Targeted cellular process profiling approach for cervical cancer

안웅식 ( Woong Shick Ahn ),( Hyun Jung Kim ),( Il Young Kuk ),( Ho Chul Lee ),( Chung Mok Park ),( Hae Nam Kim ),( Duck Young Ro ),( Tae Chul Park ),( Jun Mo Lee ),( Sung Eun Namkoong ),( Chong Kook Kim 대한산부인과학회 2004 대한산부인과학회 학술대회 Vol.90 No.-

자궁경부암 유전자 치료를 위한 재조합 p53 아데노 연관 바이러스 플라스미드 ( pAAVCMVp53 )의 제조

신봉영(Bong Young Shin),한유진(You Jin Han),조규남(Kyou Nam Cho),안웅식(Woong Shick Ahn),김진우(Jin Woo Kim),이준모(Jun Mo Lee),남궁성은(Sung Eun Namkoong),김수평(Soo Pyung Kim),이헌영(Hun Young Lee),김승조(Seung Jo Kim),김종국(Chong 대한산부인과학회 1998 Obstetrics & Gynecology Science Vol.41 No.11

N/A Objective: Human papillomavirus (HPV) has been identified in the majority of invasive cervical cancer patient and has been found to contribute in a significant way to the genesis of human cervical cancer. HPV has two transforming genes that encode the oncoproteins E6 and E7, E6 can form complexes with p53 and promote p53 degradation, E7 inhibit retinoblastoma protein (RB). The p53 protein is as a phosphoprotein which co-immunoprecipitated with the SV40 T-Antigen. The wild type p53 protein is capable of suppressing the tumorigenic phenotype and regulating cell cycle. Adeno-associated virus(AAV) is a linear single stranded DNA parvovirus which is dependent upon cotransfection by a second unrelated virus to undergo productive infection. It has been well documented that AAV DNA integrates into cellular DNA as one to several tandem copies joined to cellular DNA through the termini. In order to introduce wild type p53 through AAV virus into a cervical cancer patient for gene therapy, we had constructed recombinant p53 adeno associated virus plasmid (pAAVCMVp53). Methods: pAAVCMVp53 was created new AAV-vector system, pRc/CMVp53 including p53 cDNA and AAV-derivative vector, pASPA-AAV-CMV-polyA were made to HindIII/blunt fragments. Eluated 1.8 kb fragment of wild type p53 cDNA was ligated to pAAV-CMV-polyA, 4.9 kb fragment deprived hASPA cDNA. Result: Recombinant AAVCMVp53 was constructed by using pRc/CMVp53 andpASPA-AAV-CMV-polyA. This pAAVCMVp53 was confirmed by various restriction enzyme-digestions and Southern-blotting. This new vector system will be studied on expression, stability in cervical cancer cell lines and animals. Conclusion: This system will be one of the useful vector system for cervical cancer gene therapy.

방사선 보조요법 후 난소로 전이된 재발성 자궁경부암 1 예

이해남 ( Hae Nam Lee ),권용일 ( Yong Il Kwon ),김수연 ( Sue Yeon Kim ),이희정 ( Hee Jeong Lee ),안웅식 ( Woong Shick Ahn ),이준모 ( Joon Mo Lee ),남궁성은 ( Sung Eum Namkoong ) 대한산부인과학회 2005 Obstetrics & Gynecology Science Vol.48 No.7

수술 전 광역학 치료를 한 자궁경부 유리세포암

김용욱 ( Yong Wook Kim ),박철훈 ( Cheol Hoon Park ),노덕영 ( Duck Yeong Ro ),신정임 ( Jeong Im Sin ),배수미 ( Su Mi Bae ),이준모 ( Joon Mo Lee ),남궁성은 ( Sung Eun Namkoong ),안웅식 ( Woong Shick Ahn ),( Victor Sokolov ) 대한산부인과학회 2003 Obstetrics & Gynecology Science Vol.46 No.4

It has been known that glassy cell carcinoma (GCC) of uterine cervix is rare and rapidly progressive, and has a poor prognosis. Here we describe a case of GCC in which photodynamic therapy (PDT) was performed prior to radical hysterectomy. The patient, a

자궁경부암 세포주에서 Apigenin에 의한 세포사 유도

오은경 ( Eun Kyung Oh ),김현정 ( Hyun Jung Kim ),배수미 ( Su Mi Bae ),박미영 ( Mi Young Park ),김용욱 ( Yong Wook Kim ),김태응 ( Tae Eung Kim ),안웅식 ( Woong Shick Ahn ) 대한산부인과학회 2008 Obstetrics & Gynecology Science Vol.51 No.8

목적: Apigenin은 보편적인 식물 방향족 화합물로서 항종양 효과를 가지는 것으로 알려져 있다. 본 연구는 자궁경부암 세포주에서 apigenin의 세포성장 억제 효과 및 세포사멸 효과를 조사하고, HPV E6/E7 유전자의 발현에 미치는 영향을 조사하고자 하였다. 방법: 자궁경부암 세포주들에서 apigenin에 의한 항암효과를 확인하기 위하여 세포성장 억제 및 세포사멸 효과를 조사하고, HPV E6/E7의 발현을 조사하였다. 5×103 cells/well (96 well plate)로 CaSki, HeLa 그리고 C33A 세포를 분주한 후 24시간 뒤 apigenin을 농도별로 처리한 후 3일 동안 세포성장 억제효과를 MTT 측정법으로 확인하였으며, 세포사는 Annexin V-FITC staining을 실시하여 확인하였다. Caski 세포의 Anchorage-independent growth에 apigenin이 미치는 효과를 보기 위해 soft agar assay를 수행하였다. 또한 CaSki, HeLa 그리고 C33A 세포주에서 qRT-PCR을 통해 HPV E6/E7 유전자의 발현변화를 확인하였다. 결과: Apigenin은 Caski, HeLa, C33A 세종류의 자궁경부암 세포주의 농도의존적으로 세포성장을 억제하고 세포 사멸을 유도하였으며 또한 soft agar에서 Caski 세포의 anchorage-independent growth를 약 3배 정도 저해하였다. 예상과는 달리 Apigenin은 자궁경부암 세포주에 감염된 인유두종바이러스의 암유전자인 E6와 E7의 mRNA level에는 영향을 주지 않았다. 결론: CaSki, HeLa 그리고 C33A와 같은 자궁경부암 세포주에서 apigenin 투여는 암세포의 성장을 저해하고, 세포사를 유도함을 확인하였다. apigenin은 E6와 E7의 mRNA 발현에는 영향을 미치지 않았다. 따라서 자궁경부암 세포주에서의 apigenin의 항암기전은 E6와 E7의 전사 후 또는 단백질 수준 또는 다른 발암 신호전달체계를 저해함으로써 항암효과를 나타내는 것으로 생각된다. Objective: Apigenin is a widely distributed plant flavonoid and was proposed as a potent antitumor agent. In this study, we investigated the anticancer effects of apigenin on human cervical cancer cell lines. For this, the effects of apigenin on growth inhibition and apoptosis were examined and also mRNA expression of E6 and E7, the main causes of development of cervical cancer, was also evaluated. Methods: To observe the anti-proliferative effects, cervical cancer cell lines, 5×103 cells/well (96 well plate) of Caski, HeLa and C33A were plated and 24 h later treated with apigenin for three days and then MTT assay was performed. For apoptosis analysis, Annexin V-FITC staining was performed. To examine the effect on anchorage-independent growth by apigenin, soft agar assay was performed. The mRNA expression of HPV E6/E7 was examined by quantitative RT-PCR. Results: Apigenin inhibited the growth of all three kind of cervical cancer cell lines (CaSki, HeLa, and C33A) and induced apoptosis in these cell lines. Also, anchorage-independent growth of Caski cells in soft agar was inhibited approximately 3 folds by apigenin treatment. Unexpectedly, mRNA expression level of both E6 and E7 in HeLa cells was not significantly affected by apigenin. Conclusion: These studies showed that apigenin inhibits cervical cancer cell growth through the induction of apoptosis. However, mRNA expression of HPV E6/E7 genes was not affected by the treatment of apigenin, indicating that the anti-cancer effect of apigenin in cervical cancer might be mediated via other pathway. Taken together, these results suggest that apigenin may provide a new therapeutic approach for cervical cancer.

TC-1 세포주를 이용한 동물모델에서 As4O6에 의한 혈관폐쇄 효과

남궁정 ( Jeong Namkung ),배수미 ( Su Mi Bae ),문란영 ( Lan Ying Wen ),오은경 ( Eun Kyeong Oh ),신재은 ( Jea Eun Shin ),김용욱 ( Yong Wook Kim ),김태응 ( Tae Eung Kim ),박태철 ( Tai Churl Park ),안웅식 ( Woong Shick Ahn ) 대한산부인과학회 2009 Obstetrics & Gynecology Science Vol.52 No.2

목적: As2O3는 다양한 고형암에서 혈관손상을 통하여 항종양 효과를 유도하는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 자궁경부암동물 모델에서 새로운 비소 화합물인 As4O6와 As2O3를 비교하여 종양 내 혈관폐쇄 현상을 확인하고자 하였다. 연구 방법: HPV 16-E6/E7 유전자를 가지고 있는 TC-1 종양세포를 이용한 자궁경부암 동물모델에서 종양의 부피가 200~250 ㎣에 이르면 PBS, As2O3 and As4O6를 복강 내 투여하였다. 비소 화합물을 주사한 후 종양의 크기는 2~3일 간격으로 측정하고, 종양내혈관 폐쇄현상은 Evans blue 추출법과 Hoechst 33342 염색법 등 2가지 방법을 이용하여 측정하였다. 또한 헤마토실린-에오신 염색을 통하여 조직학적 변화를 관찰하였다. 결과: As2O3와 As4O6 주사 후, 종양 성장은 대조군에 비해 효과적으로 지연되었으며, As4O6 처리군이 가장 우수한 항종양 효과를 나타내었다. 또한 비소화합물의 투여는 종양내의 거대한 세포괴사와 혈관폐쇄 현상을 유도하였다. 결론: TC-1 세포주를 이식한 고형암 동물모델에서 As4O6의 처치는 혈관폐쇄 효과에 의한 항종양 효과를 나타내었다. Objective: Arsenic trioxide (As2O3) is known to have potent anti-vascular activity and significantly suppress solid tumor growth. The present study was conducted to investigate the vascular shutdown effects of a novel arsenic compound, tetraasrsenic oxide (As4O6), in comparison with As2O3 using cervical cancer animal model. Methods: Mice tumor challenge model was used C57BL/6 mice transplanted with TC-1 cells. After the growth of tumors was reached up 200~250 ㎣, mice were divided into 3 groups randomly for control and treatment of either As2O3 or As4O6. As2O3 and As4O6 was treated by i.p. injection. The tumor size was caliperated in twice for weeks and anti-vascular effect were assessed by Evans blue extraction assay and Hoechst 33342 staining. In tumor tissue, histopathological feaure was obserevd by hematoxylin and eosin (H&E) staining. Results: In mice treated with either As2O3 and As4O6 (i.p.), both of As2O3 and As4O6 was significantly suppressed the tumor growth compared with control group. Moreover, effect of As4O6 is more pronounced. These tumor growth inhibition is led to the massive necrosis and vacular shutdown in tumor tissue. Conclusion: This study suggests that As4O6 may have potential anticancer activity via vascular shutdown in C57BL/6 mice transplanted with TC-1 cells.

SiHa 세포주에서 비소화합물 ( As2O3 , As4O6 ) 투여 후 cDNA microarray 를 이용한 유전자 발현의 변화

남궁성은(Sung Eun Namkoong),서미영(Mi Young Seo),박은경(Eun Kyung Park),팽기영(Gi Young Pang),김종국(Chong Kook Kim),박용석(Yong Serk Park),안웅식(Woong Shick Ahn),이준모(Jun Mo Lee),김도강(Do Gang Kim) 대한산부인과학회 2002 Obstetrics & Gynecology Science Vol.45 No.7

목적 : SiHa 세포주에서 비소 화합물에 의한 세포성장 억제 효과와 유전자 발현 변화를 cDNA microarray 기술을 이용하여 확인하고자 한다. 연구 방법 : 자궁경부암 세포주인 SiHa의 성장억제에 관한 연구를 위하여 96 well plate에 103의 SiHa cell을 분주한 후, 비소화합물을 처리하여 세포 성장억제를 MTT assay 방법을 이용하여 확인하였다. 한편 384개의 유전자로 제작된 DNA chip을 이용하여 자궁경부암 SiHa 세포주에 비소화합물 1 uM을 처리하고 48시간 후의 total RNA를 추출하여 gene expression profile을 관찰하였다. 결과 : 자궁경부암 세포주인 SiHa cell의 성장억제에 관한 연구에서 비소화합물을 각각 0.5, 1, 2, 3, 4, 5 uM로 처리하여 4일간 관찰한 결과 4일째에 As2O3의 경우 각각 9.2, 56, 89, 93, 96, 96%, As4O6의 경우 54, 84, 84, 85, 87%의 세포증식억제가 관찰되었다. DNA 칩의 유전자 발현에 있어서 As2O3의 경우, 2배 이상 변화한 유전자는 thymidylate synthetase, cyclin B1, CDC 20 등 약 47여개 정도였으며, As4 O6의 경우, 대조군과 비교하여 2배 이상 변화한 유전자는 CDC 20, cyclin B1, primase, proliferating cell nuclear antigen 등 약 78여 개의 유전자가 변화한 것으로 나타났다. 결론 : SiHa cell에서 비소화합물에 의한 세포성장억제를 확인할 수 있었으며 유전자 발현의 변화에 있어서는 As2O3보다는 (47 genes) As4O6가 더 많은 변동을 일으켰으며 (78 genes) 이중 공통적으로 증가한 유전자는 6개이고 공통적으로 감소한 유전자는 26개로서 이에 대한 기능적인 면은 더 많은 연구가 필요하리라 생각된다. Objective : To obtain information on the growth inhibition effect of arsenic compounds and gene expression profiles using cDNA microarray technique in SiHa cell lines. Methods : We cultured 103 SiHa cell in 96 well plate and we investigated growth inhibition effects using MTT assay and also we performed gene expression profile experiment using 384 cDNA chip in SiHa cell after exposure of arsenics (As2O3, As4 O6 - 1 μM) for 48 hrs. Results : Arsenics (As2O3, As4 O6) inhibit the growth of SiHa cells (As2O3: 0.5, 1, 2, 3, 4, 5 μM - 9.2, 56, 89, 93, 96, 96%, As4O6: 0.5, 1, 2, 3, 4, 5 μM- 54, 84, 84, 85, 85, 87%) in 4 days culture. As2O3 and As4O6 induced apoptosis in SiHa cells. After exposure of As2O3, 47 genes were changed more than 2 times (eg, thymidylate synthetase, cyclin B1, CDC 20). In case of As4O6, 78 genes were changed more than 2 times (eg, CDC 20, cyclin B1, primase, proliferating cell nuclear antigen). Conclusion : we observed arsenic compound (As2O3, As4 O6) inhibit the growth of SiHa cell. In gene expression profiling experiment, 78 genes was changed the expression level 2 times more than that of reference RNA after treatment of As4O6 and 47 genes after treatment of As2O3. Through these result, we thought more study need in functional genomics after arsenic treated cervical cancer cells.

SiHa 자궁경부암 세포주에서 인유두종바이러스 16형 E6/E7 siRNA에 의한 세포성장 억제 비교

박세현 ( Sae Hyun Park ),박병준 ( Byung Joon Park ),김용욱 ( Yong Wook Kim ),노덕영 ( Duck Yeong Ro ),김태응 ( Tae Eung Kim ),정재근 ( Jae Keun Jung ),배수미 ( Su Mi Bae ),안웅식 ( Woong Shick Ahn ) 대한산부인과학회 2010 Obstetrics & Gynecology Science Vol.53 No.1

목적: 인유두종바이러스 (Human papillomavirus, HPV)는 자궁경부암과 밀접한 관계가 있는 것으로 알려져 있으며, 특히 인유두종바이러스 16형은 고위험군 바이러스로 분류된다. 인유두종바이러스 16형의 암 유전자 E6와 E7의 발현 저해에 따른 자궁경부암 세포주내의 발암 유전자 특이적 변화를 확인하고자 하였다. 연구 방법: 인유두종바이러스 16형을 발현하는 자궁경부암 SiHa 세포주에서 E6 유전자에 특이적으로 작용하는 인유두종바이러스 16형 E6 siRNA (siRNA 377)와 E6와 E7 유전자에 동시에 작용하는 인유두종바이러스 16형 E6 siRNA (siRNA 3)와 인유두종바이러스 16형 E7 siRNA (siRNA 198)를 사용하였다. 각각의 siRNA를 SiHa 세포주에 이입 (transfection)시킨 후, 24시간과 48시간 후에 세포수 및 세포형태의 변화를 관찰하였다. 또한 E6와 E7에 대한 RT-PCR을 실시하여 인유두종바이러스 16형 E6, E7 siRNA의 유전자 발현 저해 정도를 확인하였다. 결과: 3종류의 siRNA 모두 세포성장 저해 효과를 나타내었으며, siRNA 377에 비해 siRNA 3와 siRNA 198의 세포성장 억제효과가 더 크게 나타났다. siRNA 377은 E6 mRNA만의 발현을 감소시켰고 siRNA 3과 siRNA 198은 E6와 E7 mRNA의 발현을 동시에 감소시켰다. 결론: 인유두종바이러스 16형이 감염된 자궁경부암 SiHa 세포주에서 E6 유전자만의 억제보다는 E6와 E7 유전자를 동시에 억제하는 것이 더 큰 세포 성장 억제를 보였다. Objective: Human cervical cancer is caused by the high-risk types of human papillomavirus (HPV) such as HPV16, which possess the E6 and E7 oncogenes, whose expressions are a prerequisite for cancer development. We performed this study to compare the efficacy of antitumor activity by HPV siRNA which silences only E6 or both E6/E7. Methods: We transfected siRNA 377 (HPV16 E6 siRNA), siRNA 3 (HPV16 E6 siRNA), and siRNA 198 (HPV16 E7 siRNA) into SiHa cell line (siRNA 377 silences only E6, and siRNA 3 and siRNA 198 silence both E6 and E7). We experimented cell counts and morphologic changes 24 and 48 hours after transfection and expressions of HPV16 E6/E7 mRNA by RT-PCR. Results: siRNA 377, siRNA 3, and siRNA 198 suppressed the cell growth. siRNA 3 and siRNA 198 were more potent than siRNA 377 in cell growth suppression. siRNA 377 knocked down the expression of E6 mRNA, and both siRNA 3 and siRNA 198 knocked down the expression of E6/E7 mRNA. Conclusion: Our results suggest that simultaneous suppression of E6 and E7 was more potent than E6-specific suppression in cancer cell growth.

정상상피세포(HaCat)와 자궁경부 암세포(SiHa)에서 GeneFishing^(TM) PCR technique을 이용한 유전자 발현의 변화

김병훈,배수미,서민제,김용완,이정웅,김용욱,이준모,남궁성은,김종국,안웅식 대한부인종양 콜포스코피학회 2003 Journal of Gynecologic Oncology Vol.14 No.4

목적 : 본 실험의 목적은 정상상피 세포와 자궁경부 암세포 사이에서 유전자의 발현 차이를 조사하였다. 연구 방법 : 정상상피 세포(HaCat)와 자궁암 세포(SiHa)를 사용하였으며, 두 세포 간에 유전자 발현 차이를 GeneFish^(TM) PCR을 이용하여 알아보았으며, BLAST serach를 통해 분석하였다. 결과 : 정상상피 세포와 자궁암 세포 비교 결과, 자궁암 세포에서 S1-2-2와 S5-1을 포함한 25개의 유전자가 발현이 증가하였고, 24개의 유전자가 감소하였다. 결론 : GeneFishing^(TM) PCR기법은 유전자의 발현 변화를 확인하는데 있어서 아주 민감하고 효과적인 방법이다. 우리는 정상상피 세포와 자궁경부 암세포에서 다르게 발현하는 유전자를 찾을 수 있었고, 앞으로는, 종양의 발생과 진행과정에 관여하는 유전자를 더 탐지하고 해당 유전자의 기능을 연구할 필요가 있다고 생각된다. Objective : The purpose of this study is investigated the differentially expressed genes between normal and cervical cancer cell line. Methods : We used normal human keratinocyte (HaCaT) as a control and HPV-16 positive cervical cancer (SiHa) cell line. Two cell lines were studied differential expressed genes by using GeneFishing^(TM) PCR and analyzed with BLAST search. Results : As compared with normal, cervical cancer cell line was showed 25 up-regulated genes including the S1-2-2, S5-1 and 24 down-regulated genes. Conclusion : GeneFish^(TM) PCR test is very sensitive and effective method for detection of changed gene expression. We could search differentially expressed genes between normal and cervical cancer cell line. In the future, we need to research various genes function to participate in the process of tumor development and progression.