Isolation and Identification of Borrelia burgdorferi in Korea

Sunho Kee(기선호),Kyu-Jam Hwang(황규잠),Hee-Bok Oh(오희복),Moon-Bo Kim(김문보),Jea-Chul Shim(심재철),Han-Il Ree(이한일),Kyung-Seok Park(박경석) 大韓微生物學會 1994 大韓微生物學會誌 Vol.29 No.4

HDRA 방법을 이용한 연부육종에서의 생체외 항암제 감수성 검사

박종훈(Jong Hoon Park),전대근(Dae Geun Jeon),조완형(Wan Hyung Cho),송원석(Won Seok Song),이수용(Soo Yong Lee),김문보(Moon Bo Kim) 대한정형외과학회 2005 대한정형외과학회지 Vol.40 No.1

목적: 연부육종의 진단 시에 채취한 일부 조직으로 in vitro조직배양 기술을 이용한 감수성 검사를 실시하여 유용한 항암제 선택의 지침을 마련할 수 있는 가능성을 보고자 하였다. 대상 및 방법: 2002년 3월부터 2004년 3월까지 본원 정형외과에 내원하여 연부육종으로 진단을 받은 환자가운데 조직배양에 필요한 검체를 확보할 수 있었던 30예를 대상으로 하였다. 결과: 모든 연부 종양에서 통계학적으로 의미 있는 저해율을 보인 제제는 Doxorubicin (Adriamycin)과 CDDP (Cisplatin)이었다. Doxorubicin의 경우 지방육종에서 가장 감수성이 높았으며, CDDP의 경우는 활막 육종과 악성 섬유성 조직구종에서 높은 감수성을 보였다. 조직학적 형태상으로 분류한 바에 의하면 원형 세포형과 다형성 세포형에서 방추 세포형에서 보다 두 제제의 저해율이 높았으며, 원형 세포형에서는 BLM (Bleomicin), CTX (Cyclophosphamide), vp-16 (Etopo-side), IFS (Ifosfamide) 등도 30% 이상의 성장 저해율을 보였다. 결론: 기존의 감수성 검사에 비하여 민감도 및 예민도에서 우수하고 쉬운 방법으로 보고되고 있는 HDRA를 이용한 항암제 감수성 검사는 향후 지속적인 데이터의 축적 및 장기간의 임상 결과와의 비교 평가를 거친다면 연부육종 항암제 선택의 좋은 지침이 될 수 있을 것으로 생각한다. Purpose: To investigate the variation in the chemosensitivity in soft tissue sarcoma (STS), fresh biopsy with sample for culture was tested using the histoculture drug response assay (HDRA) method. Materials and Methods: 30 samples of fresh STS were obtained during either biopsy or surgical removal at our hospital between March, 2002 and March, 2004. Results: Drug sensitivity testing by HDRA showed that two drug, Doxorubicin and CDDP, had a significantly higher inhibition rate than BLM, CTX, DTIC, VCR or VP-16 in the thirty 5T5 tested. Doxorubicin showed the highest inhibition rate in the liposarcoma. CDDP shoewd the significant inhibition rate in the synovial sarcoma and malignant fibrous histiocytpma. Depending on the morphological type, round cell sarcoma and pleomorphic sarcoma were more sensitive to Doxorubicin and CDDP than spindle cell sarcoma. In the round cell sarcoma, BLM, CTX, VP-16 and IF5 also showed above 30% inhibition rate. Conclusion: Drug sensitivity testing in STS should be evaluated with clinical outcome in the future and then HDRA will provide useful information for selection of an anticancer agent for STS because of its ease of evaluation and high predictability.

한국인에서 분리된 C형 간염 바이러스의 항원성 단백질 발현

김문보 中央大學校 遺傳工學硏究所 1993 遺傳工學硏究論集 Vol.6 No.1

우리나라 C형 간염 보균자에서 HCV DNA를 분리하여 noncoding 부위와 core부위의 DNA염기서열을 밝히고, E. coli에서 항원성 단백질을 발현시킨 결과 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. Noncoding 부위와 핵 부위에서 HCV DNA의 염기서열을 분석한 결과 분리된 HCV의 염기서열은 미국형과 63.5%, 일본형과 67.5%의 동질성을 보여 미국형보다 일본형에서 유사하였다. 2. HCV core DNA로 발현시킨 핵 단백질의 항원성을 관찰한 결과 분자량 20-22 KDa와 47KDa 부위에서 항원성을 보였다. 3. HCV의 유전자 내에 serine proteinase의 DNA가 존재함을 확인하였으며, 이들 유전자에 의해 발현된 단백질은 serine-like proteinase였고, 이들 효소는 C형 간염 양성자 혈청 및 단클론 항체와 특이적으로 면역반응 하므로서 그 항원성이 증명되었다. 4. 이들 효소 단백질의 분자량은 SDS-PAGE상에서 15-22 KDa과 25-32 KDa이었다. Hepatitis C virus (HCV) is the major causative agent of post transfusion non-A, non-B hepatitis which is often liver disease and developed into the malignant disease such as liver cirrhosis and hepato cellular carcinoma. An experiment to express antigenic protein of HCV was carried out by PCR using isolated DNA from sera of Korean HCV carriers. And the nucleotide and deduced amino acid sequence of noncoding and core region of HCV were also analyzed by DNAstar software. It showed sequence homology at the nucleotide level of about 67.5% with the Japanese HCV prototype, and about 63.5% homology with the American HCV prototype. Core protein of structural region of HCV was expressd in Escherichia coli(E.coli) XL-1 blue strain. Two induced protein, 22 KDa and 47 KDa, were reactive to HCV monoclonal antibody and sera of patients with chronic HCV by immunoblotting analysis. Viral serine-like proteinase DNA was isolated and expressed in E.coli KM-392 strain and two expressed proteins, 15-22 KDa and 25-32 KDa, also were reactive to monoclonal antibody and patients sera by immunoblotting anaysis. These result indicates that 22 and 47 KDa core protein, and 15-22 and 25-32 KDa serine-like proteinase of HCV expressed in E.coli could be used as an serodiagnostic antigen for anti-HCV and immunogens for HCV vaccine.

1994년도 무균성 뇌막염 환아에서 원인바리러스 동정

김종현,김문보,윤재득,김기순,서순덕,박재현,김동수 대한감염학회 1995 감염 Vol.27 No.1

목 적 : 뇌막염은 뇌막의 염증성 반응으로 여러가지 병원균에 의해서 올 수 있다. 특히 소아에서는 무균성 뇌막염이 많은 것으로 알려져 있고 이중 대다수가 바이러스에 의한 것이다. 특히 장바이러스가 무균성 뇌막염의 약 85%를 차지하고 있다. 1993년도 우리나라에서는 echovirus 9, 30에 의한 뇌막염의 전국적인 대유행이 있었다. 이러한 원인 바이러스는 매년 달라질 수 있으므로 1994년도 봄철에 뇌막염으로 입원하는 환자들의 원인 바이러스를 동정하여 보고하는 바이다. 방 법 : 1994년도 5월과 6월에 걸쳐 연세대학교 의과대학 세브란스 소아과에 입원하여 무균성 뇌막염으로 진단된 환아 11예를 대상으로 임상적 관찰 및 바이러스 동정을 시행하였다. 가검물은 환아의 뇌척수액과 대변을 동시에 채취하여 배양된 RD세포와 HEP-2 세포에 접종하여 세포병변을 관찰한 후 enterovirus serum pool 에 의한 중화 시험을 하였다. Piore와 Nicoletta의 방법에 의하여 세포배양액에서 RNA를 추출하고 PCR에 의하여 oligonucleotide를 합성하였다. 그 후 noncoding RNA PCR에 의하여 DNA를 합성하고 전기영동을 거쳐 확인하였다. 결 과 : 1) 임상양상 및 경과는 전형적인 무균성뇌막염의 양상을 보였다. 2) 총 11예 중 4예에서 echovirus가 자랐으며, 1예에서 뇌척수액에서만 배양된 것을 제외하고는 3예에서 뇌척수액과 대변에서 모두 echovirus 3가 배양되었다. 1예에서는 뇌척수액에서 echovirus 3이외에 coxsackie B virus가 검출되었다. 3) PCR product도 전형적인 장바이러스에 합당한 소견을 보였다. 결 론 : 1994년도 봄철에 연세대학교 의과대학 세브란스병원 소아과에 무균성뇌막염으로 입원한 환자의 원인 바이러스는 echovirus 3에 의한 감염이었다. Background : Aseptic meningitis, an acute inflammation of the meninges, is a common illness during childhood. Although the etiologic agent is not always identified, viruses are the usual responsible agents. Enterovirus especially causes approximately 85% of all cases of aseptic meningitis. In 1993, there was a nationwide epidemic of aseptic meningitis by echovirus 9 and 30. This study was done to detect the causative virus of aseptic meningitis in 1994. Methods : To isolate the causative viruses, stool and cerebrospinal fluid specimens from the patients with aseptic meningitis, who were admitted to Severance Hospital in 1994, were collected. Cultured RD cell and HEP-2 cell were inoculated with specimens to see the cytopathic effects. Neutralizing antibody tests using enterovirus serum pool were done on the specimens with the cytopathic effects. RNA was isolated from the cultured supernatants of the infected cells by Piore and Nicoletta method. Oligonucleotide was synthesized by PCR, which was run on polyacrylamide gel after purification with HPLC. After running the DNA produced by using Geneamp RNA PCR Kit, electrophoresis was done. Results : Echovirus was isolated from 4 out of 11 patients. Among these four, echovirus 3 was isolated from both CSF and stool in three patients. In one of these three, Coxsackie B virus was isolated as well from CSF. In the remaining one patient, echovirus 3 was present in CSF only. PCR product from this virus showed a 114 bp band on gel electrophoresis, which was the same PCR product from enterovirus isolated from stool specimens of the patients with aseptic meningitis in 1993. Conclusion : The causative virus of aseptic meningitis in patients who were admitted to Severance Hospital during the spring season of 1994 was Echovirus 3.

1995년도 무균성 뇌막염 환아에서 원인바이러스 동정

강완복,윤재득,김동수,김문보,김기순,서순덕 대한감염학회 1996 감염 Vol.28 No.4

목 적 : 뇌막염은 뇌막의 염증성 반응으로 여러 가지 병원균에 의해서 올 수 있다. 특히 소아에서는 무균성 뇌막염이 많은 것으로 알려져 있고 이중 대다수가 바이러스에 의한 것이다. 특히 장바이러스가 무균성 뇌막염의 약 85 % 를 차지하고 있다. 1993년도 우리 나라에서는 echovirus 9, 30 에 의한 뇌막염의 전국적인 대유행이 있었고 1994년도에는 echovirus 3 에 의하여 뇌막염이 초래되었다. 이러한 뇌막염의 원인 바이러스는 매년 달라질 수 있으므로 1995년도 봄철에 뇌막염으로 입원하는 환자들의 원인 바이러스를 동정하여 보는 바이다. 방 법 : 1995년도 5월과 6월에 걸쳐 연세대학교 의과대학 세브란스병원 소아과에 입원하여 무균성 뇌막염으로 진단된 환아 19 례 를 대상으로 임상적 관찰 및 바이러스동정을 시행하였다. 가검물은 환아의 뇌척수액과 대변을 동시에 채취하여 배양된 RD 세포와 HEp-2 세포에 접종하여 세포병변을 관찰한 후 enterovirus serum pool 에 의한 중화시험을 하였다. Piore 와 Nicoletta 의 방법에 의하여 세포배양액에서 RNA 를 추출하고 PCR 에 의하여 oligonucleotide 를 합성하였다. 그 후 noncoding RNA PCR 에 의하여 DNA 를 합성하고 전기영동을 거쳐 확인하였다. 결 과 : 1) 임상양상 및 경과는 전형적인 무균성 뇌막염의 양상을 보였다. 2) 총 19 례 중에서 8 례 에서 enterovirus 가 자랐으며, 이 중 5례 에서는 coxsackie B3 가 동정되었으며 3 례 에서는 echovirus 7 이 1 례 에서는 echovirus 3 이 동정되었다. 이중 1 례 에서는 coxsackie B3 와 echovirus7 이 동시에 동정되었다. 3) PCR product도 전형적인 장 바이러스에 합당한 소견을 보였다. 결 론 : 1995년도 봄철에 연세대학교 의과대학 세브란스병원 소아과에 무균성 뇌막염으로 입원한 환자의 원인바이러스는 coxsackie B3 와 echovirus 7 에 의한 감염이었다. Background : Aseptic meningitis is a common illness during childhood. Although the etiologic agent is not always identified, viruses are the usual responsible agents. Enterovirus especially causes approximately 85% of all cases of aseptic meningtis. In 1993, there was a nationwide epidemic of aseptic meningitis by echovirus 9 and 30. And we reported that the cause of aseptic meningitis in 1994 was echovirus 3. This study was done to detect the causative virus of aseptic meningitis in 1995. Methods : To isolate the causative viruses, stool and cerebrospinal fluid specimens from the patients with aseptic meningitis, who were admitted to Severance Hospital in 1995, were collected. Cultured RD cells and HEp-2 cells were inoculated with specimens to see the cytopathic effects. Neutralizing antibody tests using enterovirus serum pool were done on the specimens with the cytopathic effects. RNA was isolated from the cultured supernatants of the infected cells by Piore and Nicoletta method. Oligonucleotide was synthesized by PCR, which was run on polyacrylamide gel after purification with HPLC. After running the DNA produced by using Geneamp RNA PCR Kit, electrophoresis was done. Results : Enterovirus was isolated from 8 out of 19 patients. Among these eight, Coxsackie B3 was isolated in 5 patients. Echovirus 7 was isolated in 3 patients. In one of these patients, Coxsackie B3 and echovirus 7 was isolated simultaneously. Echovirus 20 was isolated in one patient. PCR product from these viruses showed a 154 bp band on gel electrophoresis, which was the same PCR product from echovirus 3 supplied from ATCC. Conclusion : The causative viruses of aseptic meningitis in patients who were admitted to Severance Hospital during the spring season of 1995 were Coxsackie B3 and echovirus 7.