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대장균에서 Bacillus subtilis glutamyl-tRNA synthetase의 과발현 및 정제
오종신 ( Jong Shin Oh ),윤장호 ( Jang Ho Yoon ),홍광원 ( Kwang Won Hong ) 한국응용생명화학회 2002 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.45 No.4
Expression of Bacillus subtilits glutamyl-tRNA synthetase (GluRS) in Escherichia coli is lethal for the host, probably because this enzyme misaminoacylates tRNA_1^Gln with glutamate in vivo. In order to overexpress B. subtilis GluRs, encoded by the gltX gene, in E. coli, this gene was amplified from B. subtilis 168 chromosomal DNA using PCR method and the entire coding region was cloned into a pET11a expression vector so that it was expressed under the control of the T7 promoter. The resulting recombinant pEBER plasmid was transformed into E. coli Novablue(DE3) bearing the T7 RNA polymerase gene for expression. After IPTG treatment, the overproduced enzyme was purified using ammonium sulfate fractionation, Source Q anion exchange chromatography, Superdex-200 gel filtration, and Mono Q anion exchange chromatography. The purified enzyme yielded 18-fold increase in specific activity over the crude cell extract and its molecular weight was approximately 55 kDa on SDS-PAGE.
대장균에서 Bacillus subtilis glutamyl-tRNA synthetase의 과발현 및 정제
오종신,윤장호,홍광원,Oh, Jong-Shin,Yoon, Jang-Ho,Hong, Kwang-Won 한국응용생명화학회 2002 한국농화학회지 Vol.45 No.4
Bacillus subtilis의 glutamyl-tRNA synthetase(GluRS)는 대장균에서 발현될 때 숙주세포의 $tRNA_1^{Gln}$에 glutamate를 잘못 아실화하여 독성을 나타내는 것으로 추정되고 있다. 이러한 B. subtilis GluRS를 대장균에서 과발현 시키기 위하여 B. subtilis 168 균주의 chromosomal DNA에서 GluRS의 유전자(gltX)를 PCR을 이용하여 증폭하고 T7 promoter에 의해 발현이 조절되는 pET11a expression vector에 클로닝하였다. 이 재조합된 pEBER plasmid DNA로 T7 RNA polymerase를 갖는 대장균 NovaBlue(DE3)에 형질전환하였다. 형질전환된 대장균에 IPTG를 처리하여 과량 생성된 GluRS 단백질은 ammonium sulfate 분별침전 후 EPLC를 이용한 Source Q column anion exchange chromatography, Superdex 200 column gel filtration, Mono Q column anion exchange chromatography로 정제하였다. 정제된 B. subtilis의 GluRS 분자량은 약 55 kDa이었으며 효소의 활성도는 조효소액에 비해 18배로 증가하였다. Expression of Bacillus subtilis glutamyl-tRNA synthetase (GluRS) in Escherichia coli is lethal for the host, probably because this enzyme misaminoacylates ${tRNA_l}^{Gln}$ with glutamate in vivo. In order to overexpress B. subtilis GluRS, encoded by the gltX gene, in E. coli, this gene was amplified from B. subtilis 168 chromosomal DNA using PCR method and the entire coding region was cloned into a pET11a expression vector so that it was expressed under the control or the T7 Promoter. The resulting recombinant pEBER plasmid was transformed into E. coli Novablue (DE3) bearing the T7 RNA polymerase gene for expression. After IPTG treatment, the overproduced enzyme was purified using ammonium sulfate fractionation, Source Q anion exchange chromatography, Superdex-200 gel filtration, and Mono Q anion exchange chromatography. The purified enzyme yielded 18-fold increase in specific activity over the crude cell extract and its molecular weight was approximately 55 kDa on SDS-PAGE.
김연일 ( Yeon Il Kim ),백원진 ( Won Jin Baek ),오종신 ( Jong Shin Oh ),김진영 ( Jin Young Kim ),정태용 ( Tae Yong Jeong ),장정민 ( Jeong Min Jang ) 한국농공학회 2011 한국농공학회 학술대회초록집 Vol.2011 No.-
본 연구에서는 최근 지반의 강도증진과 고품질의 콘크리트를 생산하기 위해 각종 혼화재의 개발 및 탄산칼슘에 대한 연구 성과들이 활발하게 이루어 진 점에 착안하여 미생물에 의해 생성된 침강성 탄삼칼슘이 지반 강도를 발현할 수 있는 지를 알아보고자 하였다. 이와 같이 미생물 반응으로 생성된 침강성 탄산칼슘이 지반 강도를 발현할 수 있는지를 알아보기 위해 미생물 및 침강제와 혼화제의 혼합에 따른 미생물 고결토의 강도 특성과 성질을 비교ㆍ분석하고 반응 메카니즘을 파악하기 위해 일축압축시험, 전자현미경분석(SEM)과 X-회절 분석(XRD)시험을 수행하였다. 그 결과 미생물 고결토에 대한 일축압축시험을 통해서 강도가 증가되는 효과가 있는 것을 알 수 있었다. 또한, 시료의 반응 메카니즘 분석결과 전자현미경분석(SEM)에서는 미생물과 침강제가 토립자 사이에서 반응을 일으켜 표면에 흡착성 물질층이 형성되고 공극이 채워져 단단한 입자로 결합되는 것을 확인하였다. 미생물과 침강제의 반응으로 생성된 침전물을 X-회절 분석(XRD)을 통해 조사한 결과, 지반의 강도형성에 영향을 미치는 탄산칼슘(CaCo3) 중의 하나인 바테라이트(Vaterite)와 규산염, 규화물 등이 생성된 것을 확인할 수 있었다. 마지막으로 양생기간이 길고, 최적함수비에 가까울수록 강도가 증가하였고, 미생물과 침강제의 함유량이 증가함에 따라 미생물 고결토의 강도가 감소함을 알았다.
고지혈증인 성인 남자의 두류와 유지류 섭취와 혈청지질간의 상관성에 관한 연구
김선옥,박미경,오종신,이현옥 한국콩연구회 2003 韓國콩硏究會誌 Vol.20 No.2
This study was conducted to investigate the relation between consumption of soybean and their products, oils and fats foods and serum lipids level in 27 hyperlipidemic subjects. The average age of the subjects were 47.7 years old. Average height, weight, BMI, and PIBW were 167.2㎝, 70.9㎏, 25.3 and 117.9 respectively. The averae systolic and diastolic blood pressure were 127.1 ㎜Hg and 84.2 ㎜Hg. The levels of serum triglyceride, total cholesterol, HDL-cholesterol, LDL-holeserol, AI, and LDL/HDL of subjects were 313.7±98.7㎎/dl, 250.2±29.5㎎/dl, 42.0±15.0㎎/dl, 145.4±35.1㎎/dl, 5.2±1.9 and 3.7±1.5 respectively. Average intake of soybean and their products and oils and fats were 63.2g and 5.6g. Among anthropometric characteristics, height of subjects was negatively correlated with the levels of serum total cholesterol(p<0.05) and weigh, BMI, and PIBW of subjects were positively correlated with the levels of serum triglyceride, total cholesterol, LDL-cholesterol respectively(p<0.05). The relationships soybean and their products food intakes and serum lipid levels revealed that higher legumes intake led to lower serum total cholesterol level. The relationships oils and fats food intakes and serum lipid levels revealed that higher oils and fats intake led to higher serum total cholesterol and LDL-cholesterol level. In conclusion, soybean and their products consumption should be increased and oils and fats consumption decreased should be increased to reduce the risk of cardiovascular diseases in hyperlipidemic males.