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SiHa 세포주에서 비소화합물 ( As2O3 , As4O6 ) 투여 후 cDNA microarray 를 이용한 유전자 발현의 변화
남궁성은(Sung Eun Namkoong),서미영(Mi Young Seo),박은경(Eun Kyung Park),팽기영(Gi Young Pang),김종국(Chong Kook Kim),박용석(Yong Serk Park),안웅식(Woong Shick Ahn),이준모(Jun Mo Lee),김도강(Do Gang Kim) 대한산부인과학회 2002 Obstetrics & Gynecology Science Vol.45 No.7
목적 : SiHa 세포주에서 비소 화합물에 의한 세포성장 억제 효과와 유전자 발현 변화를 cDNA microarray 기술을 이용하여 확인하고자 한다. 연구 방법 : 자궁경부암 세포주인 SiHa의 성장억제에 관한 연구를 위하여 96 well plate에 103의 SiHa cell을 분주한 후, 비소화합물을 처리하여 세포 성장억제를 MTT assay 방법을 이용하여 확인하였다. 한편 384개의 유전자로 제작된 DNA chip을 이용하여 자궁경부암 SiHa 세포주에 비소화합물 1 uM을 처리하고 48시간 후의 total RNA를 추출하여 gene expression profile을 관찰하였다. 결과 : 자궁경부암 세포주인 SiHa cell의 성장억제에 관한 연구에서 비소화합물을 각각 0.5, 1, 2, 3, 4, 5 uM로 처리하여 4일간 관찰한 결과 4일째에 As2O3의 경우 각각 9.2, 56, 89, 93, 96, 96%, As4O6의 경우 54, 84, 84, 85, 87%의 세포증식억제가 관찰되었다. DNA 칩의 유전자 발현에 있어서 As2O3의 경우, 2배 이상 변화한 유전자는 thymidylate synthetase, cyclin B1, CDC 20 등 약 47여개 정도였으며, As4 O6의 경우, 대조군과 비교하여 2배 이상 변화한 유전자는 CDC 20, cyclin B1, primase, proliferating cell nuclear antigen 등 약 78여 개의 유전자가 변화한 것으로 나타났다. 결론 : SiHa cell에서 비소화합물에 의한 세포성장억제를 확인할 수 있었으며 유전자 발현의 변화에 있어서는 As2O3보다는 (47 genes) As4O6가 더 많은 변동을 일으켰으며 (78 genes) 이중 공통적으로 증가한 유전자는 6개이고 공통적으로 감소한 유전자는 26개로서 이에 대한 기능적인 면은 더 많은 연구가 필요하리라 생각된다. Objective : To obtain information on the growth inhibition effect of arsenic compounds and gene expression profiles using cDNA microarray technique in SiHa cell lines. Methods : We cultured 103 SiHa cell in 96 well plate and we investigated growth inhibition effects using MTT assay and also we performed gene expression profile experiment using 384 cDNA chip in SiHa cell after exposure of arsenics (As2O3, As4 O6 - 1 μM) for 48 hrs. Results : Arsenics (As2O3, As4 O6) inhibit the growth of SiHa cells (As2O3: 0.5, 1, 2, 3, 4, 5 μM - 9.2, 56, 89, 93, 96, 96%, As4O6: 0.5, 1, 2, 3, 4, 5 μM- 54, 84, 84, 85, 85, 87%) in 4 days culture. As2O3 and As4O6 induced apoptosis in SiHa cells. After exposure of As2O3, 47 genes were changed more than 2 times (eg, thymidylate synthetase, cyclin B1, CDC 20). In case of As4O6, 78 genes were changed more than 2 times (eg, CDC 20, cyclin B1, primase, proliferating cell nuclear antigen). Conclusion : we observed arsenic compound (As2O3, As4 O6) inhibit the growth of SiHa cell. In gene expression profiling experiment, 78 genes was changed the expression level 2 times more than that of reference RNA after treatment of As4O6 and 47 genes after treatment of As2O3. Through these result, we thought more study need in functional genomics after arsenic treated cervical cancer cells.
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