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- 저자 : 김재열 ( C . S . Han (검색결과 138 건)
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폐암세포주의 TNF-$\alpha$ 유발 apoptosis에서 NF-${\kappa}B$의 역할
김재열,이승희,황보빈,이춘택,김영환,한성구,심영수,유철규,Kim, J.Y.,Lee, S.H.,HwangBo, B.,Lee, C.T.,Kim, O.H.,Han, S.K.,Shim, O.S.,Yoo, C.G. 대한결핵및호흡기학회 2000 Tuberculosis and Respiratory Diseases Vol.48 No.2
연구배경: 현재 사용되고 있는 많은 항암제는 암세포의 apoptosis를 유도함으로서 암세포를 사멸시키는 것이 주된 작용 기전이다. 항암제에 의한 치료 실패의 주된 원인은 암세포의 apoptosis에 대한 내성 획득에 의한 것으로 이해되고 있다. 최근의 보고에 의하면 많은 암세포주에서 apoptosis에 대한 내성 획득에 NF-${\kappa}B$의 활성화가 중요한 역할을 한다고 알려져 있지만 일부 세포에서는 상반된 결과를 보이고 있어 apoptosis에 대한 내성 획득과 NF-${\kappa}B$의 활성화와의 관련성은 세포에 따라 차이를 보이고 있다. 본 연구에서는 비소세포폐암 세포주가 TNF-$\alpha$ 유발 apoptosis에 저항을 나타내는 기전에서 NF-${\kappa}B$의 역할을 규명하고자 하였다. 방 법: 비소세포폐암세포주인 NCI-H157 세포에 TNF-$\alpha$ cycloheximide(CHX), TNF-$\alpha$와 CHX를 각각 투여하고 24시간 후 MTT assay로 세포생존율을 평가하였고 apoptosis의 발생 유무는 PARP에 대한 Westrn 분석으로 평가하였다. Ad5LacZ와 $Ad5I{\kappa}B{\alpha}SR$를 20시간 동안 감염시킨 각각의 세포를 1, 5, 10, 20, 50 ng/ml의 TNF-$\alpha$로 24, 48시간 자극 후 MTT assay를 시행하였고, 같은 농도의 TNF-$\alpha$로 24, 48시간 자극 후 PARP에 대한 Western 분석을 시행하였다. $I{\kappa}B{\alpha}$의 분해를 억제하는 proteasome inhibitor 인 MG132를 전처치하고 TNF-$\alpha$로 24, 48 시간 자극 후 MTT assay와 PARP에 대한 Westrn 분석을 시행하였다. $Ad5I{\kappa}B{\alpha}SR$를 감염시킨 세포를 TNF-$\alpha$로 자극한 후 NF-${\kappa}B$의 활성화를 EMSA로 평가하였다. 결 과: 1. TNF-$\alpha$ 단독 투여로는 세포 생존율의 감소와 apoptosis가 관찰되지 않았고 TNF-$\alpha$와 CHX를 같이 투여하였을 때는 세포 생존율의 감소와 함께 apoptosis가 유도되었다. 2. $Ad5I{\kappa}B{\alpha}SR$의 감염으로 $I{\kappa}B{\alpha}$가 과발현된 세포와 MG132를 전처치한 세포에서 TNF-$\alpha$ 자극에 의한 NF-${\kappa}B$의 활성화가 억제되었다. 3. $Ad5I{\kappa}B{\alpha}$ SR를 감염시킨 세포와 MG132를 전처치하여 NF-${\kappa}B$의 활성을 억제한 세포에서 TNF-$\alpha$ 자극 후 세포 생존율이 감소하고 apoptosis가 유도되었다. 결 론: 비소세포폐암 세포주의 TNF-$\alpha$ 유발 apoptosis에 대한 내성은 NF-${\kappa}B$의 활성화에 의해 생성되는 새로운 단백의 발현에 의한 것으로 생각되며, NF-${\kappa}B$ 활성화의 억제로 이를 극복할 수 있을 것으로 사료된다. Background: The main reason for the failure of anti-cancer chemotherapy is the build up of resistance by cancer cells to apoptosis. The activation of NF-${\kappa}B$ in many cancer cell lines is reported to be underlying mechanism behind the build up of resistance of cancer cells to apoptosis. However, this relationship varied depending on the cells used in the experiments. In this study, the role of NF-${\kappa}B$ activation in the TNF-$\alpha$-induced apoptosis in lung cancer cell line was evaluated. Methods: NCI-H157 cells were used in all experiments. Cells were exposed to a high dose of TNF-$\alpha$(20 ng/ml) for 24 or 48 hours with or without blocking NF-${\kappa}B$ activation. TNF-$\alpha$-induced activation of NF-${\kappa}B$ was inhibited either by overexpression of $I{\kappa}B{\alpha}$-super repressor($I{\kappa}B{\alpha}$-SR) or by pre-treatment with proteasome inhibitor. Cell viability and apoptosis were evaluated with MTT assay and Western blot analysis for PARP fragment, respectively. Results: Cell viability of NCI-H157 cells was not affected by TNF-$\alpha$ treatment alone; however, combined treatment with TNF-$\alpha$ and cycloheximide reduced cell viability significantly, indicating that resistance to TNF-$\alpha$ is mediated by the new proteins synthesized after TNF-$\alpha$ stimulation. To evaluate the role of NF-${\kappa}B$ in the transcription of anti-apoptotic proteins. delete NF-${\kappa}B$ activation was inhibited before TNF-$\alpha$ stimulation. as described above. $AD5I{\kappa}B{\alpha}$-SR-transduction inhibited TNF-$\alpha$-induced nuclear translocation of p65. TNF-$\alpha$-induced cell death and apoptosis increased after inhibition of TNF-$\alpha$-induced activation of NF-${\kappa}$ by methods. Conclusion: These results suggest that TNF-$\alpha$-induced activation of NF-${\kappa}B$ may be closely related to the acquisition of the resistance to TNF-$\alpha$-induced apoptosis in lung cancer cells. Therefore. blocking of NF-${\kappa}B$ pathway can be a useful therapeutic modality in the treatment of lung cancer.
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패혈증환자에서 혈청 TNF-$\alpha$ 및 IL-1$\beta$
김재열,이춘택,김영환,한성구,민경업,김유경,심영수,유철규,Kim, Jae-Yeol,Choi, Hyung-Seok,Lee, Choon-Taek,Kim, Young-Whan,Han, Sung-Koo,Min, Kyung-Up,Kim, Yoo-Young,Shim, Young-Soo,Yoo, Chul-Gyu 대한결핵및호흡기학회 2000 Tuberculosis and Respiratory Diseases Vol.49 No.2
패혈증에서는 지속적인 내독소 자극에 의해 염증 반응이 계속 유발될 수 있으나, 염증반응에 주도적인 역할을 하는 말초혈액 단핵구는 반응도를 스스로 낮춤으로서 염증 반응을 감소시키는 경향을 보이는데, 이러한 현상을 내독소 내성(endotoxin tolerance)라고 한다. 내독소 내성은 과다한 염증반응에 대한 자체의 방어작용으로 이해되고 있다. 본 연구에서는 조직액에서 감염균이 증명된 패혈증 환자를 대상에서 추출한 말초 혈액 단핵구에서 내독소 내성의 현상을 관찰하고자 하였다. 방법 : American College of Chest Physician-Society의 Critical Care Medicine Consensus Conference에서 정한 sepsis의 기준을 만족하고, 감염균이 확인된 14명의 환자를 대상으로 하였으며 질환의 중증도는 APACHE II score를 이용하여 평가하였다. 대상환자의 혈청에서 TNT-$\alpha$와 IL-1$\beta$의 농도를 측정한 뒤, 말초혈액 단핵구를 추출, 배양하여, 내독소(100 ng/ml)로 자극하였다. 내독소 자극 후 24시간 뒤에 배양 상층액에서 ELISA 방법으로 TNT-$\alpha$와 IL-1$\beta$의 농도를 측정하였다. 결과 : 대상 환자는 총 14명(남자 : 8 명, 여자 6명)으로 APACHE II score는 12.2$\pm$5.7 이었다. 감염의 원발 부위는 뇨관감염, 폐렴, 아급성심내막염, 도관감염, 급성담관염 등이었다. 감염 원인균은 그람음성 간균 10례, 그람 양성균 6례였고, 이 중에는 복합감염이 2례가 있었다. 환자군의 혈청 TNF-$\alpha$는 4명에서 측정이 기능했고 평균치는 29.7$\pm$527.7 pg/ml 이었다. IL-1$\beta$는 1명에서 측정가능했고 측정치는 16.1 pg/ml 이었다. 내독소 자극 후 말초혈액 단핵구 배양 상층액의 TNF-$\alpha$농도는 패혈증 환자는 2,703$\pm$2,066 pg/ml, 대조군은 2,101$\pm$1914 pg/ml 이었고, IL-1$\beta$ 농도는 환자군은 884$\pm$1,050 pg/ml, 대조군은 575$\pm$558 pg/ml으로 두 군 사이에 의미있는 차이는 없었다. 결론 : 본 연구에서는 예상과는 달리 패혈증 환자의 말초혈액 단핵구에서 내독소내성을 관찰할 수 없었다. 향후 보다 중증의 환자를 대상으로 하고, 조기에 혈액을 채취하며, 말초혈액 상층액에 혈청을 추가하는 등의 보완을 통하여 재평가가 필요할 것으로 판단된다. Background : It is well known that when macrophages are stimulated with endotoxin, they produce a wide variety of cytokine mediators, including TNF-$\alpha$ and IL-1$\beta$. However, there is an alteration in the macrophages' responsiveness when they are challenged with repeated bouts of endotoxin, termed "endotoxin tolerance" which is regarded as a self-protective phenomenon from continuous stimulation. In this study, endotoxin tolerance in the peripheral blood monocytes of sepsis patients was evaluated. Methods : Fourteen patients with organism-documented sepsis were included. The severity of illness was evaluated by APACHE II score. Peripheral blood monocytes were isolated from the patients and diluted to $1{\times}10^5$ well. After stimulation with endotoxin (LPS of E. coli O114 : B4, 100 ng/ml), they were incubated at $37^{\circ}C$ in 5% $CO_2$ incubator for 24 hours. Supernatant was collected for the measurement of TNF-$\alpha$ and IL-1$\beta$ with ELISA method. Peripheral blood monocytes of seven healthy volunteers were used as control. Results : The APACHE II score (mean$\pm$SD) of the patients at the time of blood sampling was 12.2$\pm$5.7. The primary infection foci were urinary tract infection, pneumonia, subacute bacterial endocarditis, and catheter related infection, etc. The causative organisms were gram negative rods (10 cases), gram positive cocci (6 cases) with two cases of mixed infection. Serum TNF-$\alpha$ could be measured in 4 cases with 29.9$\pm$27.7 pg/ml. Serum IL-1$\beta$was measurable in only one patient. The TNF-$\alpha$ level of supernatant of cultured peripheral blood monocytes was 2,703$\pm$2,066 pg/ml in patients and 2,102$\pm$1914 pg/ml in controls. The IL-1$\beta$level of supernatant was 884$\pm$1,050 pg/ml in patients and 575$\pm$558 pg/ml in controls. There was no difference of TNF-$\alpha$ and IL-1$\beta$ level between patients and controls. Conclusion : We cannot prove the phenomenon of endotoxin tolerance in this study. Future study needs to be focused on the more severe sepsis patients who were taken for sampling earlier. Addition of serum to the culture medium could be an another valuable option for the success of this study.
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김재열(Jae-Yeal Kim),한재호(Jae-ho Han),정연오(Yeon-oh Jung),김병호(Byung-Ho Kim) 한국기계가공학회 2009 한국기계가공학회 춘추계학술대회 논문집 Vol.2009 No.6
공작기계의 주축의 분해 없이 작업현장에서 직접 가공할 수 있는 전용 연삭기 개발을 위하여 1차적인 설계에 따라 가공하고 연마가동부를 제작하였으나 연마를 위해 고속회전하며 직선운동할 때 진동이 발생하였다. 또한 고주파 스핀들의 회전에 따른 힘이 예상보다 강하여 각도 조절장치의 설계에 있어서도 설계변경이 불가피하였다. 이를 보완하여 2차 설계를 한 후 다시 연마가동부를 제작하면서 대두된 문제로서 정확한 연삭데이터를 얻기 위해서는 직선운동과 회전운동부의 제어에 의한 데이터 도출이 필요하다고 판단되어 필요한 부분을 외주 처리하여 추진하고 있다. 본 연구의 개발을 통하여 공작기계 보정 및 수리시간 절약으로 설비의 유휴시간을 단축시킴으로써 설비생산성의 향상 효과를 가져올 것으로 사료되며, 지속적인 공작기계의 정도를 유지 가능하므로 고정밀도의 가공이 가능하다. 외국기술에 의존하던 국내 연삭기 관련 업게의 독자적인 기술의 개발로 기술력 확보와 관련 산업의 발전에 기여할 것이다. Use high definition abrader and practicing is practicing method after disjoint main shaft disjointing headstock of machine tool to grind now main shaft of machine tool but this method has several controversial points. This research does not disjoint damaged main shaft of machine tool to solve these problem, and develop spindle exclusive use grinder that can grind main shaft damaged directly attaching exclusive use grinder to bedof machine tool on the spot.
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김재열(Jae-Yeal Kim),한재호(Jae-ho Han),정연오(Yeon-oh Jung),김병호(Byung-Ho Kim) 한국기계가공학회 2009 한국기계가공학회 춘추계학술대회 논문집 Vol.2009 No.6월
공작기계의 주축의 분해 없이 작업현장에서 직접 가공할 수 있는 전용 연삭기 개발을 위하여 1차적인 설계에 따라 가공하고 연마가동부를 제작하였으나 연마를 위해 고속회전하며 직선운동할 때 진동이 발생하였다. 또한 고주파 스핀들의 회전에 따른 힘이 예상보다 강하여 각도 조절장치의 설계에 있어서도 설계변경이 불가피하였다. 이를 보완하여 2차 설계를 한 후 다시 연마가동부를 제작하면서 대두된 문제로서 정확한 연삭데이터를 얻기 위해서는 직선운동과 회전운동부의 제어에 의한 데이터 도출이 필요하다고 판단되어 필요한 부분을 외주 처리하여 추진하고 있다. 본 연구의 개발을 통하여 공작기계 보정 및 수리시간 절약으로 설비의 유휴시간을 단축시킴으로써 설비생산성의 향상 효과를 가져올 것으로 사료되며, 지속적인 공작기계의 정도를 유지 가능하므로 고정 밀도의 가공이 가능하다. 외국기술에 의존하던 국내 연삭기 관련 업게의 독자적인 기술의 개발로 기술력 확보와 관련 산업의 발전에 기여할 것이다. Use high definition abrader and practicing is practicing method after disjoint main shaft disjointing headstock of machine tool to grind now main shaft of machine tool but this method has several controversial points. This research does not disjoint damaged main shaft of machine tool to solve these problem, and develop spindle exclusive use grinder that can grind main shaft damaged directly attaching exclusive use grinder to bed of machine tool on the spot.
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