Aeromonas caviae No. S-76이 생산하는 Pullulanase의 정제, 특성 및 Maltosyl-β-Cyclodixtrin의 합성

손천배,김명희,이명자 충남대학교부설 생명공학연구소 1992 생물공학연구지 Vol.2 No.-

The crude enzyme solution obtained by shaking culture of Aeromonas caviae No. S-76 isolated from soil as pullulanase producing bacterium was purified by 50 folds with 21% yield by salting out with ammonium sulfate and column chromatography using DEAE-Sephadex A-50 and Sephadex G-150. The purified pullulanase had a molecular weight of 118,000 approximately by SDS-polyacrylamide slab gel electrophoresis and pI of 4.3 by isoelectric focusing. And optimum reaction temperature and pH for pullulanase were 50℃ and 8.0, respectively. The purified enzyme was relatively stable at pH 6.0∼9.0 and below 45℃. This enzyme synthesized maltosyl-β-cyclodextrin from mixture of β-cyclodextrin and maltose.

호알칼리성 Bacillus sp. No. 4의 Cyclodextrin Glycosyltransferase에 의한 Glycosyl Sucrose의 생산과 저충치성 당으로서의 응용

손천배,유미경,김명희,문숙경 충남대학교부설 생명공학연구소 1992 생물공학연구지 Vol.2 No.-

Action of a cyclodextrin glycosyltransferase (CGTase) produce from alkalophilic Bacillus sp. No. 4 was studied in a solution containing starch and sucrose to prepare glycosyl sucrose syrup with good sweetness and antidecaying properties of teeth. In the initial stage of the reaction the CGTase produced cyclodextrin, however, the cyclodextrin disappeared and glycosyl sucrose was formed with the lapse of reaction time. The best proportion of sucrose to starch for prodution of glycosyl sucrose was about 1 : 1. The optimum pH and temperature of the coupling reaction was pH 6.0 and 60℃, respectively. Main composition of glycosyl sucrose syrup prepared with 20% starch and 20% sucrose was sucrose 18%, glucosyl sucrose (G_2F) 15.3% and amltosyl sucorse (G_3F) 11.3%. And glucose, maltose and maltotriose were produced very little. Smaller amounts of acid and insoluble glucan were formed in the syrup by Streptococcus mtans OMZ176 than in the sucrose. Therefore, the prepared glycosyl sucrose sucrose syrup is expected to prevent teeth from decaying.

지단백과 알부민 및 이들의 변형물질이 메산지움세포 증식에 미치는 영향

손일석,이태원,박재경,김희진,조병수,임천규,김명재 대한신장학회 2002 Kidney Research and Clinical Practice Vol.21 No.2

목 적 : 혈청 지단백과 알부민은 그 자체로써 또는 산화나 당화 과정에 의한 변형을 거쳐 사구체 질환을 진행시킬 수 있는 것으로 알려져 있다. 그 기전은 분명하지는 않으나 메산지움세포 증식과 관련이 있는 것으로 알려져 있다. 저자들은 비교적 간단한 흡광도측정법을 이용하여 지단백과 알부민 및 그들의 변형물질들이 각각 메산지움세포 증식에 미치는 영향을 알아보고자 하였다. 방 법: 정상인의 혈청 지단백을 원심분리 하여 저밀도지단백, 고밀도지단백, 초저밀도지단백을얻고, 산화 저밀도지단백, 당화 저밀도지단백, 그리고 혈청 알부민과 당화 알부민을 각각 농도를 달리하여 배양 중인 인간 메산지움세포에 가한 후 흡광도를 측정함으로써 메산지움세포의 증식정도를 알아보았다. 양성 대조군으로 interleukin-1β를 이용하였다. 결 과: 저밀도지단백은 농도 증가시 50 μg/mL와 100 μg/mL에서 세포의 증식을 보였으며,고밀도지단백과 초저밀도지단백은 농도에 따른 유의한 변화가 없었다. 산화 저밀도지단백은5 μg/mL에서부터 세포의 증식을 초래한 후 10 μg/mL와 25 μg/mL에서도 이를 유지하였다. 당화 저밀도지단백은 농도 증가에 따라 10 μg/mL와 100 μg/mL에서 세포의 증식을 억제하였다. 알부민은 농도 500 μg/mL에서 세포 증식을 억제하다가 고농도(1,000 μg/mL)에서는 영향이 없었으며, 당화 알부민 역시 100 μg/mL의 적은 농도에서는 억제효과를 보였으나 고농도(1,000 μg/mL)에서는 오히려 증식을 일으키는 결과를 보였다. 결 론: 저농도에서 저밀도지단백과 산화 저밀도지단백은 사람 메산지움세포의 증식을 초래하였으며, 당화 저밀도지단백은 증식을 억제하였다. 알부민은 일정농도까지 사람 메산지움세포의 증식을 억제하다가 고농도에서는 영향이 없었으며, 당화 알부민도 일정농도까지 증식 억제 효과가 있다가 고농도에서는 오히려 증식을 초래하는 양상을 보였다. Background : Modified lipoproteins may be involved in nephro- and glomerulosclerosis. Diabetic nephropathy-like lesions have also been induced in a rat model by glycated and glycoxidized albumin. In cultured rat or human mesangial cells, enhanced cell proliferation and production of mesangial matrix in response to lipoproteins and their modified forms have been demonstrated by [3H]-thymidine incorporation and cell counting assays. But these methods are relatively complex and most of them have used only one or two of the lipoprotein, albumin and their modified forms. Methods : We investigated the effects of native and modifed lipoproteins, and albumin on cultured human mesangial cell proliferation using non-radioactive colorimetric method by MTS/PMS assay. Lipoproteins added were low density lipoprotein(LDL), high density lipoprotein(HDL), very low density lipoprotein(VLDL), oxidized LDL(oxidation with copper sulfate in vitro) and glycated LDL and we also used albumin, glycated albumin, and interleukin-1β as a positive control. Results : Interleukin-1β promoted the proliferation of cultured human mesangial cells up to concentration 20 ng/mL. LDL induced the proliferation of mesangial cells in a concentration-dependent manner up to concentration 100 μg/mL. HDL and VLDL had no significant proliferative effect. Oxidized LDL caused the proliferation of mesangial cells at low concentration up to concentration 25 μg/mL. Addition of glycated LDL resulted in a concentrationdependent inhibition of mesangial cells. Albumin and glycated albumin inhibited the proliferation of mesangial cells at low concentration of 100 μg/mL, but cell growth was increased at higher concentrations. Conclusion : We demonstrated the effects of the single and modified proteins on the proliferation of cultured human mesangial cell by relatively simple colorimetric method. Results were almostly identical to those of previous studies obtained by radioactive method or cell counting assay. (Korean J Nephrol 2002;21(2):266-275)

Pullulanase를 생산하는 Aeromonas caviae No. S-76의 특성과 배양조건

손천배,김명희,이명자 충남대학교부설 생명공학연구소 1992 생물공학연구지 Vol.2 No.-

A bacterial strain No. S-76 which produced pullulanase powerfully was isolated from soil. The isolated bacterium was 0.4∼0.6×0.8∼1.4 ㎛ in size, gram negative, rods, motile and was identified as Aeromonas caviae by Bergey's manual of determinative bacteriology with various characteristics investigated. The highest yield of pullulanase of the strain was obtained by using the following medium: 1% pullulan, soluble starch or corn starch as a carbon sources and 0.5% yeast extract, peptone as nitrogen sources with an initial pH of 9.0. The optimal culture conditions for production of pullulanase were at 32℃ for 2 days.

Γ-Cyclodextrin Glycosyltransferase 생산균주의 분리, 동정 및 효소 생산조건

김명희,손천배,임영희,배경숙,오태광 대전대학교 이과대학 기초과학연구소 1997 自然科學 Vol.- No.-

Cyclodextrin glycosyltransferase 생산균주를 토양으로부터 분리하여 형태학적, 생화학적 그리고 균주의 세포벽 지방산 조성분석에 의해 Bacillus brevis로 동정하였고, Bacillus brevis CD162로 명명하였다. 또한 배지조성에 따른 cyclodextrin glycosyltransferase의 최적생산조건을 검토한 결과, 2.0% soluble starch, 0.75% yeast extract, 0.5% bacto peptone, 0.2% KHPO₄, 0.05% MgSO₄·7H₂O, 1.5% Na₂CO₃ (pH 10.2)의 배지 조건에서 30℃에서 96시간 배양하였을 때 가장 높은 효소생산인 0.9 unit/ml을 얻을 수 있었다.(1997년 7월 10일 접수, 1997년 11월 21일 수리) A cyclodextrin glycosyltransferase-producing bacterium was newly isolated from soil using alkaline pH medium containg 1% Na₂CO₃, The isolated strain was identified as Bacillus brevis by morphological and biochemical characteristics, and designated Bacillus brevis CD162. The strain showed the best enzyme production of 0.9 unit/ml after 96 hrs of culture at 30℃ in a medium of 2.0% soluble starch, 0.75% yeast extract, 0.5% bacto peptone, 0.2% K₂HPO₄, 0.005% MgSO₄·7H₂O and 1.5% Na₂Co₃at initial pH 10.2

만성 승모판 패쇄부전증 환자에서의 안지오텐신 전환효소 억제제의 장기 투여 효과

김대희,이명묵,이해영,조현재,박승정,서재빈,서정원,양한모,윤창환,조상호,이준희,김용진,김명아,손대원,오병희,박영배 대한순환기학회 2004 Korean Circulation Journal Vol.34 No.2

정서유발단어에 대한 주의이동시 뇌신경망의 활성 양상

김연희,장은혜,고명환,신승훈,양경혜,손진훈 한국뇌학회 2002 한국뇌학회지 Vol.2 No.2

본 연구는 fMRI를 사용하여 정서유발단어에 의한 주의이동과 관련한 뇌신경망을 규명하기 위하여 12명의 오른손잡이 여대생을 대상으로 수행하였다. fMRI 실험을 위한 뇌활성화 과제는 예비실험을 통하여 선정된 행복, 슬픔, 위협에 해당하는 각각 36개씩의 단어와 각 단어의 짝을 이루기 위한 중성단어를 이용하여 변형된 Posner 패러다임을 블록디자인으로 고안하였다. fMRI 영상은 1.5T Simens Vision scanner를 사용하여 실시하였으며, single-shot EPI 기법으로(TR/TE:3840/40ms, flip angle: 90, FOV: 220, 64x64 matrix, Slice thickness: 6mm) 이미지를 얻었고 피험자의 반응시간을 기록하였다. 자료분석은 SPM-99 소프트웨어를 사용하였다. 정서유발단어는 중성단어에 비하여 반응시간이 의미있게 빨라 효과적인 주의이동이 일어났음을 알 수 있었다. 정서유발단어와 중성단어에 의한 뇌활성화 상태를 감산분석한 결과, 좌측 상두정엽, 양측 후두엽 및 소뇌에서 뇌활성화를 보였고, 이들 영역은 정서유발단어에 의한 주의이동시 특징적으로 활성이 일어나는 뇌영역임을 보여주었다. 또한 여러 가지 정서가를 가진 단어에 의해 유발되는 주의의 정도가 특징적인 신경망의 활성과 관련되어 있음을 알 수 있었다. The purpose of this study is to delineate the neural network related to the shift of attention and its modulation by emotion-provoking words using functional MRI (fMRI). Twelve right-handed normal female volunteers participated in fMRI study. Their mean age was 24 years and the mean modified Edinburgh score was +90. Emotion-provoking words representing happy, sad, threatened, and neutral emotional valences respectively were chosen by the assessment of 60 normal volunteers using semantic differentiation and Mannequin scales. The activation tasks were designed using modified Posner's paradigm to have 4 blocks of each emotional and control periods, Imaging was conducted on a 1.5T Siemens Vision scanner. Single-shot echoplanar images (TR/TE = 3840/40 ms, flip angle = 90, FOV = 220, matrix = 62 ? 64, slice thickness = 6㎜) were acquired in 20 contiguous slices parallel to the AC_PC line as well as conventional T1-weighted images. Response times were obtained during the scanning, Imaging data were realigned, coregistered, normalized, smoothed, and statistically analyzed in group using SPM-99 software. The results showed that emotional valence of word stimuli produced the effect of attentional engagement. The left superior parietal, inferior frontal, bilateral occipital lobes and cerebellum were main area of modulation of attentional network by emotional words stimuli. The different extent of brain activation induced by different emotion-provoking words were determined.

Bacillus brevis CD162 Cyclodextrin Glycosyltransferase의 정제 및 특성

김명희,손천배,임영희,오태광 대전대학교 이과대학 기초과학연구소 1997 自然科學 Vol.- No.-

Bacillus brevis CD162가 생산하는 cyclodextrin glycosyltransferase (CGTase)를 ammonium sulfate 침전, DEAE-Sephadex CL-6B 및 Sephadex G-150 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 분리정제하였다. 정제된 CGTase는 분자량이 약74.000, 등전점은 약 6.3인 단백질이었고, 정제된 단백질을 SDS-PAGE한 후 변성된 단백질을 재활성시켜 zymogram을 수행한 결과 cyclodextrin glycosyltransferase임을 확인할 수 있었다. 이 효소의 최적활성 pH와 온도는 각각 8.0과 55℃이었으며, pH 5.5~9.0과 50℃까지 안정한 활성을 보였다. 또한, CGTase의 NH₂-말단 부위의 아미노산서열은 Ser-Val-Thr-Asn-Tyr-Ser-Lys-Asp-Val-Ile-Tyr-Gln 이었으며, 전분으로부터 cyclodextrin으로의 전환률을 분석한 결과, α-cyclodextrin은 1.3%, β-cyclodextrin은 33.9%, γ-cyclodextrin은 9.7% 이었다(1997년 7월 10일 접수, 1997년 9월 25일 수리) The cyclodextrin glycosyltrasferase (CGTase, EC 3.2.1.19) from Bacillus brevis CD162 was purified by precipitating with ammonium sulfate, DEAE-Sepharose CL-6B column chromatography and Sephadex G-150 column chromatography. The molecular mass and pI of the purified enzyme were estimated to be 74,000 and 6.3 by SDS-PAGe and isoelectric focusing, respectively. The purified enzyme was clearly identified as the CGTase by zymogram after SDS-PAGE. The optimum pH and temperature for the enzyme activity were 8.0 and 55℃, respectively. The enzyme was stable at the range of pH 5.5~9.0, and up to 50℃. The amino acid sequence from the NH₂-terminal of the purified CGTase was Ser-Val-Thr-Asn-Lys-Val-Asn-Tyr-Ser-Lys-Asp-Val-Ile-Tyr-Gln. The yields of the products from starch as the substrate were 1.3% for α-,33.9% for β-, and 9.7% for γ-cyclodextrin.

홍역 후 발생된 급성 뇌염 진단시 Tc-99m ECD 뇌혈류 SPECT의 임상적 유용성

임석태,손명희 대한핵의학회 2003 핵의학 분자영상 Vol.37 No.4

목적 : 홍역 감염 후 속발되는 뇌염은 사망률이 높아 조기진단 및 적극적인 치료가 예후에 중요하다. 저자들은 홍역 후 발생된 뇌염에 대한 Tc-99m ECD 뇌혈류 SPECT와 뇌핵자기공명영상(MRI)의 진단 성능을 비교하였고 뇌혈류 SPECT상 중등도 이상의 심한 뇌혈류 감소가 호발하는 부위를 알아보았다. 대상 및 방법 : 홍역으로 진단받은 112명 중에서 의식저하, 경련, 마비 등의 임상증상과 혈청 및 뇌척수액에서 홍역 특이항체가 관찰되어 홍역 후 급성 뇌염으로 진단받고 Tc-99m ECD 뇌혈류 SPECT와 MRI를 시행받은 11명(M : F=4, 연령 1.6∼14세)을 대상으로 하였다. SPECT상 관찰되는 뇌혈류는 0(정상)에서 3(결손)으로 점수화하였고 2점 이상인 경우를 중등도 뇌혈류 감소로 정의하였다. 홍역 후 발생된 뇌염 환아에서 MRI와 SPECT의 두부병소 진단 성능과 중등도 뇌혈류 감소의 호발부위를 알아보았다. 결과 : MRI 시행결과 7명(63.6%)에서 T2-강조영상에서 회백질의 고강도 변화가 관찰되었으나, SPECT상 11명(100%) 모두에서 뇌혈류 감소 부위가 관찰되었다. 중등도 뇌혈류 감소는 전두엽(81.8%), 측두엽(72.7%), 후두엽(27.3%), 기저핵(27.3%), 두정엽(9.1%) 순서로 호발하였다. 결론 : 홍역 후 발생된 뇌염 환아에서 두부병소를 진단하는데 MRI에 비하여 Tc-99m ECD 뇌혈류 SPECT가 좀더 도움이 될 것으로 사료된다. Purpose : since the prognosis of measies encephalitis is poor, early diagnosis and proper management are very important to improve clinical outcomes. We compared Tc-99m ECD brain SPECT (SPECT) with MR imaging (MRI) for the detection of acute measles encephalitis. Materials and Methods : Eleven patients (M : F=4 : 7, age ragne 18 months-14 yrs) with acute measies encephalitis were enrolled in this studies. All of them underwent both MRI and SPECT. The results of SPECT were scored from 0 (normal) to 3 (most severe defect), according to perlusion state. We compared two image modalities for the detection of brain abnormality in acute measles encephalitis. Results : Seven of 11 patients (63.6%) revealed high signal intensity in the white matter on T2WI of MRI, on the other hand all patients (100%) showed hypoperfusion on SPECT. Severe perfusion deficits above score 2 were located with decreasing frequencies in the frontal lobe (81.8%), temporal lobe (72.7%), occipital lobe (27.3%), basal ganglia (27.3%), and parietal lobe (9.1%). Conclusion : We conclude that SPECT is more useful than MRI for the detection of brain involvement in patients with acute measles encephalitis.

N/O/N 박막 다이아프레임을 이용한 광섬유 압력센서의 제작 및 그 압력특성

유양욱,김명규,박동수,김창원,김진섭,이정희,손병기 경북대학교 센서기술연구소 1995 센서技術學術大會論文集 Vol.6 No.1

The 0.6 μm N/O/N triple layer, Si_(3)N_(4)(150 nm)/SiO_(2)(300 nm)/Si_(3)N_(4)(150 nm), was deposited on silicon substrate and the N/O/N thin film diaphragm was formed using anisotropic etching technique. The stress of the formed diaphragm was very small with temperature variations. Combining this diaphragm and the optical fiber, intensity-type pressure sensor was fabricated and its pressure characteristics were investigated. The relation between the optical output power, inversely proportional to the deflection of the diaphragm, and the applied pressure was almost linear in 0~77 torr range.