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Corynebacterium glutamicum hisD 유전자의 분자적 클로닝
천재연,이명석 숙명여자대학교 자연과학연구소 1999 자연과학논문집 Vol.- No.10
Corynebacterium glutamicum의 DNA library를 이용하여 Escherichia coli histidine 영양요구균주에 Complementation하는 방법으로 hisD 유전자를 클로닝하였다. E. coli argD mutant에 complementation하는 6.8 kb와 4.0 kb fragment를 포함하는 recombinant DNA를 pHDl와 pHD2로 명명하고 여러 가지 제한효소들로 제한효소지도를 작성하였다. pHDl와 pHD2의 overlap되는 4.0 kb fragment 부위가 bifunctional enzyme 인 histidinol dehydrogenase를 암호화 하는 hisD 유전자를 포함함을 알 수 있었다. Histidinol dehydrogenase를 암호화 하는 hisD 유전자들의 위치를 결정하는데 있어서 DNA 조각을 subcloning하고 형질 전환하여 hisD 유전자들의 최소단위는 BamHI-Kpnl 1.5kb를 포함하는 pHD23임을 확인하였다. Complementation cloning of the hisD gene in Corynebacterium glutamicum was done by transforming the genomic DNA library into the corresponding histidine auxotrophs of Escherichia coli Recombinant plasmids containing 6.8 kb and 4.0 kb fragments were also able to complement the E. coli hisD mutant. The insert DNA fragments in the recombinant plasmids, named pHD1 and pHD2, were physically mapped with several restriction enzymes. By further subcloning the entire DNA fragment containing the function and by complementation analysis, we located the hisD gene of C. glutamicum on the 1.5 kb BamHI-KpnI pHD23 fragment.