RWPE-1 전립선세포에서 eritadenine을 함유한 신령버섯균사체 액체배양물의 항염증효과 및 항산화효과에 의한 전립선비대증 관련 biochemical marker 개선 효과

하영래(Yeong Lae Ha),문연규(Yun-Gu Moon),김나현(Na-Hyun Kim),허정두(Jeong Doo Heo),조민정(Min Jung Cho),김예라(Ye Ra Kim),김영숙(Young Suk Kim),김정옥(Jeong OK Kim) 한국생명과학회 2018 생명과학회지 Vol.28 No.10

신령버섯균사체 액체배양 추출물(Agaricus blazei mycelial liquid culture extract, ABMLCE)은 TM-3 mouse Leydig 고환세포에서 testosterone (TS)의 생성을 촉진하였다. 이번 연구에서는 eritadenine (EA, 15.3 ㎎/100 g)을 함유한 ABMLCE가 RWPE-1 전립선세포에서 전립선비대증(Benign prostatic hyperplasia, BPH) 관련 핵심 효소인 5α-reductase 2 (5α-R2) 활성과 dihydrotestosterone (DHT) 함량을 감소시켰음을 보고한다. RWPE-1 전립선 세포는 24-well plate에서 ABMLCE (0~50 ppm), EA (0~10 ppm,), finasteride (FS 10 μM: positive Control)를 함유한 Keratinocyte serum-free medium (K-SFM)에서 24시간 배양하였다. 시료처리 세포배양액에 대해 5α-R2, superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), cyclooxygenase-2 (COX-2) 효소활성, TS, DHT, tumor necrosis factor-α(TNF-α)와 interleukin-1β (IL-1β)를 assay kit를 사용하여 분석하였다. 5α-R2 활성과 DHT 함량은 ABMLCE의 농도 의존적으로 유의성(p<0.05) 있게 감소되었고, SOD와 CAT 효소활성은 유의성(p<0.05) 있게 증가되었다. 반면에 COX-2 활성과 TNF-α 및 IL-1β의 함량은 감소되었다(p<0.05). 마찬가지로 EA의 효과도 ABMLCE 효과와 유사하였다. ABMLCE 50 ppm과 EA 10 ppm의 5α-R2 및 DHT 감소효과는 FS 10 μM 효과와 유사하였다. 이들 결과는 ABMLCE와 EA는 항염증효과와 항산화효과를 통하여 BPH 유발 핵심 인자인 5α-R2 효소활성과 DHT 함량을 감소시켰다. 또한 이 결과는 EA를 함유하는 ABMLCE는 인체 BPH 개선 소재로 활용할 수 있음을 의미한다. Agaricus blazei mycelial liquid culture extract (ABMLCE) promoted the production of testosterone (TS) in TM-3 mouse Leydig testis cells. Now, we report that ABMLCE containing eritadenine (EA) as a minor constituent (15.3 mg/100 g) reduced 5α-reductase 2 (5α-R2) enzyme activity and dihydrotestosterone (DHT) content which are key constituents for the benign prostatic hyperplasia (BPH) inductions. RWPE-1 prostate cells were grown in a Keratinocyte serum-free medium (K-SFM) containing ABMLCE (0~50 ppm), EA (0~10 ppm,), and finasteride (FS 10 μM: a positive control) in a 24-well plate for 24 hr. Supernatants collected from cell-cultured media were used for the assay of 5α-R2, superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and cyclooxygenase-2 (COX-2) enzyme activities, and for TS, DHT, tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-1β (IL-1β) contents by their assay kits. The 5α-R2 activity and DHT content were proportionally reduced (p<0.05) to concentrations of ABMLCE. The SOD and CAT enzyme activities were significantly (p<0.05) elevated concomitant with ABMLCE concentrations, while COX-2, TNF-α and IL-1β showed reverse results (p<0.05). Similarly, the effects of EA were similar to those of ABMLCE. Efficacies of ABMLCE 50 ppm and EA 10 ppm in 5α-R2 and DHT reduction were similar to those of 10 μM FS. These results suggest that ABMLCE and EA reduced 5α-R2 and DHT through their anti-inflammatory and anti-oxidative actions. This implies that ABMLCE containing EA could be a beneficial material in the cure of BPH in humans.

항암성과 향미가 개선된 재래식 버섯균사체메주의 제조

김영숙(Young-Suk Kim),박철우(Cherl-Woo Park),김석종(Seck-Jong Kim),박숙자(Sook-Jahr Park),류충호(Chung-Ho Ryu),조현종(Hyun-Jong Cho),김정옥(Jeong-Ok Kim),임동길(Dong-Kil Lim),하영래(Yeong-Lae Ha) 한국식품영양과학회 2002 한국식품영양과학회지 Vol.31 No.6

항암성과 향미가 개선된 기능성 재래식 버섯균사체메주는 버섯균을 액체배양하여 재래식메주의 각 면에 5개씩 만든 구멍(1×3 cm)에 버섯균배양액을 메주 무게의 10%를 접종한 후 25℃에서 4주간 배양하여 제조하였다. 제조한 버섯균사체 메주 중 상황, 영지, 또는 신령버섯균사체메주가 항암성과 향미완화능이 우수하였다. Mushroom mycelia-cultured traditional meju (MTM) was prepared by inoculating 10% submerged-liquid culture of mushroom strains to five holes (1×3 cm) per side of the traditionally-fermented meju (10×10×10 cm), followed by incubating additional 4 weeks at 25℃. Mushroom strains used were Neutari (Pleurotus ostreatus, PO), Yeongji (Ganoderma lucidum, GL), Synryeong (Agaricus blazei, AB), Ypsae (Grifola frondosa, GF), Pyogo (Lentinus edodes, PE), Dongchunghacho (Paecilomyces japonicus, PJ) and Sanghwang (Phellinus linteus, PL). All MTMs showed an enhanced anticarcinogenicity against S-180 cell-induced mouse ascites cancer, antimutagenicity against aflatoxin B₁ (AFB₁) and 2-amino-3-methylimidazo[4,5-f]quinoline (IQ), and sensory qualities, relative to control meju. Such positive effects of MTM prepared with Sanghwang, Yeongji, or Synryeong were superior to those of MTM with Ypsae, Pyogo, Dongchunghacho, or Neutari.

TM-3 cell에서 eritadenine 함유 신령버섯균사체 액체배양물의 testosterone 생성 촉진효과

김영숙(Young Suk Kim),정재은(Jae Eun Jung),문연규(Yeon Kyu Moon),정희정(Hui Jeong Jeong),김정옥(Jeong Ok Kim),하영래(Yeong Lae Ha) 한국생명과학회 2018 생명과학회지 Vol.28 No.6

신령버섯 액체배양추출물(Agaricus blazei mycelial liquid culture extract: ABMLCE)과 eritadenine (EA)의 mouse 정소 Leydig TM3 세포에서 testosterone (TS) 생성에 관한 연구를 정상 조건과 산화스트레스 조건에서 수행하였다. 정상 조건에서는 TM3 세포를 DMEM 배지에 배양하면서 EA (0~100 ppm)와 EA (0~50 ppm) + ABMLCE (10 ppm)를 24 hr처리하였다. 산화스트레스 조건에서는 TM3 세포를 H₂O₂ (50 μM)를 4 hr 처리하고 정상 조건과 동일하게 처리하였다. DMEM 배양물에 함유된 TS 함량, HSD3B2 효소 활성, 5α-R2 효소 활성과 NO함량을 assay kit를 사용하여 측정하였다. EA는 정상 조건이나 산화스트레스 조건에서 TS 함량을 유의성 있게 증가시켰고, ABMLCE와 ABMLCE + EA도 TS의 함량을 증가시켰다. TS 전구체 생성에 관여하는 HSD3B2 효소활성은 두 조건에서 모두 EA, ABMLCE, ABMLCE + EA에 의해서 증가되었다. 또한 TS를 DTH로 전환시켜 TS함량을 감소시키는 역할을 하는 5α-R2 효소활성은 정상 조건 및 산화스트레스 조건에서 ABMLCE에 의해서만 감소되었다. Free radical로 작용하는 NO의 함량은 두 조건 모두 EA, ABMLCE, ABMLCE + EA에 의해 감소되었다. 이 결과는 EA, ABMLCE, ABMLCE + EA 처리가 TM3 세포의 HSD3B2 효소 활성을 증가시키고, NO 생성을 억제하여 TS 함량을 증가시켰음을 의미하며 EA + ABMLCE 혼합물이 남성 성기능개선 물질로 사용될 수 있음을 의미한다. Enhancement mechanistic actions of testosterone (TS) productions in mouse Leydig TM3 cells by the eritadenine (EA) and/or the Agaricus blazei mycelial liquid culture extract (ABMLCE). Productions of TS in TM3 cells were investigated in normal and oxidative-stressed culture conditions. In the normal culture condition, TM3 cells grown in a Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) were treated with EA (0~100 ppm) and ABMLCE (10 ppm) + EA (0~50 ppm) for 24 hr, and in the oxidative-stressed culture condition, the cells grown in DMEM containing 50 μM H₂O₂ to induce oxidative stress for 4 h were treated with the same as those in the normal culture condition. TS content, 3β -hydroxysteroid dehydrogenase 2 (HSD3B2) enzyme activity, 5α-reductase 2 (5α-R2) enzyme activity, and free-radical nitric oxide (NO) content in the culture media were measured using their corresponding assay kits. EA, ABMLCE, and ABMLCE + EA significantly, p<0.05, enhanced TS productions in both cultural conditions, relative to control treatment. The activity of the HSD3B2 enzyme, which is involved in the production of precursors for TS production, was elevated by EA, ABMLCE, and ABMLCE + EA treatments in both culture conditions. The activity of the 5α-R2 enzyme, which converts TS to dihydroxytestosterone (DHT), was not significantly affected in either culture condition by EA, ABMLCE, or ABMLCE + EA treatments. The treatments included reduced NO content. These results indicate that EA, ABMLCE, and EA + ABMLCE treatments elevated TS in TM3 cells via the enhancements of HSD3B2 activity and the reduction of NO production, and also imply that EA and ABMLCE or EA + ABMLCE could be useful materials for the production of TS in humans.

신령버섯균사체 액체배양물의 자가분해에 의한 항암성 isoflavone-conjugated glycoprotein 분리

김소영(So Young Kim),김영숙(Young Suk Kim),장정순(Joung Soon Jang),김보현(Boh Hyun Kim),라키브 압두르(Abdur Md. Rakib),김곤섭(Gon Sup Kim),김정옥(Jeong Ok Kim),하영래(Yeong Lae Ha) 한국생명과학회 2014 생명과학회지 Vol.24 No.12

신령버섯균사체(Agaricus blazei mycelia: ABM)를 대두박이 함유된 액체배지에 배양하고, 이것을 자가분해(53 ℃, pH 5.5, 120 rpm, 3 hr)하여 항암성이 강한 isoflavone-conjugated glycoprotein (Gluvone 이라 명명)을 분리하였다. Gluvone 은 지금까지 알려진 당단백질과는 달리 분자량이 작고(9,400 Da), isoflavone이 결합되어 있다는 점이 다르다, Gluvone 은 60% 탄수화물(glucose, fructose, ribose), 31% 단백질 및 2% isoflavone (daidzein, genistein)으로 구성되어 있었다. 이 Gluvone은 S-180 복수암세포, MCF-7 인체유선암세포에 대한 독성이 강하였고, S-180 세포로 유발한 mouse 복수암을 강하게 억제하였다. Most beta-glucans obtained from various fruit bodies of mushrooms and mushroom mycelial cultures have high-molecular weight glycoproteins, conjugated with beta-glucans. We report that isoflavone- conjugated glycolproteins (designated as gluvone) were isolated and exhibited stronger anticarcinogenic activities. Agaricus blazei mycelia (ABM) was cultured in a liquid medium containing soybean flakes for 14 days. The liquid culture was autolyzed by incubating at 53℃ (pH 5.5) for 3 h. A crude glycoprotein (CGP) fraction with a cytotoxic effect on a mouse ascite cancer cell line (S-180) and a human breast cancer cell line (MCF-7) was isolated from the autolyzed ABM cultures by 80% ethanol treatment. Gluvone was isolated from the CGP with Sephadex G-75 column chromatography. It exhibited a stronger anticancer effect than CGP against the S-180 cell-induced female ICR mouse ascites carcinogenesis. Gluvone with 9,400 daltons was identified as a glycoprotein conjugated with isoflavone. According to HPLC and GC analysis, in conjunction with ¹H-NMR spectral analysis, it contained 60% carbohydrates (glucose, fructose, and ribose), 31% protein, and 2% isoflavone (daidzein and genistein), which is a novel material. These results indicate that a strong anticarcinogenic gluvone was isolated from the autolyzed product of a submerged liquid culture of ABM, suggesting that autolysis could be a useful tool to produce antitumor agents.

Anti-proliferative Effects of β-ionone on Human Lung Cancer A-549 Cells

Sun Min Lee(이선민),Young Sook Kim(김영숙),Wook Jin Jang(장욱진),Abdur Md. Rakib(압두르 라키브),Tae Woo Oh(오태우),Boh Hyun Kim(김보현),So Young Kim(김소영),Jeong Ok Kim(김정옥),Yeong Lae Ha(하영래) 한국생명과학회 2013 생명과학회지 Vol.23 No.11

β-Ionone의 인체 비소폐암세포 A-549 cells (human non-small lung cancer A-549 cell)에 대한 anti-proliferative effect에 관한 연구를 수행하였다. A-549 cell에 다양한 농도의 β-ionone (1, 5, 10, and 15 μM)을 2, 4, 6일 간 처리 하고, 배양 2일에 A-549 cell의 생육억제와 관련되는 biochemical marker를 측정하였다. β-Ionone은 A-549 cell 생육을 dose와 time 의존적으로 저해하였다. β-Ionone 배양 2일의 IC50은 5.0 μg/ml이었다. β-Ionone은 농도 의존적으로 apoptosis를 유도하였다. β-Ionone은 p53, p21 및 Bax protein 수준을 증가시켰으나, Bcl-2 protein 발현은 억제시켰다. β-ionone은 cytosol cytochrome c 함량을 증가시켰고, caspase-9과 caspase-3 효소 활성증가를 유도하였다. 또한, β-ionone은 cPLA₂와 COX-2 protein level을 감소시켰다. 이와 같은 결과는 β-ionone의 A-549 cell에 대한 생육억제효과는 Bax와 Bcl-2 gene 발현을 reciprocal regulation하여 유도한 apoptosis와 cPLA₂ 및 COX-2 protein 발현 억제에 기인함을 의미한다. The anti-proliferative activity of β-ionone was investigated on human non-small lung cancer A-549 cells (designated A-549 cells). A-549 cells were treated with various concentrations of β-ionone (1, 5, 10, and 15 μM) for two, four, and six days. Biochemical markers related to the growth inhibition of A-549 cells by β-ionone were measured at the second day of incubation. β-Ionone inhibited the growth of A-549 cells by dose-and time-dependent manners, resulting in an IC50 of 5.0 μg/ml at the second day of incubation. β-Ionone induced apoptosis by a dose-dependent manner. β-Ionone increased levels of p53, p21, and Bax proteins, but suppressed expression of the Bcl-2 protein. Similarly, β-ionone enhanced cytochrome c release from the mitochondria to the cytosol, and induced activation of caspase-9 and -3. Additionally, β-ion-one reduced cPLA₂ and COX-2 protein levels. These results suggest that the β-ionone inhibits the proliferation of A-549 cells through reciprocal regulation of Bax and Bcl-2 gene expression and suppression of cPLA₂ and COX-2 protein expressions.

풋호박의 상처조직에서 발생되는 에틸렌의 생합성에 미치는 1-MCP의 효과

노기안(Kee-An Roh),하영래(Yeong-Lae Ha),손기철(Ki-Cheol Son),박한영(Han Young Pak) 한국원예학회 2000 Horticulture, Environment, and Biotechnology Vol.41 No.6

풋호박 조직의 상처에 의한 에틸렌 생합성에 미치는 1-MCP의 효과

노기안(Roh Kee-An),하영래(Ha Yeong-Lae),손기철(Son Ki-Cheol),박한영(Pak Han-Young) 한국원예학회 1999 원예과학기술지 Vol.17 No.5

한국인 모유와 조제분유 중의 공액리놀레산

박철우,반경녀,이영남,김정옥,김민석,하영래,Park, Cherl-Woo,Bahn, Kyeong-Nyeo,Lee, Young-Nam,Kim, Jeong-Ok,Kim, Min-Seok,Ha, Yeong-Lae 한국식품영양과학회 2007 한국식품영양과학회지 Vol.36 No.3

The concentrations of conjugated linoleic acid (CLA) in twelve Korean mothers' milk samples collected in October 2006 and four infant formula samples produced by Korean manufacturers were determined. CLA detected from both mothers' milk and infant formula samples was only cis-9, trans-11 CLA isomer. The amount of cis-9, trans-11 CLA in Korean mothers' milk (100 mL) ranged from 4.32 to 10.12 mg ($6.27{\pm}0.28\;mg$). Infant formula (13 g), which is the manufacturers' recommended amount to make up 100 mL with water, contained cis-9, trans-11 CLA isomer in amounts ranging from 1.61 to 2.97 mg ($2.27{\pm}0.31\;mg$). 한국인 모유에는 cis-9, trans-11 CLA 이성체만 동정되었고, 그 함량은 $4.32{\sim}10.12\;mg/100\;mL$(평균 $6.27{\pm}0.28\;mg/100\;mL$)이었고, 지방함량 중에는 $1.35{\sim}3.13\;mg/g$(평균 $1.96{\pm}0.06\;mg/g$)으로 개인에 따라 큰 차이가 있었다. 한국인 모유에 함유된 CLA의 함량은 외국의 CLA 함량에 비해 낮았고, 그 이유는 식사의 차이 때문인 것으로 추정되었다. 국내에서 제조된 조제분유에서도 cis-9, trans-11 CLA만 동정되었는데, 그 함량은 $2.35{\sim}22.82\;mg/100\;g$으로 평균치는 $17.45{\pm}1.24\;mg/100\;g$이었고, 지방에 함유된 cis-9, trans-11 CLA 함량은 $0.45\;mg/g{\sim}0.85\;mg/g$으로 그 평균치는 $0.65{\pm}0.02\;mg/g$이었다. 영유아가 조제분유 제조사의 지시된 13% 조제분유를 섭취할 경우 cis-9, trans-11 CLA를 2.27 mg 섭취하는 것으로 모유 100 mL에 함유되어 있는 양에 비해 낮다. 따라서 조제분유를 조제할 때 모유와 동일한 cis-9, trans-11 CLA를 섭취할 수 있도록 조제분유를 제조하는 것이 바람직하다.

추출방법에 따른 한약재의 인체신경모세포 SK-N-SH 보호 효과

Jung Min Kwon(권정민),Yeon Gyu Moon(문연규),Young Suk Kim(김영숙),Ji Young Jung(정지영),Yeong Lae Ha(하영래),Jae Kyung Yang(양재경) 한국생명과학회 2011 생명과학회지 Vol.21 No.8

한약재의 추출방법에 따른 인체신경모세포 SK-N-SH에 대한 보호 효과를 연구하였다. 당귀, 건지황, 작약 및 천궁을 시료로 사용하였고, 열수추출(환류냉각, 5 시간), 증숙추출(100℃ 및 120℃, 90분 후 열수추출) 방법과 에탄 올추출(환류냉각, 5 시간)방법을 비교하였다. 추출물을 농도별로 SK-N-SH 세포에 2 시간 처리한 후 H₂O₂로 250 μM로 2 시간 산화스트레스를 유발한 다음 세포독성 및 apoptosis와 caspase-3의 발현 정도를 측정하였다. 모든 약재의 열수추출물이 다른 추출물보다 세포 증식을 촉진하였고, apoptosis를 억제하였다. 한약재 열수추출물 1 ㎍/㎕ 농도까지는 세포증식을 촉진하였지만, 그 이상의 농도에서는 오히려 감소시켰다. 열수추출물은 다른 추출물보다 총페놀성 화합물이 많이 함유되어 있었고, 항산화능이 높았다. 또한, 이와 같은 효과는 당귀의 열수추출물이 다른 약재 열수추출물보다 우수하였다. 본 연구결과는 약재의 열수추출법이 인체신경모세포인 SK-N-SH의 증식과 세포사멸 억제를 위해 가장 우수한 방법이었고, 당귀 열수추출물이 가장 우수한 효과를 지니고 있어 기억력 보호나 상실억제제로 활용할 수 있을 것이다. Extraction methods of medicinal plants were evaluated for growth enhancing effects of human neuroblastoma SK-N-SH cells. Hot-water extraction (reflux for 5 hr), hot-water extraction post treatment (100℃ or 120℃, 90 min) and ethanol extraction (reflux for 5 hr) methods were applied to Angelica gigas, Rhemania glutinosa, Paeonia lactiflora and Cnidium officinale samples to extract their constituents. Cells were treated for 2 hr with various concentrations of extracts (0, 0.5, 1, 2, 4 ㎍/㎕ media) prior to H₂O₂ (250 μM) treatment for 2 hr to provide oxidative stress. Cell viability, caspase-3 expression and apoptosis were measured for cells treated with sample extracts. Hot-water extract exhibited a stronger growth enhancing and apoptosis protecting ability than other extracts. These activities were shown at less than 1 ㎍/㎕ concentration, and not greater than 2 ㎍/㎕ concentration. Hot-water extract contained more polyphenolic compounds than other extracts coming along with stronger antioxidant activity. The efficacy of antioxidant activity was stronger in the hot-water extract of Angelica gigas than other hot-water extracts of medicinal plants. These results suggest that hot-water extraction is an appropriate method to extract materials for growth enhancing and apoptosis protection of SK-N-SH cells, and hot-water extracts of Angelica gigas might be useful materials for protection from aging brain cells.

食品添加物中 有害微量金屬 含量에 關하여

金正玉(Jeung-Ok Kim),宋在撤(Jae-Chul Song),梁漢喆(Han-Chul Young),河永來(Yeung-Lae Ha) 韓國營養學會 1979 Journal of Nutrition and Health Vol.12 No.3