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윤충효 선문대학교 첨단과학기술연구소 2001 첨단과학기술연구소 논문집 Vol.5 No.-
'게놈'이란 용어는 'gene'과 'chromosome'의 합성어이며, 게놈프로젝트란 게놈의 전 염기시열을 결정하고, 전체 유전자 정보의 해독을 목적으로 실시하는 국제적 협동프로젝트이다. 1970년에 확립된 재조합 DNA 실험이나 DNA 염기배열 결정의 방법을 사용하여, 특히 인간게놈 프로젝트가 1980년대 후반에 계획, 입안되어 1990년에 각국의 기관에서 실제로 진행되고 있다. 게놈프로젝트는 우선 게놈지도를 제작하여 여러 가지 형질을 도식화하고 그 염기배열을 결정 및 해석하여, 이러한 대량정보를 데이터베이스로 처리하여 이용하고 있다.
유전자 인공합성을 이용한 구제역 유전자 VP1의 제작과 Agrobacterium Vector System을 이용한 담배 형질전환
이은정,윤병수,김성훈,강경선,박영두,임희영,윤충효 한국식물생명공학회 2004 JOURNAL OF PLANT BIOTECHNOLOGY Vol.31 No.4
FMDV is a viral pathogen that caused foot-and-mouth disease in animals. VP1 is a major capsid protein of FMDV. It is known as one of best materials for the FMDV diagnosis and for the development of protein vaccine. In this study, 633 bp of VP1 gene was modified for the expression of VP1 in plant, based on the VP1 DNA sequence from FMDV taiwan O type and from FMDV isolated vietnam. The deduced DNA fragment was artificially synthesized using the multiple fragment extension with long-nucleotides. A new plant transgenic vector system, pCAMBIA1390II was constructed on the basis of pBI121 and pCAMBIA1390. Using this vector system and GFP gene or modified VP1 gene, each target gene was introduced into Nicotiana tabacum. The insertion of whole target gene was successfully confirmed in each transgenic plant named GFP-A7 and VP1-4, respectively. The expression level of each gene was estimated by RT-PCR and Real-Time PCR using VP1, GFP specific primers. FMDV는 동물에서 구제역을 일으키는 병원체이며, VP1은 이 바이러스의 주요 capsid 단백질이므로 구제역의 진단과 단백질 백신의 개발에 가장 많이 사용되는 재료 중 하나이다. 본 연구는 FMDV taiwan O형과 베트남에서 분리된 FMDV의 VP1 sequence를 기반으로 식물에서 VP1 유전자의 발현을 위하여 633 bp의 VP1 유전자로 재편집하였으며, 이를 long-nucleotide를 사용한 multiple fragment extension 방법을 사용하여 인공적인 DNA 단편을 합성하였다. 또한 새로운 식물 형질전환 벡터로 pBI121 과 pCAMBIA1390의 장점을 수용하여, hygromycin 저항성과 CaMV 35S promotor를 포함하는 pCAMBIA II를 제작하였다. 제작된 벡터와 VP1 유전자 및 GFP 유전자를 사용하여 담배를 형질전환시켰고, 각각의 형질전환 식물체내에서 전체길이의 target gene (VP1)의 성공적인 삽입을 확인하였다. 각 유전자의 발현은 RT-PCR과 Real-Time PCR의 결과로 측정하였으며, VP1 유전자의 전사가 담배 내에서 이루어졌음과 고효율의 전사체를 만드는 형질전환체 VP1-4를 선별하였다.
Real-time PCR을 이용한 스트레스에 따른 벼의 Receptor like kinase (RLK) 유전자의 발현 변화 분석
강민희,김일욱,한상훈,윤충효,윤병수 한국식물생명공학회 2008 식물생명공학회지 Vol.35 No.4
In plant, Receptor-like kinases (RLKs) are protein family, though its function is not yet understood, consisted of a predicted signal sequence, single transmembrane region, and cytoplasmic kinase domain. RLKs are involved in hormonal response pathways, cell differentiation, plant growth and development, self-incompatibility, and symbiont and pathogen recognition. In this study, expression levels of RLG1, RLG5, RLG6, RLG#6, RLG8, RLG10, RLG17, RLG18 and RLG20 were analyzed by Real-time PCR, when rice (Oryzae sativa) was treated abiotic stress. The expression levels of all RLGs were compared each other by analyzed value of threshold cycles (CT). Consequently, RLGs were suppressed by NaCl as salinity stress, and expression of each RLK genes were showed difference treated salicylic acid and wound, respectively. However, All RLGs were induced under low temperature condition. Therefore, our results indicate protection-function of RLK genes to be an early response of rice against cold weather.
윤필용,유삼규,송원용,윤충효,임용표 한국식물생명공학회 1997 식물생명공학회지 Vol.24 No.3
The R-mb locus of maize is one of several genes that encode tissue-specific transcriptional regulator for the anthocyanin biosynthesis in plant parts and the aleurone layer in seeds. We found that the seed pigment frequencies gradually decreased at selfed progenies of the R-mb genetic stocks. In order to analyze the genomic structure of R-mb locus components, genomic Southern blot was performed by using R specific probe, pR-nj:1. Two bands were detected at the size of about 3.9 and 7.75kb. Five R-mb positive clones (mb-II, III, V,Ⅵ, and Ⅶ) were obtained by screening of maize genomic λFIXII library using R specific probe pR-nj:1. We constructed the restriction map of clone mb-II (7.75Kb positive) and mb-Ⅵ (3.9Kb positive), and have compared these with other R locus genes. From genetic and molecular analysis, it is suggested that R-mb complex consists two copy of R elements, and each element shows the paramutagenic and gene silencing effects by the fashion of cis-inactivation. 옥수수의 색소합성을 조절하는 pattern allele의 하나인 R-mb유전자의 구조와 유전적 분석을 수행하였다. R-mb 유전자의 유전분석을 수행한 결과를 검토하여 볼 때 후대로 진행됨에 따라 색소 발현빈도_의 감소경향을 보이고 있었다. 또한 R-mb 유전자가 몇 개의 R subcomplex로 존재하는가를 알기 위해서는 우선 R specific probe인 pR-nj:1를 이용하여 Southern blot hybridization을 실시한 결과 약 3.9kb 및 약 7.75kb영역에서 2개의 band가 관찰되었다. R-mb 유전자를 클로닝하기 위하여 λFIXIIvector를 이용하여 library를 만들고 이로부터 mb-II, III, V, Ⅵ, Ⅶ 등 5개의 clone을 3차의 screen을 거쳐 확보하고 이중 mb-II 및 mb-Ⅵ를 중심으로 제한효소지도를 작성하였으며, 이 유전자의 구조와 기타 R locus관련 유전자들과 비교하였으며, 이러한 두 개의 R 요소가 어떻게 색소발현에 영향을 미치는가에 대에 검토하였다.