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온주밀감(Citrus unshiu Marc. var. Okitsu) 미분화 종바로부터 callus 유기 및 증식
진성범,홍경애,부경환,이도승,류기중 제주대학교 방사능이용연구소 2000 연구보고 Vol.14 No.-
조직배양을 통한 기관분화나 식물체 재분화 가 어려운 것으로 알려져 있는 온주밀감(Citrus unshiu Marc. var.Okitsu) 미분화 종자로부터 callus 유기 조건을 확립하였다. 온주밀감 성숙과실의 미분화 종자를 MT(Murashige and Tucker, 1969) 기본배지에 치상 6주 후에 미숙종자 양쪽 가장자리에 유기된 조그만white callus를 gibberellin 1mg/L, adenine 25mg/L, malt extract 500mg/L가 첨가된 MT 기본배지에 치상 하여 2주간격으로 계대배양하여 캘러스를 유지할 수 있었고, EME(Grosser and Gmitter, 1990a ) 배지에 4주 간격으로 계대배양함으로써 증식시킬 수 있었다.
배주배양 세포로부터 감귤 식물체의 획득 및 감귤 트리스테자 바이러스 무병주 검증
진성범(Seong Beom Jin),박재호(Jae Ho Park),박석만(Suk Man Park),이동훈(Dong Hoon Lee),윤수현(Su Hyun Yun) 한국원예학회 2017 원예과학기술지 Vol.35 No.1
본 실험은 우량 감귤품종 육성을 위한 바이러스 프리인 배주배양 세포의 재료 공급을 목적으로 실시하였다. 감귤 트리스테자 바이러스(CTV)에 감염된 것으로 추정되는 제주도 재래감귤 3품종(동정귤, 청귤, 지각) 그리고 온주밀감 2품종(궁천조생, 하례조생)의 미숙과실 내 수정되지 않은 배주를 malt extract 500㎎·L<SUP>-1</SUP>, sucrose 50g·L<SUP>-1</SUP>, kinetin 1.0㎎·L<SUP>-1</SUP> 그리고 agar 8g·L<SUP>-1</SUP>가 첨가된 MS2 배지에 치상하여 4주 후 각각 10, 21, 13, 5, 7개의 체세포 배를 얻었고, 체세포배 주변에서 white 캘러스 세포의 유도는 각각 2, 4, 2, 4, 5개를 얻었다. 얻어진 캘러스 세포로부터 체세포배의 유도는 MT 기본배지에 malt extract 500㎎·L<SUP>-1</SUP>, lactose70g·L<SUP>-1</SUP> 그리고 agar 16g·L<SUP>-1</SUP>가 첨가된 배지로 옮겨 6주 후 재분화능 체세포배를 얻었다. 재래감귤의 재분화능 체세포배는 MS 기본배지에 malt extract 500㎎·L<SUP>-1</SUP>, sucrose 50g·L<SUP>-1</SUP>그리고 agar 8g·L<SUP>-1</SUP>이 첨가된 배지로 옮겨 약 10주 후 약 60% 이상의 정상적인 유식물체를 얻었다. 반면 온주밀감 2품종은 MT 기본배지에 sorbitol 1.0M, galactose 1.0M, GA3 1.0㎎·L<SUP>-1</SUP> 그리고 gelrite 3g·L<SUP>-1</SUP>가 첨가된 배지에서 정상적인 유식물체를 얻었다. 배주배양 세포로부터 유도된 식물체들의 무병주 여부는 RT PCR과 혈청학적 진단법을 이용하여 무병주임을 확인하였다. 본 연구결과는 생명공학기법에 바이러스 프리인 감귤 세포를 이용함으로써 우량 감귤 품종을 육성할 수 있을 것으로 기대된다. This study was carried out to investigate a method for producing cultured virus - free ovules for breeding high - quality Citrus cultivars. Ovules from the immature fruits of three citrus cultivars native to Jeju (Dongjeongkyool, Cheongkyool, and Jikak) and two cultivars of Citrus unshiu Marc. (Miyagawa wase and Haryejosaeng) that were thought to be infected with Citrus tristeza virus (CTV) were cultured on MS2 medium (Murashige - Skoog [MS] basal medium containing 500 ㎎·L<SUP>-1</SUP> malt extract, 50 g·L<SUP>-1</SUP> sucrose, 1.0 ㎎·L<SUP>-1</SUP> kinetin, and 8 g·L<SUP>-1</SUP> agar). After four weeks of culture, 10, 21, 13, 5, and 7 somatic embryos and 2, 4, 2, 4, and 5 white callus cells (surrounding green somatic embryos) were obtained from Dongjeongkyool, Cheongkyool, Jikak, Miyagawa wase, and Haryejosaeng, respectively. After six weeks of culture, somatic embryos were obtained from cultured cells grown on MT basal medium supplemented with malt extract (500 ㎎·L<SUP>-1</SUP>), lactose (70 g·L<SUP>-</SUP>1), and agar (16 g·L<SUP>-1</SUP>). Over 60% of the somatic embryos from citrus cultivars native to Jeju developed into normal plants on MS basal medium supplemented with malt extract (500 ㎎·L<SUP>-1</SUP>), sucrose (50 g·L<SUP>-1</SUP>), and agar (8 g·L<SUP>-1</SUP>) after 10 weeks of culture. Normal plants were regenerated from two Citrus unshiu Marc. cultivars on MT basal medium supplemented with sorbitol (1.0 M), galactose (1.0 M), GA₃ (1.0 ㎎·L<SUP>-1</SUP>), and Gelrite (3 g·L<SUP>-1</SUP>). The absence of virus in plants generated from cultured ovules was confirmed by RT - PCR and antigen - antibody reactions. Therefore, virus - free Citrus cells can be obtained for breeding high - quality citrus cultivars using the biotechnological technique evaluated in this study.