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        헌혈자 보관검체 보존방법 안정성 연구(1차년도)

        오덕자,우경남,윤지연,김재석,박해준,황유성,윤경원,이재숙,강재원,서혜준,윤만정,서인범,하미나,권소영 대한수혈학회 2009 大韓輸血學會誌 Vol.20 No.2

        Background: The Korean Red Cross (KRC) has stored blood donor samples for 10 years under −20℃ since 2004. These samples have been used for investigating transfusion related infections and for Look-back studies. We designed an experimental scheme to verify the stability of stored blood samples. Methods: We collected and prepared samples such as blood donor samples (HBV, HCV, HIV nucleic acid positive; n=90), the HIV infected patient samples (n=20), the WHO nucleic acid international standards serologic positive samples (HBsAg, anti-HCV, anti-HIV; n=120) and the negative samples (n=20). The samples were aliquoted in cryo tubes with volumes of 0.5∼5 mL and they were stored at −20∼−30℃ and −70∼−80℃. We used enzyme immunoassay, chemiluminescence immunoassay and quantitative PCR for the base line and the follow up studies. The linear mixed statistical model using SAS 9.1 for windows was used for statistical analysis. Results: The results of the baseline test of the stored samples showed a variable range of viral load (101∼107 IU/mL or copies/mL) and optical density (S/CO 3.0∼500). The results of the stored samples after 6 month (n=82) did not show any significant differences compared to the baseline data for the viral loads (P>0.05) and the qualitative serologic tests. Conclusion: We established an experimental scheme to verify the stability of the stored blood donor samples. From now on, the stability of the stored samples is going to be monitored by every 6 month for 10 years. 배경: 대한적십자사는 2004년 1월부터 헌혈자 검체를 −20℃ 이하에서 10년간 보존하고 있으며, 이 검체들은 수혈부작용이나 look back 조사를 위하여 사용되고 있다. 본 연구자들은 장기적으로 보관되고 있는 헌혈자 검체의 안정성을 검증하기 위한 실험적 방법을 구축하고자 하였다. 방법: 본 연구의 대상은 HBV, HCV, HIV 핵산 양성 헌혈자 검체(n=90), HIV 감염자로부터 확보된 HIV 핵산 양성 검체(n=20) WHO HBV, HCV, HIV 핵산 국제표준물질, 혈청학적 검사 양성 헌혈자 검체(n=120) 및 혈청학적 검사 음성 헌혈자 검체(n=20)로, 수집된 이후 동결튜브에 0.5∼5 ml씩 소분하여 −20∼−30℃ 및 −70∼−80℃에 보관하였다. 보관개시 및 추적검사에 사용된 검사는 효소면역검사법, 형광면역검사법 및 핵산정량검사법을 사용하였다. 검사 결과는 SAS® 9.1 프로그램을 이용한 Linear mixed statistical model을 사용하여 분석되었다. 결과: 연구대상 검체의 기본검사결과 핵산농도는 101∼107 IU/mL (copies/mL)의 분포를 보였고 혈청학적 검사의 흡광도 분포도 다양하였다(S/CO 3.0∼500). 본 연구의 1차년도 추적검사의 대상이 되는 82검체에 대한 추적검사결과는 기본검사결과와 비교하여 핵산농도나 정성적인 혈청학적 검사결과에서 유의한 차이를 보이지 않았다(P>0.05). 결론: 본 연구에서는 장기적인 보관 검체의 안정성에 대한 검증을 위한 실험 설계를 완료하였고 앞으로 10년간 6개월의 간격으로 추적검사를 실시하며 보관 검체의 안정성을 검증해갈 것이다.

      • 임상 검체에서 중합효소연쇄반응을 이용한 C형 간염 바이러스의 검출

        홍승복,우경남,이도훈,최윤미 충북대학교 의과대학 충북대학교 의학연구소 1996 忠北醫大學術誌 Vol.6 No.1

        C형 간염 바이러스는 RNA 바이러스로 현재 항원의 일부인 C-100-3에 대한 항체를 검출하므로써 HCV 감염의 진단에 널리 이용되고 있다. 그러나 현재 사용되고 있는 효소면역 측정법은 예민도는 매우 높으나 거기에 따른 위양성의 결과가 많다고 보고되어, 그에따른 문재점이 대두되고있다. 따라서 검사 결과의 특이도를 높임과 동시에 실질적으로 검사실에서 쉽게 이용할 수 있는 새로운 검사법의 도입이 절실히 요구된다. 이에 본 연구자들은 분자 생물학적 기법중 하나인 중합효소 연쇄반응을 이용하여 실제 임상 검체에서 HCV의 RNA를 검출하므로써 민감도뿐만 아니라 특이도를 높일 수 있는 검사 기법으로써의 유용성을 평가하고자 하였다. 연구는 간염 바이러스의 감염이 의심되는 총 67 검체를 대상으로 실시하였고 검체는 혈청을 이용하여 acid guanidium thiocyanate-phenol chloroform 방법으로 RNA를 추출하고 비구조성 유전자의 5'-noncoding 부위에 해당되는 부위를 primer로 사용하여 중합효소 연쇄반응을 실시하였다. 본 연구에서 동시에 같이 실시한 anti-HCV 항체 검사는 microparticle enzyme immunoassay 방법을 이용하였고 4가지의 recombinant 단백질인 c200, c22-3, HC-34, HC-31에 대한 항체를 검출할 수 있다. RT-PCR 검사 결과, PCR 양성인 11명 중 9명에서 anti-HCV 항체가 검출되었으며, anti-HCV 항체가 음성인 30명은 모두 RT-PCR에서 음성을 보였다. RT-PCR 상 음성인 51명 중 30명은 anti-HCV 항체가 검출되지 않았으나 10명에서는 항체가 검출되었다. ALT 수치 변화에 따른 비교를 살펴보면 RT-PCR과 anti-HCV 항체 양성자의 ALT 분포도를 살펴보면 40 UI/L 이하로 정상인 경우는 RT-PCR 양성 중에는 2명 (18.2%)이었고, anti-HCV 항체 양성 중 9명 (47.4%)이었다. 40 UI/L 이상으로 증가된 경우에서는 RT-PCR 양성 중 9명(81.82%), anti-HCV 항체 양성 중 10명 (52.6%)이었다. 이상의 결과에서 C형 간염을 진단하기 위한 검사법으로는 민감도는 높으나 특이도에 문제가 있는 anti-HCV 항체 검사 결과의 신빙도를 높이기 위해서는 RT-PCR을 이용해 C형 간염의 감염 여부를 확진함이 필요할 것으로 사료된다. The enzyme immunoassay test is a very sensitive method to detect anti-HCV antibody but this is known to have high false positive rate. It is necessary to have another method to diagnosis hepatitis C viral infection. As a new method tool, we evaluated the polymerase chain reaction method to detect HCV RNA. A reverse transcription PCR was compared with the enzyme immunoassay in samples which were requested for anti-HCV antibody test. Of the 19 anti-HCV antibody positive samples, 9 were also positive for RT-PCR. Among RT-PCR positive 11 samples, none of all showed negative for anti-HCV antibody. The prevalence of HCV RT-PCR of the liver disease was 45.5% in the chronic hepatitis, 27.2% in liver cirrhosis, 27.3% in other liver disease. The positivity of RT-PCR was also higher in group had elevated serum ALT level than in group with normal serum ALT level. We concluded that HCV RT-PCR can be the additional test for the confirmation of anti-HCV antibody test by enzyme immunoassay.

      • KCI등재

        Favorable clinical course after early-intensive immunotherapy for new-onset refractory status epilepticus

        김현성,김지영,황보진,우경남,박민규,박경필,안성호 대한신경집중치료학회 2020 대한신경집중치료학회지 Vol.13 No.1

        Background: New-onset refractory status epilepticus (NORSE) refers to the newly established concept of a disease characterized by refractory status epilepticus without an identifiable etiology. Recent reports have indicated the importance of immunotherapy for NORSE. Case Report: A 37-year-old man with no past history of epilepsy was admitted for a presenting complaint of confusion. He was treated with acyclovir and anti-epileptic drug (AED) for presumed herpes encephalitis. However, he developed generalized tonic-clonic seizures on day 6 of admission that worsened despite treatment with multiple AEDs. NORSE was considered to be a probable diagnosis and immunotherapy with methylprednisolone and immunoglobulin was scheduled. However, persistent seizure activity was observed on the electroencephalogram after the completion of initial immunotherapy. Subsequently, rituximab was administered for 4 weeks. He eventually regained consciousness and was able to resume social activity. Conclusion: Our patient exhibited a favorable outcome with early-intensive immunotherapy and subsequent rituximab treatment for NORSE.

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