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유영복,유창현,박용환,죤 페버디,Yoo, Young-Bok,You, Chang-Hyun,Park, Yong-Hwan,Peberdy, John F. The Korean Society of Mycology 1986 韓國菌學會誌 Vol.14 No.1
느타리버섯과 사철느타리버섯의 영양요구성 균주를 원형질체융합에 의하여 이종간융합균주를 선발하였다. 이 체세포잡종을 재배하여 자실체에서 담자포자를 분리하여 life cycle에 대한 유전분석을 한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. $Arg{\times}Ribo-1,\;Arg{\times}Ribo-2,\;Gly\;Ser{\times}Ribo-1$ 그리고 $Gly\;Ser{\times}Ribo-2$ 4개의 융합조합에서 7개의 융합균주를 분석한 결과 모두 유전형질이 분리되었으며 또한 유전자 조환이 일어났다. $Arg{\times}Ribo-1$과 $Arg{\times}Ribo-2$에서는 4종류로 분리되었으며 $Gly\;Ser{\times}Ribo-1$, $Gly\;Ser{\times}Ribo-2$와 같이 대립유전자가 3인자 일때는 8종류로 기대되나 단지 2내지 6종류로만 분리 되었다. 2. 대림유전자의 비에 었어서 $Arg{\times}Ribo-1$과 $Arg{\times}Ribo-2$에서 1:1로 기대되나 Ribo의 분리수가 많은 3:1 으로 분리되었으며, $Gly\;Ser{\times}Ribo-1$과 $Gly\;Ser{\times}Ribo-2$에서는 1:1:1과는 아주 상이한 분리비를 나타내었다. 3. 4개의 융합조합 모두 연관에 속하지 않았으며 조환가는 $38.7{\sim}67.6%$였다. 4. 분리되는 prototrophic recombinants의 균사체에서 clamp connection이 형성되었는데 4개의 융합조합에서 모두 나타났으며 융합균주에 따라 차이가 났는데 $Arg{\times}Ribo-1$의 p5균주는 곁정된 수의 78.5%가 clamp connection을 형성하였다. 또한 이들 균주의 자실체는 정상이었으며 자실체의 색은 느타리버섯과 사철느타리버섯의 중간이었다. Interspecific hybrids of Pleurotus ostreatus and Pleurotus florida were formed by using protoplasts of complementing auxotrophs. The genetic markers were shown to segregate and recombine in the first generation of monosporus isolates from basidiocarp of seven fusion products. The analysis provides proof of heterokaryosis and strong evidence for haploidy of vegetative nuclei, a sexual cycle consisting of nuclear fusion and meiosis. In all the crosses there was no evidence of linkage between the genetic markers. Clamp connections were formed in monosporus mycelia from basidiocarp of fusion products.
영지(靈芝)버섯 균사(菌絲)의 원형질체(原形質體) 나출(裸出) 및 재생(再生)
신관철,여운형,유영복,박용환,Shin, Gwan Chull,Yeo, Un Hyung,Yoo, Young Bok,Park, Yong Hwan 충남대학교 농업과학연구소 1986 Korean Journal of Agricultural Science Vol.13 No.2
영지(靈芝)버섯의 유전(遺傳) 및 신품종(新品種) 육성(育成)을 위한 기초연구(基礎硏究)로서 원형질체(原形質體) 나출(裸出)에 미치는 몇가지 요인(要因) 구명(究明)하고 원형질체(原形質體)의 재생(再生)에 관한 실험(實驗)을 실시(實施)한 결과(結果)는 다음과 같다. 1. 영지(靈芝)버섯균(菌)의 원형질체(原形質體) 나출(裸出)에 적합(適合)한 배지(培地)는 균사생장(菌絲生長)이 빠르고 기생균사(氣生菌絲)의 발달(發達)이 양호(良好)한 SCM이었다. 2. 영지(靈芝)버섯균사(菌絲)의 세포벽(細胞壁) 분해효소(分解酵素)는 Novozym 234였고 최적농도(最適濃渡)는 $10mg{\cdot}ml^{-1}$이었으며 이때 원형질체(原形質體)의 나출수(裸出數)는 $10.47{\times}10^6ml^{-1}$이었다. 3. 원형질체(原形質體) 나출(裸出)을 위한 최적(最適) 삼투압조절제는 0.6 M Suaose였고 Kcl에서 나출(裸出)된 원형질체(原形質體)는 크기가 매우컸다. 4. 영지(靈芝)버섯균(菌)은 3일간(日間) 배양(培養)한 균사체(菌絲體)에서 원형질체(原形質體)의 형성(形成)이 최대(最大)였고 분해효소액과의 반응시간(反應時間)은 3시간(時間)이 가장 좋았다. 5. 나출(裸出)된 원형질체(原形質體)는 MCM, MMM 및 SCM 배지(培地)에서 0.2~0.27%의 재생율(再生率)을 보였다. 6. 원형질체(原形質體)에서 재생(再生)된 균주(菌株)의 13~29%는 Monokaryon 균주이었다. Some factors affecting the protoplast release from mycelia of Ganoderma lucidum and regeneration of the protoplast were investigated and the results obtained are summarized as follows; Novozym 234 as a lytic enzyme was the most effective for the protoplast release from mycelia of Ganoderma lucidu m and its optimal concentration was 10mg per ml of osmotic stabilizer. The highest number of protoplasts were released after 3 hours incubation in the reciprocal shaking bath at 120 oscillations a minute. Among six osmotic stabilizers tested, 0.6M sucrose showed the best result. SCM medium showed good mycelial growth and high yields of protoplasts. The protoplasts released from the mycelium of G. lucidum were regenerated at 0.20 to 0.27 percent on MCM, MMM and SCM. Of the cultures obtained from protoplasts regenerated, 13 to 29 percent were monokaryon.