성을 확인하였다. Flask 배양에서는 탄소원이 glucose이고 질소원이 ($NH_4$)$_2$$SO_4$일 때 가장 많은 $\beta$-glucan을 생산하였다. 탄소원을 glucose로 질소원을 (NH$_4$)$_2$$SO_4$로 사용한 발효조 배양에서는 flask 배양에 비해 생산량이 7.2%가 증가되었다. 질소원을 제한한 발효에서는 최종 생산수율이 38.82%였고 질소원을 제한하지 않은 발효보다 3.02%가 증가 되었다. 분리 정제된 curdlan의 FT-IR의 분석에서는 지문영역인 890$cm^{-1}$ /에서 $\beta$-form이 관찰되었고 $^{13}C$-NMR 분석에서는 $C_1$-103.5 ppm, $C_2$-74.3 ppm, $C_3$-89.8 ppm, $C_4$-68.8 ppm, $^{5}C$-75.5 ppm, $C_2$-61.8 ppm에서 검출되어 homogeneous $\beta$-1,3 glucan으로 확인되었다. curdlan의 triple-helix coil 형태에서 random coil 형태로의 전이는 0.1에서 0.25 N NaOH의 농도에서 일어남이 확인되어 중성 상태의 curdlan은 triple-helix coil 형태를 가지지만 알칼리 상태에서는 그 구조가 약해져 random-coil로 전이 되어짐을 알 수 있었다. 이는 본 연구에서 분리 정제된 curdlan이 정확한 $\beta$-결합을 가진 glucan임이 확인되었으며 생합성된 curdlan의 구조와 분자적인 특성을 확인하였다. 본 연구를 통하여 $\beta$-결합을 가지는 glucan의 신속한 선별법을 구축할 수 있었고 이는 새로운 기능을 가지는 $\beta$-glucan 생합성 효소나 분해효소의 탐색에 이용될 것으로 기대된다. Biosynthesis of curdlan( ${\beta}$-1,3 glucan) was shown by fluorscence on cellufluor medium. The highest production of curdlan was produced when glucose was used as a carbon source and ($NH_4$)$_2$$SO_4$ was used as a nitrogen source. ${\beta}$ -form of curdlan was detected in the fingerprint region (890 $cm^{-1}$) by FT-IR spectrum and shown homogeneous ${\beta}$ -1,3 glucan by $^{13}C$ NMR spectrum ($C_1$-103 ppm, $C_2$-73.2 ppm, $C_3$-86.4 ppm, $C_4$-68.7 ppm, $C^{5}$-76.63 ppm, $C_{6}$-61.2 ppm). Transition of structure from triple helix coil form to random coil form was appeared at 0.1 ∼0.25 M NaOH concentration. It was shown that natural curdlan is a triple helix form in neutral but becomes weak in alkaline condition.
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Alcaligenes sp. SH-69에서의 Poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) 생합성 및 분해
류강은,최강국,박상규,김영백,이영하,Ryu, Kang-Eun,Choi, Gang Guk,Park, Sang Kyu,Kim, YoungBaek,Rhee, Young Ha 한국미생물학회 1998 미생물학회지 Vol.34 No.4
Alcaligenes sp. SH-69에서 탄소원의 고갈 또는 새로운 탄소원의 첨가시 포도당을 단일탄소원으로 하여 생합성된 poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) [poly(3HB-co-3HV)] 공중합체의 물질대사 변화 양상을 조사하였다. 회분배양 과정 중 탄소원이 고갈된 후에는 세포 내에 축척되었던 poly(3HB-co-3HV) 공중합체의 분해가 일어나 고분자 함량의 감소와 함께 무게평균 분자량도 감소하였다. 분해 과정 중에는 저분자량의 PHA에 비하여 상대적으로 고분자량의 PHA양이 크게 감소하여 평균 분자량 분포가 보다 낮은 방향으로 이동되는 양상을 보였다. 이에 반하여 1차 탄소원(기질)으로 사용된 포도당의 고갈 직후 2차 기질로서 포도당과 함께 3HV의 전구물질인 levulinic acid를 혼합기질로 첨가해 주었을 경우, 세포 건체량의 지속적인 증가와 아울러 3HV 함량이 높은 poly(3HB-co-3HV) 공중합체의 합성이 이루어졌다. 그러나 아세톤을 이용한 고분자의 분획 실험 결과, 2차 기질로부터의 poly(3HB-co-3HV) 공중합체의 생합성과 1차 기질로부터 생합성된 공중합체의 분해가 동시에 일어나며, 또한 각 기질로부터 생합성된 고분자가 단지 3HV의 함량이 다른 poly(3HB-co-3HV) 공중합체임에도 불구하고 혼합물 형태로 존재하고 있음을 확인하였다. The cyclic metabolism of poly(3-hydroxyhutyrate-co-3-hydroxyvalerate) synthesized from glucose by Alcaligenes sp. SH-69 in the presence or absence of new carbon substrate was investigated. In batch culture, the content and weight average molecular weight of the copolymer already stored in the cell decreased rapidly when there was no other carbon source available. After the depletion of carbon source, the amount of high molecular weight copolymer decreased more rapidly than that of low molecular weight copolymer, and as a result, average molecular weight distribution shifted to the lower value. The addition of a mixture of glucose and levulinic acid when the initial carbon substrate, glucose, was nearly depleted supported the continual increase in cell mass and the accumulation of poly(3HB-co-3HV) with high molar fraction of 3HV. However, solvent fractionation of the polymer with acetone revealed the degradation of pre-existing polyhydroxyalkanoale (PHA) in parallel with the synthesis of PHA from new carbon substrate. Even though PHAs obtained from each substrate alone were the copolymer of 3HB and 3HV, it was found that the polymer accumulated in the cells grown by sequential feeding was mainly physical mixture of two poly(3HB-co-3HV) copolymers containing different molar fractions of 3HV.
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Pseudomonas sp. RY-1에 의한 Medium-chain-length Polyhydroxyalkanoates의 생분해
류강은,김영백,양영기,이영하 한국미생물학회 2000 미생물학회지 Vol.36 No.2
Psudomonas sp. RY-1이 생성하는 extracellular depolymerase system을 이용하여 단위체의 결가지에 서로 다른 탄소 길이와 불포와기를 함유하는 medium-chain-length polyhdroxyalkanoates (MCL-PHAs)의 생분해도를 시럼실 조건에서 조사하였다. 생분애도는 평파내지에서의 clear zone 형성, 효소 처리에 의한 고분자 현탁액의 탁도 감소 및 호흡량의 경시적 변화로 측정하였다. Pseudomonas sp. RY-1은 MCL-PHA depolymerase의 생성을 통하여 조사된 모든 종류의 MCl-PHAs를 분해할 수 있었으나, 이 효소의 생성은 쉽게 이용될수 있는 이차기질에 의해 저해받는 것으로 나타났다. MCl-PHAs의 분해율이 단위체의 탄소수가 홀수개로 구성된 고분자에 비하여 보다 높았다. 곁가지에 분포화기를 함유한 MCl-PHAs는 불포화기를 갖지 아니하는 고분자에 비하여 분해가 빠르게 이루어졌으며, 이들의 분해는 고분자의 결정화도와 밀접한 관련이 있는 것으로 나타났다. Biodegradation of vanous medium-chain-length polyhydroxyalkanoates (MCL-PHAs) by an extracellular depolymerase system from Pseudomonas sp. RY-1 was investigated under laboratoly conditions. The degradation rate of the polymers was determined by quantitative clem zone technique, enzyme (turbidity) assay, and respirometry assay. Although the enzyme system secreted by Pscudomor~as sp. RY-1 was capable of degrading all MCL-PHAs tested. its secretion was influenced by the availability of secondary carbon sources. The rate of enzymatic degradation of MCL-PHAs was dependent upou the monomeric composition of the polyesters and reduced as the chain lengths of the monomer m t s in the polyesters increased. MCL-PHAs containing C-even monomer units showed faster degradation rate than MCL-PHAs containing C-odd monomer units. Respiration rates of MCL-PHAs with C-even monomer uuts were also much faster than those of MCL-PHAs with C-odd monomer units. The degmdation rate of MCL-PHAs bearing unsaturated substituents was faster than that of mcl-PHAs without functional substituents, which is suggesting the correlation between the degradation rate and the crystallinity of MCL-PHAs.
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Solid-phase Refolding of Poly-lysine Tagged Fusion Protein of hEGF and Angiogenin
이은규,채영규,류강,박승국,Sang Joong Park,Chang Woo Suh,Oh Byung Kwon 한국생물공학회 2002 Biotechnology and Bioprocess Engineering Vol.7 No.1
A fusion protein, consisting of a human epidermal growth factor (hEGF) as the recognition domain and human angiogenin as the toxin domain, can be used as a targeted therapeutic against breast cancer cells among others. The fusion protein was expressed as inclusion body in recombinant E. coli, and when the conventional, solution-phase refolding process was used the refolding yield was very low due to severe aggregation. It was probably because of the opposite electric charge at a neutral pH resulting from the vastly different pI values of each domain. The solid-phase refolding process that exploited the ionic interactions between ionic exchanger surface and the fusion protein was tried, but the adsorption yield was also very low, below 30%, regardless of the resins and pH conditions used. Therefore, to provide a higher ionic affinity toward the solid matrix, six lysine residues were tagged to the N-terminus of the hEGF domain. When heparin-Sepharose was used as the matrix, the adsorption capacity increased 2.5-3 times to about 88%. Besides the intrinsic affinity of angiogenin to heparin, the poly-lysine tag provided additional ionic affinity. And the subsequent refolding yield increased nearly 13-fold, from ca. 4.8% in the conventional refolding of the untagged fusion protein to 63.6%. The process was highly reproducible. The refolded protein in the column eluate retained RNase bioactivity of angiogenin.
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