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한수곤,최인영,강찬호,고복래,최정식,이왕휴,Han, Soo-Gon,Choi, In-Young,Kang, Chan-Ho,Ko, Bok-Rai,Choi, Joung-Sik,Lee, Wang-Hyu 한국식물생명공학회 2006 식물생명공학회지 Vol.33 No.1
저온저항성 BN115 gene과 표지유전자로서 kanamycin에 저항성 있는 nptII gene을 가지고 있는 식물발현용 binary vector pBin19/BNl15가 도입된 A. tumefacience MP90을 국화잎과 공동배양 하였다. 또한 particle bombardment를 이용하여 목적으로 하는 유전자가 식물체에 안정적으로 도입되어 발현됨을 PCR 및 Real-Time PCR 검정으로 확인하였다. 국화잎과 공동배양에 사용된 Agrobacterium은 $5.0{\times}1.0{\mu}m$로 non-sporing, motile, rod 형이며, Callus는 pin이나 cork-borer에 의해 상처 난 잎 가장자리로부터 형성되어 식물체가 재분화 되었다. 유전자 도입조건은 Agrobacterium을$O.D._{600}{\approx}0.5$에서 20분간 공동배양 할 때, Particle bombardment는 helium 압력을 1,100 psi, target 거리를 9 cm로 유지했을 때, 가장 효율이 높았다. 5mg/L kanamycin이 들어 있는 배지에서 선발된 형질전환체는 PCR 분석으로 형질전환여부를 판별할 수 있었으며, 선발 10개체 중 9개체에서 purified pBN115와 같은 크기의 밴드가 형성되었다. Taq-Man probe를 이용한 Real-Time PCR 결과 $45{\sim}0.00045ng/{\mu}{\ell}$ 범위에서 pBN115 gene을 10배씩 serial dilution한 amplification plot는 일정한 간격으로 standard curve를 보였으며, slope는 -3.313975, R2는 0.998319이었다. Amplification plots의 형질전환체 $C_T$값은 $20.75{\sim}33.81$범위였으며, 유전자 copy수는 정량분석을 기초로 산출하였다. pBN115의 plasmid DNA를 serial dilution했을 때, standard는 $5.6{\times}10^{10}/45ng{\sim} 5.6{\times}10^5/0.00045ng\;copies/{\mu}{\ell}$이 었으며, 형질전환체는 $3.86{\times}10^8{\sim}12565.71 copies/{\mu}{\ell}$이었다. 따라서 PCR, Real-Time PCR 분석 결과 저온저항성 유전자가 국화의 genome에 안정적으로 도입되었음이 확인되었다. With the use of Agrobacterium and gene-gun, cold regulated gene (BN115) has been injected in Chrysanthemum leaf disc and transgenic plants have been produced successfully on the selection media containing phytohormone. To determine the presence of the transferred cold regulated gene (BN115) in the transgenic Chrysanthemum, PCR-amplification indicated the presence of that gene. Real-Time PCR for confirmation of the putative transgenic plants was established. The copy number of cold regulated gene (BN115) is extrapolated on the basis of a standard curve. Serial dilutions of known number of gene copies were in triplicates. In this diagram, PCR cycles are plotted against the fluorescence intensity. The cycle at which the fluorescence reaches a threshold cycle is inversely proportional to the starting amount of target DNA.
시설가지에서 칠레이리응애를 이용한 점박이응애 밀도억제 효과
문형철,임주락,김주,류정,고복래,김대향,황창연,Moon, Hyung-Cheol,Lim, Ju-Rck,Kim, Ju,Ryu, Jeong,Ko, Bok-Rai,Kim, Dae-Hyang,Hwang, Chang-Yeon 한국응용곤충학회 2006 한국응용곤충학회지 Vol.45 No.2
Biological control of Tetranychus urticae by Phytoseiulus persimilis was observed in eggp1ant greenhouse fur spring and autumn season culture. Tetranychus urticae was controlled to low density of less than 1 mite from June 24 after p. persimilis were released 3 times at rate of 10 per plant on June 1, 11, and 18, 2004 in spring season experiment. The population of Tetranychus urticae was also less than 1 mite per eggp1ant leaf from September 1 to October 22 after three times releases of 10 P. persimilis in autumn season experiment. In Phytoseiulus persimilis released plot, the percentage of leaves with T. urticae adults and nymphs were 8.6$\sim$13.3% and 5% or less in spring and autumn season experiment. The density of T urticae was from 1 to 2 on leaves with T urticae adults and nymphs. 봄과 가을에 시설 가지 하우스에서 칠레이리응애를 이용한 점박이응애 밀도억제효과를 조사하였다. 2004년 봄 재배 실험에서 칠레이리응애를 가지 1주당 10마리씩 3회 방사한 결과(6월 1일, 11일, 18일), 점박이응애 밀도는 6월 24일 이후 엽당 1마리 정도로 낮게 유지되었다. 가을 재배 실험에서도 칠레이리응애를 주당 10마리씩 3회 방사한 결과 9월 1일부터 10월 22일 까지 점박이응애는 엽당 1마리 정도이었다. 칠레이리응애 방사구에서 점박이응애 성충과 약충의 발생엽률은 봄 재배 실험에서 8.6$\sim$13.3%였고 가을재배 실험에서는 5% 이하였으며 발생엽에서의 점박이응애 밀도는 1$\sim$2마리였다.
임주락,문형철,최선우,김주희,이기권,고복래,최정식,전용균,황창연,Lim, Ju-Rak,Moon, Hyung-Cheol,Choi, Seon-U,Kim, Ju-Hee,Lee, Ki-Kwon,Ko, Bok-Rai,Choi, Jung-Sick,Jeon, Yong-Kyun,Hwang, Chang-Yeon 한국응용곤충학회 2007 한국응용곤충학회지 Vol.46 No.3
시설 가지에서 아메리카잎굴파리 경제적피해수준 및 요방제수준을 추정하였다. 생육초기 아메리카잎굴파리 접종밀도에 따른 시기별 발생밀도는 5월 17일 접종 후 6월 하순까지는 계속 증가하다가 7월 이후 감소하는 경향이었다. 접종밀도별 지상부 생장 및 과실 생육은 유의한 영향은 없었으나, 총과수 및 수량은 접종밀도가 높을수록 감소하는 경향이었고, 그에 따른 수량감소율은 높아졌다. 피해엽율은 접종밀도가 높을수록 증가하여 20마리/4주 수준에서 65%의 피해가 나타났으며, 상품과수 및 상품과율은 무접종구(12.2%)에 비해 접종밀도가 높을수록 감소하였다. 아메리카잎굴파리 접종밀도에 따른 피해 엽면적비율은 각각 5.3, 11.7, 19.7, 25.7%였고, 이때 수량감소율은 각각 0.6, 4.8, 9.8, 14.7%를 나타내었다. 아메리카잎굴파리 접종밀도(X)와 수량감소율(Y)과의 관계는 Y = 0.76779X + 0.298354 ($R^2\;=\;0.9599$)의 회귀식을 얻을 수 있었고 높은 상관관계가 있는 것으로 나타났으며, 관계식에 의하면 자연감소율을 5%로 고려할 때 경제적피해수준은 6.1마리/4주로 시설가지에서 생육초기 아메리카잎굴파리 요방제수준은 4주당 4.9마리 범위로 추정되었다. Economic injury levels and economic thresholds were estimated for the american serpentine leafminer (Liriomyza trifolii) on greenhouse eggplant. Liriomyza trifolii density was increased until the late June and decreased after the July in innoculation on may 17. Growth of an aerial plants and fruits were not different in treatment respectively. But total number of fruits and yields were decreased on higher inoculation density. Whereas the rate of yield loss was increased. The rates of damaged leaf by L. trifolii were increased on higher inoculation density and the peak was 65%. The number of commodity fruits and the rates of commodity fruit were become lower than non-treatment (72.2%). The rates of damaged leaf area were 5.3, 11.7, 19.7, 25.7% on inoculation densities and the rates of yield loss were 0.6, 4.8, 9.8, 14.7%, respectively. There existed close correlation between rate of yield loss and inoculation density (Y = 0.76779X + 0.298354, $R^2\;=\;0.9599$). Considerated of the results, the economic injury levels of L. trifolii on eggplant greenhouse was 6.1 adults per 4 plant and the economic thresholds was 4.9 adults per 4 plant.