삼차원 세포배양 모델을 이용한 내피세포 분화의 관찰

정구보(Goo-Bo Jeong),백상호(Sang-Ho Baik),W.A. Frazier 대한해부학회 1999 Anatomy & Cell Biology Vol.32 No.3

신혈관형성은 혈관계통의 발생이나 생식기계통의 주기적인 변화, 상처회복과 관련된 중요한 생명현상의 하나로 고형 암 의 성장 및 전이를 비롯한 여러 가지 질병의 발생과 관련이 깊다. 그러나 내피세포는 체내에서 세포바깥바탕질 및 성장 인자들과 상호작용을 하면서 일련의 복잡한 분화과정을 거치기 때문에 그 기전을 연구하기가 쉽지 않다. 한편, 사람의 탯줄정맥 내피세포(HUVEC)는 Matrigel을 이용한 삼차원 신혈관형성 모델에서 다각형의 미세혈관망을 형성한다. 그리고 여기에 videomicros-copy를 적용하면 내피세포의 분화과정을 시공간적으로 보다 정확하게 관찰할 수 있다. Thrombospondin-1은 내피세포를 비롯한 여러 종류의 배양세포에서 합성 및 분비되어 세포바깥바탕질에 결합하는 단백질로서 내피세포의 분화를 조절하며 신혈관형성을 억제하는 것으로 알려져 있다. 이 연구에서는 Thrombospondin-1의 신혈관형성 억제 기전의 일부를 시공간적인 형태변화를 관찰함으로써 규명한 것이다. Confocal microscopy를 통해 Thrombospondin-1은 HUVEC 세포로부터 신혈관형성이 진행되는 동안 계속 분비되며 세포표면 및 세포바깥바탕질에 결합하여 내피세포의 분화를 조절한다는 것을 알 수 있었다. 또한 내피세포가 Matrigel 표면에 결합하는 것은 방해하지 않았으나 퍼짐 (spreading)은 억제하였다. 그리고 내피세포사이의 결합은 증가시켰으며 내피세포의 이동을 억제함으로써 내피세포띠 및 미세혈관의 형성을 억제하고 있었다. 이러한 사실은 Thrombospondin-1이 HUVEC 세포가 이동형의 세포로 분화되는 것을 차단함으로써 신혈관형성을 억제한다는 사실을 나타내는 것이다. Angiogenesis plays a fundamental role in development of circulation system, reorganization of reproductive system, wound healing. Pathological angiogenesis is deeply involved in a variety of diseases, particularly solid tumor growth and metastasis. However, it is not easy to study the mechanism of angiogenesis because endothelial cells proceed complex differentiation by interaction with extracellular matrix proteins and growth factors. However, human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) form polygonal networks of capillary-like tubes in 3D Matrigel cultures. Differentiation of endothelial cells will be observed accurately by application of videomicroscopy. Thrombospondin-1 is secreted by a wide variety of cells including endothelial cells and is incorporated into their matrix. Thrombospondin-1 can modulate differentiation of endothelial cells by increasing cell-cell interactions as well as cell-substrate interactions. The current study was undertaken to determine which mechanism is involved in inhibition of angiogenesis by Thrombospondin-1. They was secreted from HUVEC during the process of angiogenesis in 3D Matrigel culture. When applied to endothelial cells attachment to the surface of Matrigel was not decreased, but spreading was decreased. In addition, bigger clusters was formed by enhancement of cell to cell binding by Thrombospondin-1. They inhibit cord and tube formation of HUVEC by inhibition of migration. These results suggest that Thrombospondin-1 inhibits angiogenesis by blocking differentiation of endothelial cells to motile phenotype in 3D Matrigel culture.

Thrombospondin-1과 종양형성 억제작용

정구보(Goo-Bo Jeong) 대한체질인류학회 2015 대한체질인류학회지 Vol.28 No.4

Thrombospondin-1 (TSP-1)은 여러 가지 세포 수용체를 통해 혈관내피세포 및 암세포의 활성을 조절할 수 있는 다양한 기능을 갖는 단백질로 신혈관형성을 억제하며, 혈관내피세포와 암세포의 부착, 세포증식, 이동 및 세포의 생존 등을 조절한다. 또한 여러 연구자들에 의해 TSP-1의 발현을 증가시키면 종양의 성장과 전이가 억제되고 신혈관형성이 차단됨이 확인되었다. 신혈관형성 억제제는 지난 30년간 VEGF (vascular endothelial growth factor)의 신호전달기전을 차단하는 억제제를 중심으로 개발되어 왔으며 tyrosine kinase의 저분자 억제제들이 치료제로 승인되었다. TSP-1은 여러 가지 기능성 도메인을 갖고 있어서 CD36과 CD47 수용체를 통해 종양의 신혈관형성을 억제한다. TSP-1은 CD47과의 결합을 통해 VEGFR2의 인산화를 억제하고 하위신호전달 물질인 AKT 활성화를 차단하여 혈관내피세포에 대한 VEGF의 작용을 억제한다. 최근 CD47 수용체에 결합하는 단클론항체를 이용하여 CD47 수용체의 작용을 차단하면 큰포식세포와 세포독성 T 림프구의 작용을 활성화하여 암세포를 제거할 수 있다는 사실이 밝혀졌다. 이러한 사실들은 TSP-1에 의해 암세포를 제거하고 종양의 혈관형성을 억제할 수 있는 새로운 시대가 도래하고 있음을 시사하는 것이다. Thrmobospondin-1 is the multifunctional protein that modulates endothelial cell and tumor cell behavior via several cell surface receptors and inhibits angiogenesis. In vitro, thrombospondin-1 alters adhesion, proliferation, motility, and survival of endothelial and cancer cells. Studies have confirmed that increased TSP-1 expression suppresses growth or metastasis of some tumors and inhibits angiogenesis. In the past three decades, inhibitors of angiogenesis have been developed as regulators target the vascular endothelial growth factor (VEGF) signaling pathway and small molecule tyrosine kinase inhibitors have been clinically approved. TSP-1 has several functional domain structures and inhibits tumor angiogenesis by engaging receptors CD36 and CD47. TSP-1 binding to CD47 dissociates it from VEGFR2, inhibiting downstream AKT activation and functional responses of endothelial cells to VEGF. Recently, macrophage phagocytosis and cytotoxic T-cell induction of tumor cells mediated by CD47-specific blocking antibodies have been proposed. These findings provide a new therapeutic paradigm for elinination of cancer cells and inhibition of angiogenesis of tumor by TSP-1.

Thrombospondin-1 첫 번째 type I repeat 펩티드의 신혈관형성 억제작용

유보임(Bo-Im Yoo),정구보(Goo-Bo Jeong) 대한체질인류학회 2015 대한체질인류학회지 Vol.28 No.4

신혈관형성 (angiogenesis)은 척추동물의 발생과정 또는 질병 시에 수반되는 중요한 생물학적 현상이다. 혈관형성 억제물질의 하나로 알려진 Thrombospondin-1 (TSP-1)은 CSVTCG 아미노산 서열을 포함하는 두 번째와 세 번째 type I repeat 부분이 혈관내피세포의 이동을 억제함으로써 혈관형성을 차단하는 것으로 알려져 있으나 CSVTCG 서열과 다른 서열을 갖는 첫 번째 type I repeat 부분의 역할은 잘 알려져 있지 않았다. 따라서 본 연구에서는 아미노산 서열의 차이를 나타내는 사람과 소 TSP-1의 첫 번째 type I repeat 부분 (TSR-1)이 신혈관형성 억제능력에 있어서 어떠한 차이를 나타내는지 규명하였다. 이를 위해 TSR-1 펩티드 또는 PBS를 섞은 Matrigel에 bFGF를 첨가하여 생쥐복부피하에 주사함으로써 신혈관형성을 유도하였고 일주일 후에 헤모글로빈 양, 혈관의 개수, Matrigel의 색수치 등을 비교하여 신혈관형성 억제능력을 비교하였다. 또한 계란의 융모막 시험법을 통해서도 혈관형성을 억제하는지 확인하였다. 시험관내분석을 위해서는 TSR-1 펩티드를 배양 중인 HUVEC 세포에 처리하여 세포의 증식, 이동 및 맥관형성능력 등을 비교하였다. TSR-1 펩티드의 세포사멸효과는 유세포분석법으로 비교하였다. 실험 결과 소와 사람의 TSR-1 펩티드는 in vivo Matrigel assay와 CAM assay에서 신혈관형성을 억제하였으며, 소의 TSR-1 펩티드가 사람의 TSR-1 또는 대조군 펩티드 (CSVTCG)에 비해 강한 억제효과를 나타내었다. 그리고 소와 사람 TSR-1 펩티드 및 CSVTCG 펩티드는 모두 HUVEC 세포의 증식은 억제하지 못했지만 세포이동 및 세포사멸을 조절함으로써 신혈관형성을 억제하였다. 이상의 실험 결과를 통해 사람과 소의 TSR-1 펩티드는 아미노산 서열은 다르지만 CSVTCG 서열이 아니더라도 유사한 펩티드로서 신혈관형성을 억제하는 능력을 나타낸다는 사실을 확인할 수 있었다. Angiogenesis is the fundamental biological phenomenon in the development of vertebrates and various pathophysiological process such as cancer, inflammation and wound healing. Thrombospondin-1 is a well-known anti-angiogenic molecule which is distributed in the extracellular matrix of various tissues. The second and third type I repeats of human TSP-1 have inhibitory effects on endothelial cell migration and induce angiogenesis inhibition. However the role of the first type I repeat was not elucidated. In addition, the first type I repeat of bovine TSP-1 has CSVTCG amino acid sequence which is known to have anti-angiogenic activity. In the present study, we compared the inhibition of angiogenesis to investigate the role of the first type I repeat of the human and bovine TSP-1. Matrigel was mixed with or without TSR-1 peptides and then injected into C57BL/6J mice. We compared angiogenesis inhibition activity by hemoglobin assay, microvessel density and optical density value after 7 days. Furthermore, inhibition of angiogenesis was confirmed on CAM assay by TSR-1 peptides. For in vitro angiogenesis assay, TSR-1 peptides were treated on the proliferation, migration, and tube formation assay of HUVEC. Apoptosis effect of TSR-1 peptides was confirmed by apoptosis assay kit and flow cytometry. Bovine and human TSR-1 peptides blocked neovascularization in in vivo Matrigel plug assay and CAM assay at 10 μM. Bovine TSR-1 peptides have shown stronger angiogenesis inhibition in bFGF-induced angiogenesis than human TSR-1 and CSVTCG peptides. However, all of TSR-1 peptides inhibit migration and tube formation of HUVEC in in vitro. Furthermore, these peptides also induced apoptosis of HUVEC. These results suggest that TSR-1 peptides of bovine and human TSP-1 have angiogenesis inhibition activity.

카데바를 이용한 해부학 실습의 효과에 관한 연구

손인아(Ina Son),손명주(Myeongjoo Son),정구보(Goo-Bo Jeong) 한국콘텐츠학회 2013 한국콘텐츠학회논문지 Vol.13 No.2

1급 응급구조사는 인체에 대한 해부학적 구조와 기능에 대한 이해를 바탕으로 정확한 임상술기를 수행해야 한다. 이러한 교육을 위해 응급구조(학)과 학생들은 기초의학 분야중 하나인 인체해부학을 이수해야 하며 카데바(cadaver)를 이용한 해부실습 교육이 통합적으로 필요하다. 따라서 본 연구는 응급구조(학)과 학생 255명에게 실시된 카데바를 이용한 해부학 실습의 효과를 조사 하였다. 그 결과 교육 만족도는 5점 척도 중 평균 4.50점으로 나타났으며, 주제별 시간의 적정도는 평균 3.61점이었고, 교육에 대한 이해도는 평균점으로 나타났다. 또한 93.3%의 학생이 재참여 혹은 다른 학생에게 추천할 의사가 있다고 응답하였고 학년별로 이해도 만족도 시간 적정도에 있어 통계적으로 유의한 차이가 있었다(P<.05). 결론적으로, 추후 학년별 맞춤형 카데바 해부실습 프로그램에 대한 연구가 지속되어야 할 것이고 고학년은 실습 시간을 늘리고 육안해부학(gross anatomy) 뿐만 아니라 임상술기를 접목한 임상해부학(clinical anatomy)에 대한 실습이 통합적으로 진행되어야 함을 제언하는 바이다. There are insufficient cadaver-used practice programs for paramedic student education. To provide the basic data for the effective cadaver practice program, the study interviewed 255 students in department of EMT, who attended cadaver practicum. The results indicated that the average satisfaction level in education was 4.5 out of 5 and in relation to allotted time was 3.61 out of 5. The average understanding level of was 4.5 out of 5. In conclusion, senior students who have already taken clinical education & clinical procedure are recommended to focus on clinical anatomy practice and lower grade students are recommended to focus on understanding human body structure in cadaver-used practice program.

Meiotic Error of the Superovulated Oocytes in Mouse

Jeong, Goo-Bo,Baik, Sang-HO Seoul National University 1987 The seoul journal of medicine Vol.28 No.4

Inhibitory effects of Thrombospondin-1 and its peptides in the angiogenesis

Jeong, Goo-Bo 가톨릭 의과학연구원 1999 가톨릭 의과학연구원 국제학술대회 Vol.3 No.-

homotrimeric glycoprotein, originally found in blood platelets, which is synthesized and secreted by a wide variety of cells. In addition to modulating cell adhesion, TSP-1 has been shown to regulate cell proliferation, migration, and angiogenesis. TSP-1 also interacts with growth factors (FGF-2 and TGF-β) and regulates activation of latent TGF- β produced by endothelial cells. Expression of TSP-1 in human breast carcinoma cells suppresses their tumorigenic and angiogenic activity in mouse xenografts. Based on its effects on endothelial cell behavior, TSP-1 has attracted as a potential regulator of tumor growth and angiogenesis.

대장암환자 조직에서의 p53 및 PCNA 단백질 발현

정석인,정구보 충북대학교 의과대학 충북대학교 의학연구소 1997 忠北醫大學術誌 Vol.7 No.2

본 실험은 85예의 대장암 조직에서 p53 단백질과 PCNA단백질의 발현을 면역조직화학 염색방법으로 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. p53 단백질의 발현율은 총 25예에서 양성은 11예(44%) 음성은 14예(56%)이었으며, 종양의 분화도가 나쁠수록, 종양의 위치가 5-결장직장 암에 위치한 경우, CEA가 5.0ng/dl 미만인 경우, Dukes씨 병기가 C인 경우, 임파절 전이수가 적을수록 발현율이 높은 경향을 보였다(p>0.05). 환자의 나이가 60세 이하인 경우 또는 종양의 크기가 커질수록 발현율이 높았으며 통계학적으로 유의한 차이가 있었다(p<0.05). PCNA 단백질의 labeling index는 평균70.48+18.83이었으며, 종양의 분화도가 나쁠수록, 종양의 위치가 5-결장직장에 위치한 경우, CEA치 5.0ng/dl 미만인 경우, Dukes씨 병기가 C인 경우, 환자의 나이가 적을수록, 임파절 전이수가 많을수록 labeling index가 높은 경향을 보였다(p>0.05). 병소의 크기가 5cm이상인 경우가 PCNA 단백질 labeling index가 높았으며, 통계학적으로 유의한 차이가 있었다(p<0.05). p53과 PCNA단백질의 발현 관계는 p53 단백질이 양성인 경우 양성율이 높은 때 PCNA의 발현율도 높아지는 경향을 보였다(p<0.10). 본 실험의 결과로 953 단백질은 대장암에서 환자의 나이 및 크기와 관련이 깊고, PCNA 단백질의 경우는 종양의 크기와 관련이 있는 것으로 보이나 이들의 발현이 대장암의 재발 및 예후에 어떠한 영향을 미치는가는 좀 더 연구해야 할 과제이다. Histopathologic staging of the colorectal cancer is known as the most important prognostic factor. But it is not enough to be used with full confidence in clinical field. It is the reason why various other prognostic factors have been intensively investigated. A few of them are p53 and PCNA protein. To evaluate the efficacy of p53 and PCNA protein expression as prognostic factors in the colorectal cancer, 25 specimens of colorectal cancer patients were selected. Immunohistochemical staining using ABC technique was performed for p53 and PCNA protein expression in paraffin tissue. The positive expression rate of p53 protein was 44% of specimen. p53 protein expression was not correlated with grade of differentiation, tumor site, Preoperative CEA, Dukes stage and number of metastatic lymph node. However, the expression rate of p53 protein was significantly higher in younger patients (under age 60) and in larger tumors (over 5cm) (p<0.05). The labeling index of PCNA protein was significantly higher in larger tumors (over 5cm) (p<0.05). PCNA protein expression was related to grade of differentiation, tumor site, preoperative CEA, Dukes stage, age of patients and number of metastatic lymph node. The over expression of p53 protein was correlated with labeling index of PCNA protein.

In vitro Cultivation and Itransplantation of Mouse Embryos : Comparative Analysis of Effects of Bovine Serum Albumin and Sodium Lactate Bovine serum albumin 및 Sodium lactate 효과의 비교분석

Baik, Sang Ho,Jeong, Goo Bo,Hwang, Douk Ho Seoul National University 1989 The seoul journal of medicine Vol.30 No.3

면역조직화학법과 In situ Hybridization 조직화학법을 이용한 흰쥐 시상하부 GnRH 펩타이드와 GnRH mRNA 의 동정

유지명,정구보 경상대학교 축산진흥연구소 1989 畜産振興硏究所報 Vol.16 No.1

Immunohistochemistry and in situ hybridization were employed at the tissue sections for identification of GnRH peptide and GnRH mRNA.Hypothalamus from normal female rats was dissected out after perfusion of 396 neutral buffered paraformaldehyde through the ascending aorta. After rinsing in 3096 sucrose containing 0.02% diethyl pyrocarbonate, frozen sections were cut in a cryo stat at 10 μm. For immunohistochemical staining, anti-GnRH and biotinylated anti-rabbit IgG were used, and in situ hybridization was performed with ^(35)S-labeled GnRH oligonucleotide probe. By these morphological approaches, GnRH appeared as brown-colored granules in the cytoplasm of GnRH neurons and GnRH mRNA was localized as clusters of dark silver grains in the preoptic a rea of rat hypothalamus. Silver grains were also observed at the cells which revealed negative re sponse to anti-GnRH.

천공된 여과지를 이용한 초기계태의 체외이식 방법에 관한 실험적 연구

김동호,김영규,정구보 충북대학교 의과대학 충북대학교 의학연구소 1991 忠北醫大學術誌 Vol.1 No.1

鷄胎(chick embryo)는 발생과정이 짧고, 쉽게 구입할 수 있기 때문에 발생학 및 기형학 연구에 적합한 실험 모델이 될 수 있다는 점에 착안하여 이를 신경관기형의 연구에 이용하기 위하여 그 첫단계인 初期鷄胎의 explantation(체외이식)방법을 본실험을 통해 확립하였다. 현재 가장 많이 사용되는 방법은 1955년에 발표된 New's technique으로 난백을 제거한 계란내용물을 식염수에 잠기게하여 난황막을 잘라내는 방법으로, 어렵게 시간이 많이 걸리는 단점이 있다. 저자는 여과지의 난황막에 대한 접착성을 이용하여 천공된 여과지로 천공부위에 초기계태가 오도록 접착시킨후 오려내어 식염수로 세척한 다음 배양액에 쉽게 옮길 수 있었다. 315개의 수정계란을 이 방법으로 체외이식하였는데 하나의 계태를 떼어 내는데 평균 5분 밖에 소요되지 않아 상당히 효과적이었다. 그러나 배양액에서 오래 있으면 여과지에서 난황막이 떨어져 주름이 지기 때문에 계태의 관찰이 어려워지는 단점이 있다. 이것은 배양액을 소량 사용하여 여과지가 잠길 정도로 하면 비교적 고정된 상태로 있어서 만족한 결과를 얻었고 이 체외이식방법은 앞으로 초기계태를 이용한 기형학 실험, 특히 신경관기형의 실험에 많은 도움이 되리라고 생각된다. The chick embryos have been widely used as a model system to study experimental embryology and teratology. Especially, early chick embryo is very useful for studies of neural tube defects. In the present study, a new explantation method for early chick embryo was developed by setting a piece of punched-filter paper on the vitelline membrane, and the developmental stage appropriate for the study of neural tube defects was determined by Hamburger & Hamilton's staging system. This technique was compared with conventional New's technique for explantation in early chick embryos.