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Agrobacterium을 이용한 고추의 형질전환체계개발
최근원,박영두,박승국,전영주,유일웅,김인태,백운돈 경희대학교 생명자원과학연구원 1997 硏究論文集 Vol.18 No.-
본 실험은 고추의 형질전환체 선발을 위한 최소의 항생제농도를 결정하고 그 결과를 이용하여 형질전환체를 유기하고 효율을 최대화하기 위하여 수행한 바 그 결과는 다음과 같다. 1. 항생제 감응성 검정결과 kanamycin 40㎎/ℓ와 hygromycin 20 ㎎/ℓ에서 신초형성이 완전히 억제되었다. 2. Agrobacterium 제거에 사용되는 carbenicillin과 cefotaxime 처리시 재분화에 아무런 영향을 미치지 않았으며 cefotaxime 200㎎/ℓ 처리에서는 무처리구보다 신초형성이 더 활발하였다. 3. 회복친인 135Q와 276F에서는 형질 전환시 높은 재분화율을 보였으나 형질전환율은 각각 10%와 11.1%의 낮은 빈도를 보였다. 4. 재분화된 신초들을 대상으로 histochemical GUS assay를 실시한 결과 부분적으로 푸른발색이 확인되었다. 5. GUS활성을 보인 신초들에 대한 NPTⅡprimer를 이용한 PCR검정에서 NPTⅡ 유전자의 존재가 확인되었다. A transformation system using Agrobacterium tumefaciens was developed with different genotypes of hot peppers (Capsicum annuum). Four antibiotics commonly used in Agrobacterium-mediated transformation were tested for their effects on shoot regeneration. Shoot induction was completely inhibited by kanamycin at 40㎎/ℓ and hygromycin at 20㎎/ℓ or higher, but not by carbenicillin and cefotaxime. Cotyledon explants of hot peppers were cocultivated with Agrobacterium turnefaciens LBA4404 which carries a binary. vector pBI121 harboring the neomycin phosphotransferase, type Ⅱ (NPT Ⅱ) gene and β-glucuronidase (GUS) gene. For selection of transformed cells, 40㎎/ℓ kanamycin were used because the sensitivity test showed that 40㎎/ℓ kanamycin completely inhibited shoot induction from nontransformed cells. Histochemical GUS assay showed the presence of the GUS gene and PCR analysis confirmed the NP TⅡ gene was integrated. Transformation frequency was about 10.0% and 11.1% of total regenerants from 135Q and 276F, respectively.
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