지리오가피 (Acanthopanax chiisanensis) 체세포배의 건조처리를 통한 식물체 증식

이강섭,방극수,최용의,안병룡,Lee, Kang-Seop,Bang, Keuk-Soo,Choi, Yong-Eui,Ahn, Byung-Yong 한국식물생명공학회 2003 식물생명공학회지 Vol.30 No.4

지리오가피의 체세포배로부터 식물체재생을 위한 효율적인 방법을 개발하였다. 체세포배의 형태형성에 미치는 식물생장 조절물질의 영향을 조사하고자, 접합자 배 유래의 배발생 세포를 MS배지에 현탁배양하고, 이로부터 얻어진 자엽시기의 배를 배양접시에서 건조처리 (0∼72 h)한 후, NAA, BA, GA$_3$(0∼0.5mg/L)가 첨가된 MS배지에 배양하였다. 그 결과, 체세포배를 72시간 동안 배양접시에서 건조처리 후에 0.5mg/L NAA, 0.5mg/L BA 또는 0.5mg/L NAA, 0.5mg/L BA 0.5mg/L GA$_3$가 첨가된 MS배지에 6주간 배양하였을 때, multiple shoot가 100%로서 가장 높게 유도됨을 관찰 할 수 있었다. 가장 높은 식물체의 재생율 (29.1%)은 체세포배를 72시간 건조처리 후에,0.1mg/L NAA, 0.1mg/L BA그리고 0.1mg/L GA$_3$가 첨가된 MS배지에 6주간 이식한 후, 이를 다시 1.0mg/L GA$_3$가 첨가된 1/3MS배지에 6주간 배양하였을 때 이루어졌다. 유식물체를 vermiculite와 sand가 1:1로 첨가된 plastic pot 이식하였을 때 생존율은 약 70%로서 나타났다 이상의 결과는 지리오가피의 계량생산에 활용될 수 있을 것으로 기대된다. An efficient method of plant regeneration from Acanthopanax chiisanensis somatic embryos was developed. Cotyledonary somatic embryos were obtained in liquid Murashige and Skoog (MS) medium from embryogenic cell suspension cultures. They were desiccated for 0 to 72 hr and then cultured on MS medium containing NAA, BA, GA$_3$, (0-0.5mg/L). The highest multiple shoots formation (100%) was obtained from 72 hr desiccated somatic embryos on ifs medium with 0.5mg/L NAA+0.5mg/L BA or 0.5 mg/L NAA+0.5mg/L BA+0.5mg/L GA$_3$ after 6 weeks culture. Plant conversion from multiple shoots was not high. The highest plant conversion from multiple shoots was obtained on 1/3MS medium with 1.0mg/L GA$_3$. Converted plantlets were transferred to ex vitro condition and the highest survival rate (70%) of the plantlets was obtained on plastic pots containing vermiculite and sand. These results indicate that micropropagation procedure can be applied for an efficient mass propagation of Acanthopanax chiisanensis.

현탁배양을 통한 금낭화(Dicentra spectabilis L. Lemaire)의 대량증식

이강섭,심옥경,신정순,최용의,김이엽,Lee, Kang-Seop,Sim, Ock-Kyeong,Shin, Jeong-Sun,Choi, Yong-Eui,Kim, Ee-Yup 한국식물생명공학회 2004 식물생명공학회지 Vol.31 No.2

금낭화 (Dicentra spectabilis L.)는 개발가치가 있는 국내 자생화 중의 하나로서 우수한 품종의 대량생산이 절실히 요구되는 실정이다. 본 연구는 현탁배양을 통한 배발생세포의 대량증식과 체세포배 발생 및 식물체재생의 적정조건을 구명하여 효율적인 기내묘목의 대량생산 체계를 확립하고자 시도되었다. 1.0mg/L 2,4-D SH고체배지에서 유도된 배발생캘러스를 현탁배지에서 증식시킨 결과, 1.0mg/L 2,4-D를 포함한 SH배지에서 MS배지에 비해 증식율이 높게 나타났으며, 체세포배 발생율은 1/2배 SH기본배지에서 가장 높게 나타났다. 250$m\ell$ 삼각플라스크에서 5,000개 이상의 고빈도로 체세포배가 생산되었다. 체세포배로부터 발아유도시에 GA$_3$는 정상적인 식물체로의 재생을 억제하는 효과를 나타내었으며, 정상적인 식물체 재생은 1/2희석 SH배지에서 양호하였다, 신초와 뿌리를 갖는 유식물체를 모래와 원예용상토(5:1, vol)가 혼합된 토양이 함유된 포트에 이식하여 1개월 후 58%의 생존율을 나타내었다. 이상의 결과를 활용하면 체세포배로부터 금낭화의 묘목을 대량생산 할 수 있을 것으로 생각된다. Bleeding heart (Dicentra spectabilis L. Lemaire) is one of the most valuable wild flower in Korea. This work was conducted for the mass production of somatic embryos through suspension culture and more effective plant regeneration system in Dicentra spectabilis. High-frequency embryogenic callus proliferation was achieved in SH liquid medium supplemented with 1 mg/L 2,4-D. Half-strength SH medium was suitable concentration for somatic embryo induction and germination. About 5,000 embryos were produced per 250$m\ell$ flask after 4 weeks of culture. Germination rate of somatic embryos was decreased when GA$_3$ was added in medium. The plantlets showed a 58% survival rate when transferred to pots after 1 month of culture. The results indicate that micropropagation procedure via somatic embryogenesis can be applied for an efficient mass propagation of Dicentra spectabilis.

오가피(Acanthopanax sessiliflorus)의 체세포배로부터 식물체 재생에 미치는 GAa₃와 Charcoal의 영향

이강섭,최용의,심옥경,주선아,신정순,정재훈,김영신,김이엽,Lee, Kang-Seop,Choi, Yong-Eui,Sim, Ock-Kyeong,Joo, Sun-Ah,Shin, Jeong-Sun,Jeong, Jae-Hun,Kim, Young-Shin,Kim, Ee-Yup 한국식물생명공학회 2002 식물생명공학회지 Vol.29 No.4

To establish the optimum condition for plant regeneration from somatic embryos of Acanthopanax sessiliflorus Rupr. et Maxim, a medicinal plant, somatic embryos were induced from zygotic embryo-derived embryogenic callus in hormoen-free MS medium. To induce plantlet conversion, cotyledonary somatic embryos were cultured on MS solid medium with GA$_3$at various concentrations (0~10 mg/L) for three weeks. Plantlets were transferred to 1/3 MS solid medium with 0.5% charcoal for 7 weeks. Stem length was increased proportionally to the concentration and treatment period of GA$_3$. Also, the highest leaf width (8.9 mm) and leaf number (2.84) of plantlet were obtained when plantlets were converted on 5,10 mg/L GA$_3$pretreatments, respectively. The highest plant conversion frequency (66.7%) was obtained when the somatic embryos were cultured on medium containing 5 mg/L GA$_3$ for 3 weeks and then were transferred to 1/3 MS medium with 0.5% charcoal. The highest survival rate of soil transfer was 90% when plantlets were regenerated on medium with 5 mg/L GA$_3$ for 3 weeks and then transferred to plastic pots containing vermiculite and sand mixture for 4 weeks.

가시없는 블랙베리(Rubus fruticosus L. cv. BB21)의 근맹아를 이용한 다경유도와 절간배양을 통한 식물체 증식조건의 확립

이강섭,김효진,박대현,오승철,조한직,김이엽,Lee, Kang Seop,Kim, Hyo Jin,Park, Dae Hyun,Oh, Seung Cheol,Cho, Han Jig,Kim, Ee Youb 한국식물생명공학회 2018 식물생명공학회지 Vol.45 No.2

본 연구에 사용한 식물체는 Rubus fruticosus L. cv. BB21은 Rubus fruticosus L. ${\times}$ R. parvifolius L. 교잡 블랙베리 V3품종에서 방사선을 처리하여 돌연변이로 선발 육종된 V9개체 중 다시 방사선을 처리하여 선발육종 된 품종이다. 이러한 우량계통의 신속한 증식을 이루기 위하여 조직 배양을 통한 효과적인 방법을 구명하고자 배지 및 생장조절물질 등의 처리에 따른 안정적인 생산을 위해 본 연구가 수행되었다. 땅속에서 채집된 근맹아 절편체를 0.1, 0.5, 1.0, 2.0 mg/L BAP가 첨가된 MS와 1/2MS 배지에 치상하여 6주간 배양한 후, 다경의 형성률을 조사하였다. 형성된 다경으로부터 산업적으로 이용하기 위한 안정된 생산을 위하여, 신초의 잎을 제거한 후 절간배양을 수행하여 다수의 소식물체를 증식하고자 여러종류의 배지 즉, AD (Anderson 1980), B5 (Gamborg 1968), MS (Murashige and Skoog 1962), SH (Schenk and Hildebrandt 1972), QL (Quoirin and Lepoivre 1977), WPM (Lloyd and McCown 1981)배지와 상기의 각각의 동일배지의 무기염류의 수준을 절반으로 한 1/2배지에 배양하였다. 초기의 생육(30일간 배양 시)에 있어서 생장은 배지 간에 차이를 나타내어 1/2AD, 1/2QL 배지에서 가장 양호한 초장을 나타내었으며, 절간수도 약 3.8, 4.4개를 나타내었으며, 뿌리, 생중량 다경유도 모두 양호하였다. 90일간 배양한 경우에서는 MS배지가 초장이 가장 양호하였으며 AD, SH 순으로 양호한 결과를 나타내었다. 식물체의 토양 순화는 신초와 뿌리가 잘 발달된 정상적인 식물체를 모래, 토양, 그리고 버뮤큘라이트가 혼합된 토양(1:1:1, v/v)에 각각 직접 이식하여 실시한 결과, 식물체의 발근율과 생존률(약98%)을 나타내었다. 이상의 결과를 통하여 블랙베리 묘목의 대량생산이 가능하여 농가에 원활한 공급이 가능할 것으로 예상된다. This study was conducted to develop a simple, rapid, and reliable method for in vitro propagation of disease-free and true-to-type clones from sucker explants of thornless blackberry (Rubus fruticosus L. ${\times}$ R. parvifolius L.). To induce multiple shoots, the sucker explants were sterilized in 1% NaOCl solution, and then were aseptically cultured on the full and 1/2 MS solid medium supplemented with BAP (0.1, 0.5, 1.0, 2.0 mg/L). After six weeks of culture, the highest frequency (85.4%) of shoot formation from sucker explants was obtained on the full-strength MS medium with 1.0 mg/L BAP. Node explants obtained from multiple shoots were cultured on the various media of full- or half-strength of AD, B5, MS, SH, QL, WPM media, respectively. After 30 days of culture, plant growth was good on the half-AD, half-QL medium. After 90 days of culture, plant growth was good on the full MS and full SH medium. The survival rate of the plantlets after transfer to plastic pots containing soil mixture (sand: soil: vermiculite was 1:1:1, vol.) in the greenhouse was 98%. The results indicate that a multiple-shoot procedure can be applied for an efficient mass propagation of Rubus fruticosus L. ${\times}$ R. parvifolius L.

금낭화(Dicentra spectabilis)의 배우체 형성 및 접합자배의 발달

심옥경(Ock-Kyeong Sim),이강섭(Kang-Seop Lee),김이엽(Ee-Yup Kim),은종선(Jong-Seon Eun) 한국자원식물학회 2005 한국자원식물학회지 Vol.18 No.2

본 연구는 금낭화 배우체의 형성과 배 발달특성에 관한 기초 자료로 활용하기 위해 수행되었다. 시원세포로부터 발달된 소포자 모세포는 화뢰의 길이가 1 mm일 때 감수분열을 하여 4면체형(tetrahedral) 4분자가 형성되었다. 4개의 소포자는 분리되어 각각 웅성배우체로 발달하였다. 대포자 모세포는 화뢰의 길이 $4{\sim}5\;mm$ 수식 이미지에서 관찰되었다. 대포자의 발달유형은 정상형(polygonum)이었으며, 배낭의 형태는 굽어있는 곡생배주(amphitropous)였다. 3개의 뚜렷한 반족세포는 배낭이 성숙한 후에도 퇴화하지 않고 남아있었다. 개화 전 자웅배우체는 충분히 성숙하였다. 개화 시에 수술과 암술의 길이는 거의 비슷하거나 수술이 0.5 mm 짧아서 자화수정에 적당한 구조를 가지는 것으로 나타냈다. 수정 후 배는 구형, 심장형을 거쳐 자엽배까지 발달하였으며, 종자 산포시 초기 자엽배를 가지고 있음을 알 수 있었다. This study was carried out to obtain the basic informations on the characteristics of gametophytes formation and embryo developement in Dicentra spectabilis. Microspore mother cells developed from archesporial cells, start meiosis when flower bud length reaches around 1 mm, formed tetrahedral type tetrad. The 4 microspores were separated. They were developed to male gametophytes, respectively. Megaspore mother cells were observed when flower bud length was 4~5mm. The developemental type of megaspore was polygonum and embryo sac was amphitropous. Three large and distinctive antipodals did not degenerated and remained after embryo sac was developed. When the male and female gametophytes was fully developed, the length of stamen and style was very similar or stamen was shorter about 0.5 mm than that of style. This result indicates that self-fertilization can be occurred in this species. After fertilization, developing zygotic embryos showed various stages of development from globular to cotyledonary embryos, and zygotic embryo in seed scattering time seemed to have an early cotyledonary stage.

블랙베리(Rubus fruticosus L.)의 맹아절편체로부터 다경유도를 통한 식물체 재분화

신정순(Jeong-Sun Shin),심옥경(Ock-Kyeong Sim),이종천(Jong-Chon Lee),조한직(Han-Jik Cho),김이엽(Ee-Yup Kim),이강섭(Kang-Seop Lee) 한국자원식물학회 2005 한국자원식물학회지 Vol.18 No.3

블랙베리의 다경유도를 통한 식물체 재생을 위하여, 노지에서 생육되고 있는 맹아를 채취하여 1.2% NaOCl 용액에 침지하여 표면 살균한 후, kinetin과 BA가 각각 포함된 MS 배지에서 4주간 배양하여 절편당 형성된 신초의 수를 조사하여 BA가 효과적임을 밝혔다. 동일방식으로 맹아를 IBA와 BA를 첨가한 MS 고체배지에서 4주간 배양하여 신초를 유도하였는데 1.0 mg/L BA가 첨가된 배지에서 신초유도는 100% 이루어졌다. 기내배양한 신초의 절편체를 1.0 mg/L BA가 첨가된 MS 배지에 치상하여 형성된 신초의 수는 절편체당 5.3개로 최고를 나타내었다. 약 10주 정도 배양을 더 오래하였을 때, 다경 형성율이 더 높아질 뿐 아니라 절편체당 신초 수도 많아졌다. 형성된 신초로부터 뿌리 발생을 위하여 glycine의 농도를 달리한 (0~2.0mg/L) MS 기본배지에서 4주간 배양하였을 때, 0.5 mg/L glycine을 첨가한 배지에서 고빈도 (85%의 뿌리발생을 관찰 할 수 있었다. 재생된 식물체는 모래 : 토양 : 버뮤큘라이트 (1:1:1, vol.) 혼합토양에서 순화시켜, 토양에 이식하였을 때 95%의 식물체 생존율을 나타내었다. This study was carried out to induce plant regeneration via shoot formation from sucker explants of Rubus fruticosus L. To induce adventitious shoots, sucker explants were sterilized in 1.2% NaOCl solution, and cultured on the MS solid medium supplemented with kinetin (0.5, 1.0, 3.0 mg/L) and BA (0.5, 1.0, 3.0 mg/L), respectively. As above, to induce adventitious shoots, sucker explants were cultured on the MS solid medium supplemented with IBA (0, 0.1, 1.0 mg/L) and BA (0, 0.1, 1.0, 2.0 mg/L). After 4 weeks of culture, the highest frquency (100% of shoot formation from sucker explants was obtained from the medium with 1.0 mg/L BA. The highest shoot number per explant from in vitro shoot explants was 5.3. After 10 weeks of culture, the number of shoot per explant was increased. The highest frequency (85% of root formation was obtained at 0.5 mg/L glycine medium, when the explant with shoot were cultured on the MS medium containing glycine at various concentrations from 0 to 2.0 mg/L. The survival rate of the plantlets after transfer to plastic pots containing sand, soil, and vermiculite (1:1:1, vol.) was 95%. The results indicate that micropropagation procedure can be applied for an efficient mass propagation of Rubus fruticosus.

땅두릅(Aralia cordata Thunb.)의 體細胞胚 發生 및 異常型胚의 構造

李康燮,蘇雄永 全北大學校 基礎科學硏究所 1994 基礎科學 Vol.16 No.-

땅두릅(Aralia cordata Thunb.)의 부위별 절편체로부터 성숙도에 따른 체세포배의 형성능력을 비교하고, 이상형 체세포배의 해부학적 관찰을 통한 구조적 특징을 구명하기위하여 본 실험은 수행되었다. 파종후 6주 경과된 유식물로부터 계대배양없이 7주간 배양한 결과, 배발생캘러스의 유도는 1.0 mg/L 2,4-D 보다 1.0 mg/L 2,4-D 에 0.5 mg/L ABA를 첨가한 경우에 양호하였다. 6개월간 기내에서 자란 체세포배유래 식물체로부터 배발생캘러스의 유도는 1.0 mg/L 2,4-D 와 2.0 mg/L 2,4-D에 0.2 mg/L Kinetin 조합시에 양호하였다. 한편, 어뢰형접합자배, 파종후 3주 경과된 유식물(자엽, 배축, 뿌리), 파종후 6주 경과된 식물(잎, 엽병, 뿌리), 노지에서 자라는 다년생 식물(잎, 엽축), 그리고 기내에서 성장한 식물(잎, 엽병)의 부위별 절편체를 1.0 mg/L 2,4-D배지에 계대배양없이 배양하였을 때, 체세포배의 유도는 각각 배양후 3주, 4주, 7주, 10주, 그리고 5주경에 뿌리를 제외한 모든 부위에서 이루어져 성숙도가 어릴수록 양호하였으며, 자연조건에서 성장한 식물에 비해 기내에서 자란 재분화 식물에서 신속히 이루어졌다. 체세포배의 유도는 접합자배와 자엽부위에서 가장 양호하였으며, 재분화된 식물의 경우에는 잎과 엽병 모두에서 양호하였다. 또한, 2,4-D가 첨가된 한천배지상에서 발달된 체세포배의 형태는 대부분 (86.7%)이 볼링핀 또는 나팔모양이었다. 볼링핀형의 배를 종단면상에서 보면, 뿌리 및 배축으로부터 자엽부위에 걸쳐 전형성층속(procambial strand)이 발달되어 있고, 유근에는 근관이 형성되어 있었다. 자엽부위는 횡단면에서 보면 그 가운데 부위는 전형성층속이 형성되어 있고, 특히 중심부에 강소가 없는 상태로되어 있어 자엽이 1개임을 알 수 있었다. 나팔모양배의 경우에 종단면에서 보면, 뿌리와 배축부위는 전자의 경우와 같으며 자엽부위는 fork모양으로 보여 마치 2개의 자엽처럼 보이나, 이 부위를 횡단하여 보면 가운데 부분이 강소로 되어 있으며 주위에 전형성층속이 환상을 이루고 있음을 알 수 있었다. In order to induce somatic embryogenesis in Aralia cordata, various explants from 6 weeks old plant were cultured on MS medium supplemented with 2,4-D, BAP, Zeatin and ABA. Embryogenic callus was induced from leaf and petiole explants more efficiently on the medium containing 1.0 mg/L 2,4,-D and 0.5 mg/L ABA than 1.0 mg/L 2,4-D, but somatic embryo developed on the 1.0 mg/L 2,4,-D medium. Somatic embryos were formed from zygotic embryo at torpedo stage, cotyledon and hypocotyl of seedling (3-weeks old), leaf, petiole of young (6-weeks old) and regenerated plants (6-month old) from somatic embryos and leaf and rachis of adult plant (many years old) when cultured on the medium containing 1.0 mg/L 2,4-D. Also, most of the somatic embryos developed on the solid medium containing 1.0 mg/L 2,4-D were bowling pin or horn type. The embryos of bowling pin type had a procambial strand developed from radicle to cotyledon as revealed by the longitudinal section and its cotyledon appeared narrow and single by cross section. The horn type of embryos appeared fork-shaped in longitudinal section and circular form in the cross section.

땅두릅(Aralia cordata Thrnb.)의 培養細胞로부터 形成된 體細胞胚의 子葉數에 미치는 Cytokinin의 影響

李康燮,蘇雄永 全北大學校 基礎科學硏究所 1994 基礎科學 Vol.16 No.-

Cytokinin을 種類別, 濃度別, 處理基間別, 그리고 體細胞胚 發達 段階別로 處理하여 子葉의 數的變異에 미치는 그 影響을 調査하고자, 땅두릅의 어린잎을 1.0 mg/L 2,4-D 가첨가된 MS배지에 培養하여 배발생캘러스를 유도하고, 이를 동일조건의 액체배지에 이식하여 증식시키면서, 배발생세포괴 또는 구상형배를 생장조절물질이 제거된 배지에 이식하여 현탁배양함으로서 體細胞胚를 誘導하였다. 구상형배에 0.2 mg/L BAP, zeatin, kinetin을 各各 處理하여 2주간培養하였을 때, 多子葉의 形成率은 各各 94.9, 52.6, 42.9%로서 對照區 (23.3%)에 比하여 BAP > zeatin > kinetin 順으로 높았으며 특히 BAP處理時에 가장 높게 나타났다. 또한 BAP를 濃度別( 0, 0.001, 0.01, 0.1 mg/L)로 胚發生細胞傀에 2주간 處理하였을 때, 多子葉의 形成率은 各各 23.3, 39.7, 69.4, 74.4%으로 濃度가 높을수록 增加하는 傾向이었다. 球狀型胚에 0.2 mg/L BAP를 0, 3, 7, 14일간 處理한 경우에 多子葉의 形成率은 各各 26.5, 87.7, 95.2, 96.1%로 處理期間이 길수록 높은 경향이었다. 0.2 mg/L BAP를 球狀型, 心臟型 또는 魚雷型,子葉時期의 胚에 2주간 處理한 경우에 多子葉의 형성률은 各各 92.4, 84.4, 26.3%로서 배발생 초기에 처리될 경우에 더욱 높게 나타났다. 한편 胚發生 세포괴에 1.0 mg/L의 BAP를 또는 구상형배에 0.2mg/L의 BAP, zeatin, kinetin을 各各 處理하여 2주간 培養한 경우에 2 次胚가 形成되었다. In order to investigate the effect of cytokinins on the cotyledonary variability of somatic embryos in Aralia cordata Thunb, somatic embryos were induced from the leaf-derived embryogenic callus on MS medium containing 1.0 mg/L 2,4-D, and then transferred to 2,4-D-free and cytokinin-added medium for somatic embryogenesis after 4 weeks culture. Polycotyledonary embryos were formed most abundantly (94.9%) on the 0.2 mg/L BAP medium as compared with the 0.2 mg/L zeatin (52.6%) and kinetin (42.9%) media, and it was proportional to BAP concentrations (0.001-0.1 mg/L). The rate of polycotyledonary embryo formation increased proportional to the period of BAP treatment (3-14 days) and also increased more at the globular stage than at the heart, torpedo-shaped and cotyledonary stages. Secondary embryos were induced on the medium containing higher concentration of BAP (1.0 mg/L).