Agrobacterium을 이용한 고추의 형질전환체계개발

최근원,박영두,박승국,전영주,유일웅,김인태,백운돈 경희대학교 생명자원과학연구원 1997 硏究論文集 Vol.18 No.-

본 실험은 고추의 형질전환체 선발을 위한 최소의 항생제농도를 결정하고 그 결과를 이용하여 형질전환체를 유기하고 효율을 최대화하기 위하여 수행한 바 그 결과는 다음과 같다. 1. 항생제 감응성 검정결과 kanamycin 40㎎/ℓ와 hygromycin 20 ㎎/ℓ에서 신초형성이 완전히 억제되었다. 2. Agrobacterium 제거에 사용되는 carbenicillin과 cefotaxime 처리시 재분화에 아무런 영향을 미치지 않았으며 cefotaxime 200㎎/ℓ 처리에서는 무처리구보다 신초형성이 더 활발하였다. 3. 회복친인 135Q와 276F에서는 형질 전환시 높은 재분화율을 보였으나 형질전환율은 각각 10%와 11.1%의 낮은 빈도를 보였다. 4. 재분화된 신초들을 대상으로 histochemical GUS assay를 실시한 결과 부분적으로 푸른발색이 확인되었다. 5. GUS활성을 보인 신초들에 대한 NPTⅡprimer를 이용한 PCR검정에서 NPTⅡ 유전자의 존재가 확인되었다. A transformation system using Agrobacterium tumefaciens was developed with different genotypes of hot peppers (Capsicum annuum). Four antibiotics commonly used in Agrobacterium-mediated transformation were tested for their effects on shoot regeneration. Shoot induction was completely inhibited by kanamycin at 40㎎/ℓ and hygromycin at 20㎎/ℓ or higher, but not by carbenicillin and cefotaxime. Cotyledon explants of hot peppers were cocultivated with Agrobacterium turnefaciens LBA4404 which carries a binary. vector pBI121 harboring the neomycin phosphotransferase, type Ⅱ (NPT Ⅱ) gene and β-glucuronidase (GUS) gene. For selection of transformed cells, 40㎎/ℓ kanamycin were used because the sensitivity test showed that 40㎎/ℓ kanamycin completely inhibited shoot induction from nontransformed cells. Histochemical GUS assay showed the presence of the GUS gene and PCR analysis confirmed the NP TⅡ gene was integrated. Transformation frequency was about 10.0% and 11.1% of total regenerants from 135Q and 276F, respectively.

고추 PCR 조건의 최적화

최근원,이승우,남승현,설일환,유일웅 경희대학교 부설 식량자원개발연구소 1996 硏究論文集 Vol.17 No.-

신품종에 대한 육종가의 권리보호용 고추 RAPD 마커를 개발하기 위한 기초연구로 PCR에 영향을 주는 요인들에 대한 최적화가 이루어졌으며 주요 결과를 요약하면 다음가 같다. 1. MgCl₂ 농도는 DNA증폭에 직접적인 영향을 주었으며 본 실험의 결과는 고추 PCR에 요구되는 MgCl₂의 최소농도는 3mM임을 보였다. 2. 공시된 2고추 조합간데 차이는 있었지만 Taq DNA polymerase는 1.5U이상의 조건일 때 DNA증폭에 효과적임이 관측되었다. 3. 본 실험에 사용된 template DNA양 중 최소인 10ng의 수준으로도 성공적인 DNA증폭을 보였다 4. dNTPs농도는 200~400μM 수준이 적당하였다. 5. Primer의 농도가 높아짐에 따라 band의 선명도가 증가하는 경향을 보였으며 200nM이상의 농도에서 뚜렷한 band가 관측되었다. 6. 공시된 두조합에서 모두 annealing 온도가 높아짐에 따라 minor band의 수가 줄어들고 major band의 선명도가 증가했다. 7. 본 실험의 결과는 3mM의 MgCl₂, 1.5U의 Taq, DNA polymerase, 10ng의 template DNA, 200μM의 dNTPs, 200nM의 primer, 그리고 42℃의 annealing 온도가 고추의 random primer를 이용한 PCR이 적정수준이 될 수 있음을 제시하였다. Factors affecting PCR have been optimized as a fundamental study in developing RAPD markers to protect breeder's right for new cultivars in Capsicums. DNA amplification was directly influenced by MgCl₂ concentration and the result showed that the minimum concentration required for PCR in Capsicums was 3mM. Although there was a difference between two pepper combinations tested, it was observed that over 1.5U of Taq. DNA polymerase was effective in DNA amplification. A successful DNA amplification was obtained with 10ng of template DNA, the smallest amount tested in this experiment. The proper level of dNTPs was the range between 200 and 400μM. There was a tendency that the intensity of bands was increased as the concentration of random primer increased and clear bands were observed with the concentration above 200nM. In both pepper combinations tested, the number of nonspecific bands was decreased and the intensity of major bands was increased as the annealing temperature was increased. The results suggested that the optimum conditions for PCR with random primer in Capsicums could be obtained with 3mM of MgCl₂, 1.5U of Taq. DNA polymerase, 10ng of template DNA, 200μM of dNTPs, 200nM of random primer, and 42℃ of annealing temperature.

토마토에 있어 PCR에 영향을 미치는 요인들

최근원,김현주 경희대학교 부설 식량자원개발연구소 1995 硏究論文集 Vol.16 No.-

토마토 에 있어 RAPD 분석을 위한 PCR에 영항을 미치는 요인들을 결정하기 위한 일련의 실험이 실시되었던 바, 최종 50㎕의 반응용액내에 25ng의 template DNA, 5pM의 10-mer primer, 0.05mM의 dNTP와 0.25 unit의 Taq DNA polymerase의 조건이 본 실험에 사용된 토마토의 PCR에 최적으로 사료되었다. 본 실험에서는 Operon사의 A_(9)~A_(14) random primer들이 토마토에 있어 적합한 것으로 판단되었으며 45 cycle의 반응횟수가 명확한 다형화 band 형성에 필요한 충분량의 DNA를 확보하기에 적합한것으로 나타났고 38℃의 annealing 온도 가 공시된 토마토의 PCR에 적합한것임을 보였다. 반응 요인들의 농도와 양에서 나타난 결과로 보아 그들의 효과에 있어 각각은 매우 상호의존적인 관계에 있는것으로 판단되었다. A series of experiments were initiated to examine factors affecting Polymerase Chain Reaction(PCR) in studying Random Amplified Polymorphic DNA(RAPD) of tomato. The results showed that optimum concentrations or amounts of reaction parameters were composed of 25ng of template DNA, 5pM of 10-mer primer, 0.05mM of dNTP, and 0.25 units of Taq DNA Polymerase in 50㎕ of the final reaction mixture. In this study, random primer A_(9)∼A_(14)(Operon) were selected as proper primers for tomatoes. 45 cycles of PCR and the annealing temperature of 38℃ were proper to get enough amount of amplified DNA for clear polymorphic band formation. The results also indicated that the concentrations or amounts of reaction parameters were highly correlated with each other in their effects on DNA amplification.

담관 낭선암 1례

박건욱,홍기봉,정재열,노명환,한상영,최석렬,신우원,나서희 동아대학교의과대학 1997 동아의대학술지 Vol.9 No.1

공 컨테이너를 고려한 컨테이너 내륙수송에서의 차량배치문제

윤원영,안창근,최용석 한국경영과학회 1999 한국경영과학회지 Vol.24 No.4

In the container transportation of inland depots the empty container is an important issue. The truck dispatching problem in this paper is considered under restriction about empty containers. When a full container arrives in a depot by truck, after unloading operation the full container is changed to an empty container. After loading operation an empty container is changed to a full container. We suggest an integrated approach to the problem of simultaneously managing empty truck and container movements. We would like to find the truck dispatching method minimizing empty truck movements and empty container movements. In this paper, a mixed integer programming model is developed to obtain the optimal truck dispatching in container transportation and heuristic is developed to give a good solution in much shorter time. The numerical examples are studied and the proposed heuristic is also compared with the result of numerical examples.

스포츠 전문기록원에 관한 교육 프로그램의 필요성

박장근,이원희,최연숙 명지대학교 예체능연구소 2001 藝體能論集 Vol.12 No.-

At the sametime Specialization of Sports recorder, Education program was developed and continued for maintain of specialization and expansion one. For this object, To acquire the following a conclusion 1. To be necessary a course of education for engaging sport recorder 2. A course of study of college to special study for sports recording and decomposition being established. 3. To be necessary development of recording paper for recording management. 4. To various analyze and To build database of recording of game must offer consistent information 5. Korea, for maintain a strong state of sports, Scientifically sports recording, Accurate database of recording, Training specialist, Systematic study. So Sport society and Gorvenment must support this one. Base of this conclusion, special education and management for sports recorder with obligation and duty, being foundation for scientifically and systematic expansion.

Agrobacterium을 이용한 치커리의 형질 전환

김대성,최근원,정인식,이승우 경희대학교식량자원개발연구소 2005 硏究論文集 Vol.24 No.-

본 실험은 치커리 'Radicchio'(Cichorium intybus L.)에서 Agrobacterium을 이용한 형질전환에 영향을 주는 요인들을 적정화하기 위하여 실시되었다. 치커리 'Radicchio'의 자엽절편체를 이용한 kanamycin과 cefotaxime 항생제 감응성 검정 결과 20 mg·L^(-1) 이상의 kanamycin 농도가 형질전환 신초의 선발에 적당하고 200 mg·L^(-1)의 cefotaxime 농도가 절편체 생장에 부정적인 영향을 주지 않으며 배지 내 Agrobacteria를 제거하기에 적절함을 나타내었다. Terpene cyclase 유전자가 재조합된 PILTAB 벡터를 갖는 Agrobacterium tumefaciens LBA4404와의 효과적인 공동배양 기간은 3일간으로 결정되었다. IAA 1.0 mg·L^(-1), BAP 1.0 mg·L^(-1), kanamycin 20 mg·L^(-1) 그리고 cefotaxime 200 mg·L^(-1)를 함유한 선발배지에서 형질전환 된 것으로 여겨지는 신초들이 생산되어 발근을 위해 kanamycin 40 mg·L^(-1)와 cefotaxime 200 mg·L^(-1)이 첨가된 1/2MS 발근배지에 옮겨져 87%의 발근율을 보였다. 발근된 형질전환체들을 대상으로 terpene cyclase 유전자특이 primer를 이용한 PCR 분석이 실시되어 재분화 치커리 내로 1.64 kb 크기의 terpene cyclase 유전자의 성공적인 도입을 확인하였다. This experiment was initiated to optimize factors affecting Agrobacterium-mediated transformation in Cichorium intybus L. cv. Radicchio. The results from the antibiotic sensitivity test for kanamycin and cefotaxime using cotyledon explants of chicory 'Radicchio' suggested that the concentration of kanamycin above 20 mg·L^(-1) might be an appropriate level to make a selection on transgenic shoots possible and 200 mg·L^(-1) of cefotaxime also could be a proper concentration to remove Agrobacteria from the media without any negative effect on explants. The efficient duration for co-cultivation of cotyledon explants with Agrobacterium tumefaciens LBA4404 harboring the recombinant binary vector PILTAB carrying 1.64 kb terpene cyclase gene was decided as 3 days. Putative transgenic shoots were produced on the selection media containing 1.0 mg·L^(-1) IAA, 1.0 mg·L^(-1) BAP, 20 mg·L^(-1) kanamycin, and 200 mg·L^(-1) cefotaxime and transferred to 1/2MS media supplemented with 40 mg·L^(-1) kanamycin and 200 mg·L^(-1) cefotaxime for rooting. The rooting ratio was 63% and putative transgenic plants with roots were obtained. Results from PCR analysis with terpene cyclase gene specific primers confirmed a successful insertion of 1.64 kb terpene cyclase gene into the genomic DNA of the regenerated chicory.

Poplar 組織培養에 의한 anthocyanin 生成

李承雨,崔根元,鄭印植 경희대학교 유전공학연구소 1993 遺傳工學論文集 Vol.5 No.-

Poplar(Populus nigra)를 대상으로 組織培養時 callus 生長과 anthocyanin形成에 影響을 미치는 環境條件으로써 最適培地, 糖의 效果, 植物生長調節劑, 糖의 種類 및 日長의 影響을 검토하고자 遂行한 결과는 다음과 같이 요약된다. 1. SH 培地가 callus 및 anthocyanin형성에 효과적이었고 sucrose濃度는 5.5%가 우수하였다. 2. Auxin류의 효과에 있어서는 2,4-D 2.0 ㎎/ℓ에서 callus 및 anthocyanin형성에 가장 효과적 이었다. 3. Cytokinin류에서 BA가 kinetin에 비하여 callus生育을 顯著하게 抑制하였고 kinetin 0.2㎎/ℓ에서 anthocyanin형성이 가장 우수하였다. 4. 糖의 종류로는 fructose가 sucrose나 glucose에 비하여 callus增殖에 월등히 높은 효과를 보였고 anthocyanin形成量에는 큰 차이를 보이지 않았다. 5. 日長의 效果에서 anthocyanin形成은 日長이 길어질수록 促進되었으며 callus형성은 日長에 따른 차이를 보이지 않았다. The experiments were conducted to optimize culture conditions for callus growth and anthocyanin formation by in vitro culture of Populus nigra through tests of basal media, inorganic salts, plant growth regulators, sucrose concentrations, sugar and photoperiods. SH media supplemented with 55 g/l sucrose gave the best results in callus and anthocyanin formation. For the effects of plant growth regulators, anthocyanin formation was promoted by treatment with 2.0 ㎎/l 2,4-D. On the other hand, 0.2 ㎎/l kinetin showed the highest activity for anthocyanin synthesis while BA severely suppressed callus growth. Fructose compared with glucose remarkably promoted callus growth but anthocyanin formation showed no difference with sugar type. Anthocyanin pigment accumulation hastened by increasing photoperiod in culture room while callus growth was not affected with photoperiod.

품종보호용 분자마커의 고추 내 도입

홍지영,최근원,김영채 경희대학교식량자원개발연구소 2006 硏究論文集 Vol.25 No.-

본 연구는 쥐의 adenosine deaminase(ADA) 유전자를 이용하여 개발된 고추 품종보호용 분자마커로서의 실용 가능성을 검토하기 위하여 실시되었다. 513bp 크기의 개발된 품종보호용 DNA 마커를 운반하는 A. tumefaciens LBA4404를 이용한 형질전환 실험에서 공동배양한 후 선발배지로 옮겨 배양한 '135Q' 와 '276F' 고추자엽 절편체는 두 계통 모두에서 84%와 80%의 높은 재분화율을 보였다. '135Q'와 '276F' 고추 자엽 절편체로부터 재분화된 신초들에 대한 분자마커 특히 primer를 이용한 PCR검정과 PCR로 확인된 잠정적인 형질전환 신초에 대한 Southern hybridization 분석 결과 품종보호용으로 개발된 513bp DNA 마커의 삽입을 확인하였다. PCR 검정 결과 '135Q'와 '276F' 고추 자엽 절편체로부터 재분화된 신초의 62.6%, 62.9%가 각각 형질전환체로 확인되었다. 이러한 안정적인 DNA 마커의 전이는 고추에서의 품종보호를 위한 활용 가능성을 제시한다. This study was carried out to investigate the possibility for the practical application of a molecular marker which was developed from mouse adenosine deaminase (ADA) gene for cultivar protection in hot pepper (Capsicum annuum L.). In the transformation of hot peppers using Agrobacterium tumefaciens LBA4404 carrying a 513 bp DNA marker for cultivar protection, the regeneration percentage from cotyledon explants of '135Q' and '276F' hot pepper lines after co-cultivation were 84 and 80%, respectively. Results of PCR analysis on regenerated shoots using marker-specific primers and Southern hybridization analysis on putative transgenic shoots confirmed by PCR indicated that the 513 bp DNA marker for cultivar protection was successfully transferred into the regenerated shoots. Twenty three and twenty four out of 33 and 37 regenerated shoots were transgenic in '135Q' and '276F' hot peppers, respectively. This stable transfer of the DNA marker suggested the possibility of practical application for cultivar protection in hot peppers.

무의 PCR에 영향을 주는 요인에 관한 실험

김현주,최근원 경희대학교 부설 식량자원개발연구소 1994 硏究論文集 Vol.15 No.-

무 품종들에 있어 RAPD 분석을 위한 PCR에 영향을 미치는 요인들을 조사하기 위한 일련의 실험이 실시되었으며, 주요결과를 요약하면 아래와 같다.; 1. 무 '알타리 01'×'알타리 13'에 있어 RAPD 분석을 위한 PCR 반응 요인의 적정 농도 또는 양은 50 ㎕의 반응용액내에 50 ng의 template DNA, 15 pM의 10-mer primer, 0.2 mM의 dNTP와 0.25 unit의 Taq DNA polymerase로 사료되어졌다. 2. 무 '알타리 13'×'서울봄무'에 있어 RAPD 분석을 위한 PCR 반응 요인의 적정 농도 또는 양은 50 ㎕의 반응용액내에 50 ng의 template DNA, 10 pM의 10-mer primer, 0.2 mM의 dNTP와 0.25 unit의 Taq DNA polymerase로 사료되어졌다. 3. 38℃의 annealing 온도가 공시된 무의 PCR에 적합하였다. 4. 반응 요인들의 농도와 양에서 나타난 결과로 보아 그들의 효과에 있어 각각은 상호의존적인 관계에 있는것으로 나타났으며, 반응요인의 적정 조건들은 채소작물에 따라 매우 다양한 것으로 나타났다. A series of experiments were conducted to examine parameters affecting Polymerase Chain Reaction in studying Random Amplified Polymorphic DNA of radishes. The major results were summarized as follows; 1. In 'Altari 01'×'Altari 15', optimum concentrations or amounts of reaction parameters for RAPD analysis were found to be 50ng of template DNA, 15pM of 10-mer primer, 0.2nM of dNTP, and 0.25 units of Taq DNA Polymerase in 50㎕ of reaction mixture. 2. In 'Altari 13'×'Seoul Bom Moo', optimum concentrations or amounts of reaction parameters for RAPD analysis were found to be 50ng of template DNA, 10pM of 10-mer primer, 0.2mM of dNTP, and 0.25 units of Taq DNA polymerase in 50㎕ of reaction mixture. 3. The annealing temperature of 38℃ was optimum for PCRs of radish tested. 4. The results suggested that the concentrations or the amounts of reaction parameters were correlated with each other in their effects on amplification and showed that optimum conditions of reaction parameters could very depending on vegetable crops.