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      • 가와사끼병에서 말초 혈액 B세포의 클론성 팽창

        이진수 ( Jin Soo Lee ),박인호 ( In Ho Park ),신전수 ( Jeon Soo Shin ),김동수 ( Dong Soo Kim ) 대한소아알레르기호흡기학회(구 대한소아알레르기 및 호흡기학회) 2002 소아알레르기 및 호흡기학회지 Vol.12 No.4

        서론: 소아에서 흔한 가와사끼병에 관한 임상적, 역학적, 면역학적 및 병리학적 특성에 관한 연구가 계속되어 많은 것들이 밝혀져 있는 반면에, 아직 발병 원인 및 기전은 명확히 밝혀져 있지 않다. 최근 가와사끼병 환자에서 Vβ2 및 Vβ8 family를 표현하는 T 세포의 선택적 증식이 관찰되어 초항원의 관련 가능성이 제기된 이후, 가와사끼병에서 T세포의 활성화에 대한 연구는 활발하게 진행되어 온 반면 B세포의 활성화에 관한 보고는 많지 않다. 연구자는 Purpose: The etiology and pathogenesis of Kawasaki disease(KD) remains unknown and KD is a potentially fatal acute systemic vasculitis of childhood. Recently, expansions of T cells expressing TCR(T cell receptor) Vβ2 and TCR Vβ8 chanins have been reported

      • SCOPUSKCI등재
      • KCI등재

        Hyper IgM Syndrome 환자에서 얻은 림프절 및 말초혈액 B세포의 특성

        김동수,신경미,양우익,신전수,송창화,조은경,Kim, Dong Soo,Shin, Kyuong Mi,Yang, Woo Ick,Shin, Jeon-Soo,Song, Chang Hwa,Jo, Eun Kyeong 대한소아청소년과학회 2003 Clinical and Experimental Pediatrics (CEP) Vol.46 No.2

        목 적 : Hyper IgM syndrome(HIGM)은 크게 세 부류로 나누는데, CD40L 분자의 돌연변이로 초래되며 X-linked로 유전되는 형태를 HIGM1이라고 하고, 상염색체성 열성 형태로 유전되면서 CD40L는 정상적으로 표현되는 형태로 activation-induced cytidine deaminase(AID) 유전자에 이상 때문에 오는 경우를 HIGM2로 분류하고 있다. 다른 한 부류는 X-linked HIGM 증후군의 매우 드문 한 형태로서 발한 저하성 외배엽 이형성증이 동반된 경우로, 이 질환은 전사인자인 nuclear factor ${\kappa}B$의 활성화에 관여하는 nuclear factor ${\kappa}B$ essential modulator를 coding하는 유전자의 돌연변이 때문에 오는 것으로 알려져 있다. 연구자들은 HIGM2와 유사하지만 AID 유전자에 변이는 없는 새로운 형태의 HIGM 환자의 말초 B세포를 이용하여 병인을 조사하고자 본 연구를 시도하였다. 방 법 : 환자의 말초혈액 단핵구를 분리하고, EBV로 immortalization을 시켜 Cycle TEST PLUS DNA Reagent kit를 이용하여 cell cycle을 분석하였다. 환자의 말초혈액 T 세포에서 CD40L의 표현을 immunostaining으로 알아보고, RNA를 추출하여 RT-PCR을 하고 direct sequencing을 통하여 CD40L 유전자의 돌연변이 부위를 찾아보았다. 아울러 AID 유전자의 돌연변이를 찾기 위하여 같은 방법으로 sequencing하고 조사하였다. 환자의 림프절을 병리학적인 검사를 시행하고 CD3, CD23, CD40, Fas-L, bcl-2, BAX의 표현을 알아보기 위하여 immunostaining을 실시하였다. 결 과: 림프절의 광학적 소견은 반응성 여포증식의 소견을 보였으며, 여포와 단구양 증식은 B-세포 표시인자인 L26에 양성을 보였고, 대부분의 형질세포는 IgM에 양성을 보였다. 여포는 CD40, Fas, BAX에 양성반응을 보이고, bcl-2와 Fas-L에 음성반응을 보였다. 말초혈액 B 림프구를 이용하여 cell cycle을 분석한 결과 정상(17.9%)에 비하여 G2/mitosis phase(M3 in figure)가 현저하게 감소(8.5%)되어 있는 양상을 보여주고 있으며, IL-4로 자극한 경우에는 정상인에서 보여주는 양상으로 회복되는 양상을 볼 수 있었다. 단핵수에서 CD40L의 표현은 정상이었고 CD40L 유전자에도 돌연변이는 발견할 수 없었으며, HuAID 유전자에도 돌연변이를 발견할 수 없었다. 결 론 : 환자의 말초혈액 B림프구를 통한 연구 결과, 기존에 보고 되어진 HIGM2 형태와 임상적으로는 비슷하지만, 정상적인 AID유전자를 보이고, G2/mitosis phase가 정상에 비하여 감소된, 새로운 형태의 HIGM이라고 여겨진다. Purpose : Hyper IgM syndrome(HIGM) is characterized by severe recurrent bacterial infections with decreased serum levels of IgG, IgA, and IgE but elevated IgM levels. Recently, it has been classified into three groups; HIGM1, HIGM2 and a rare form of HIGM. HIGM1 is a X-linked form of HIGM and has now been identified as a T-cell deficiency in which mutations occur in the gene that encodes the CD40 ligand molecule. HIGM2 is an autosomal recessive form of HIGM. Molecular studies have shown that the mutation of HIGM2 is in the gene that encodes activation-induced cytidine deaminase(AID). Recently, another rare form of X-linked HIGM syndrome associated with hypohydrotic ectodermal dysplasia has been identified. We encountered a patient with a varient form of HIGM2. To clarify the cause of this form of HIGM, we evaluated the peripheral B cells of this patient. Methods : The lymphocytes of the patient were prepared from peripheral blood. B cells were immortalized with the infection of EBV. Cell cycle analysis was done with the immortalized B cells of the patient. Peripheral mononuclear cells were stained with monoclonal anti-CD40L antibody. Total RNA was extracted from the peripheral mononuclear cells. After RT-PCR, direct sequencing for CD40L gene and HuAID gene were done. Immunostainings of a lymph node for CD3, CD23, CD40, Fas-L, bcl-2, BAX were done. Results : The peripheral B cells of this patient showed normal expression of CD40L molecule and normal sequencing of CD40L gene, and also normal sequencing of AID gene. Interestingly, the peripheral B cells of this patient showed a decreased population of G2/mitosis phase in cell cycles which recovered to normal with the stimulation of IL-4. Conclusion : We suspect that the cause of increased serum IgM in this patient may be from a decrease of G2/mitosis phase of the peripheral B cells, which may be from the decreased production or secretion of IL-4. Therefore, this may be a new form of HIGM.

      • 폐구균의 혈청형 분포와 항생제 감수성에 관한 연구

        최경민,김정현,신경미,연수인,신전수,용동은,이경원,김동수,Choi, Kyoung-Min,Kim, Jeong-Hyun,Shin, Kyoung-Mi,Yeon, Soo-In,Shin, Jeon-Soo,Yong, Dong-Eun,Lee, Kyoung-Won,Kim, Dong-Soo 대한소아감염학회 2003 Pediatric Infection and Vaccine Vol.10 No.2

        목 적 : 폐구균은 비인두에 존재하는 정상균주이나 중이염 등의 국소 감염 뿐 아니라 폐렴, 뇌수막염, 패혈증 등의 침습성 질환을 유발하는 것으로 알려져 있다. 최근 전 세계적으로 다제내성 폐구균이 증가하는 추세를 보여 큰 문제가 되고 있는바 이에 저자들은 폐구균의 혈청형과 항생제 감수성을 검사하고, 향후 시행될 폐구균 예방접종의 효용성 등을 예측해 보고자 하였다. 방 법 : 2001년 9월부터 2003년 1월까지 연세의료원에 내원한 환자 중 배양 검사상 폐구균이 검출된 116명을 대상으로 하였다. 폐구균의 혈청형 검사는 Quellung 반응을 통해 결정하였고, 페니실린 내성 여부는 oxacillin 디스크 확산법으로 판정하였다. 결 과 : 폐구균은 객담 76례(65.5%), 혈액 13례(11.2%), 이루 12례(10.3%), 인두 7례(6.0%), 비강 2례(1.7%), 뇌척수액, 안구분비물, 복수, 수술 후 창상부위, 두부 농양, 도관 각 1례(0.9%)로 총 116례에서 배양되었으며, 98례에서 혈청형 검사가 가능하였다. 분리된 혈청형을 살펴보면 19F 15례(15.3%), 19A 11례(11.2%), 11A 8례(8.2%), 6A, 14와 3이 각 7례(7.1%), 6B, 23F와 35가 각 6례(6.1%)의 순이었다. 총 116례 중 82례(70.7%)에서 페니실린 내성을 보였으며, 페니실린 내성균주의 혈청형은 19F, 19A, 11A, 23F, 6A, 9V등이 49례(59.8%)를 차지하였고, cotrimoxazole(74.4%), tetracycline(69.5%), erythromycin(90.3%) 등의 다른 항생제에도 높은 내성률을 보였다. 소아 환자 22례 중 20례에서 혈청형 분석이 가능하였고, 19A, 19F가 각 5례(25.0%), 6A, 6B, 23F가 각 2례(10.0%), 11A, 14, 19, 29가 각 1례(5.0%)를 차지하여 7가 폐구균 단백결합백신에 포함되는 혈청형이 50%(10/20), 백신관련 혈청형을 포함하여 85%(17/20)이었으며, 22례 중 86.4%(19/22)에서 페니실린 내성을 보였다. 결 론 : 이전의 보고에 비해 백신포함 혈청형의 빈도가 약간 낮은 소견을 보였으며, 최근 일부 폐구균 혈청형의 변화가 보고되고 있는 바 7가 폐구균 단백결합 백신의 상용화에 앞서 전국적인 폐구균 혈청형의 조사가 필요할 것으로 사료된다. Purpose : Streptococcus pneumoniae is part of the normal flora but is also responsible for causing many invasive diseases such as pneumonia, meningitis, and sepsis in addition to noninvasive diseases such as otitis in children. Multi-drug resistant strains has raised a lot of concern worldwide and thus the importance of prevention has been emphasized. We have analyzed the current serotypes and antibiotic sensitivity of each serotype as a baseline study to estimate the efficacy of the pneumococcal vaccine in Korean children. Methods : One hundred sixteen cases of pneumococcus cultured at Yonsei Medical Center from September 2001 to January 2003 were analyzed. The serotyping was done with the Quellung reaction and penicillin resistance was tested using the oxacillin disc diffusion method. Results : Pneumococcus were cultured from the sputum in 76 cases(65.5%), from the blood in 13 cases(11.2%), from the ear discharge in 12 cases(10.3%), from the throat in 7 cases(6.0%), from the nasal cavity in 2 cases(1.7%), and one case(0.9%) each from the cerebrospinal fluid, eye discharge, peritoneal fluid, post-operational wound, brain abscess, and catheter tip. Serotyping was possible with 98 cases and the following serotypes were found; 15 cases of type 19F(15.3%), 11 cases of 19A(11.2%), 8 cases of 11A(8.2%), 7 cases each of 6A, 14 and 3(7.1%), 6 cases each of 35, 6B and 23F(6.1%). Eighty two cases(70.7%) out of 116 cases were penicillin resistant and serotypes 19F, 19A, 11A, 23F, 6A, 9V constituted the majority, 48 cases(59.8%). These serotypes showed resistance to cotrimoxazole (74.4%), tetracycline(69.5%), and erythromycin(90.3%) as well. In the 22 cases cultured from children, 19A and 19F were found in 25.0%, 6A, 6B, and 23F in 10.0%, 11A, 14, 19, and 29 in 5.0%. Fifty percent(10/20) of the clinical isolates were represented in the current 7-valent pneumococcal protein conjugate vaccine, and 85%(17/20) when the cross-reacting serotypes were included. Penicillin resistance was found in 86.4%(19/22). Conclusion : The percentage of serotypes included in the 7 valent pneumococcal protein conjugate vaccine found in our study was 40.8% which was less than other prior studies. In anticipation of a change of pneumococcal serotypes, a nationwide multicenter study is needed before the initiation of pneumococcal vaccines in Korea.

      • Multiplex Latex Bead 유세포 분석기 기법과 Quellung 반응을 이용한 폐구균 혈청형 분석 비교

        최경민,연수인,김은숙,신전수,용동은,이경원,김동수,Choi, Kyong Min,Yeon, Soo In,Kim, Eun Sook,Shin, Jeon Soo,Yong, Dong Eun,Lee, Kyoung Won,Kim, Dong Soo 대한소아감염학회 2006 Pediatric Infection and Vaccine Vol.13 No.2

        Purpose : The serotyping results of the Quellung reaction was compared with the newly developed multiplex latex assay and the sensitivity of the Quellung reaction was compared. Methods : We checked the serotypes of 35 samples obtained from patients treated at Yonsei University Medical Center using the multiplex latex bead method and compared the results with the serotypes previously obtained via the Quellung reaction. Results : A decrease in the mean fluorescence was detected in the samples tested with the multiplex assay. Seventeen samples out of the 27 samples agreed to the results of the Quellung assay. We were only able to confirm the concordance of 11 serotypes out of 14 serotypes available. Conclusion : The Quellung reaction is time consuming procedure and prone to errors even with expertise in the procedure, and other alternate methods in serotyping have been investigated to overcome these problems. The newly developed multiplex latex bead assay can test more samples at the same time and has a higher degree of sensitivity. A large scale trial is required to test the sensitivity of the new assay across various serotypes along with efforts to increase the sensitivity of the Quellung assay. The preliminary data suggests that this method may be widely used. 목 적 : 현재 폐구균 혈청형 분석을 위해 사용중인 Quellung 반응과 비교하여, multiplex assay 방법에 의한 폐구균 혈청형 분석의 유용성을 확인하고, Quellung 반응에 의한 혈청형 분석의 정확성을 검증하였다. 방 법 : 연세 의료원 신촌 세브란스 병원에서 폐구균 감염이 확인된 환자로부터 분리된 35주의 검체를 이용하였다. Quellung 반응을 통한 혈청형 분석과 multiplex latex bead를 이용한 유세포 분석기기법을 통한 혈청형 분석을 시행한 후 양 방법간의 혈청형 분석을 비교하였다. 결 과 : Multiplex assay 방법에 제시된 대로 각각의 혈청형에서 평균 형광치 값의 감소를 확인할 수 있었다. 비교를 위해 시행한 14개 혈청형 중 11개 혈청형에서 비교가 가능했으며, 분석 비교가 가능했던 27검체 중 17검체에서 혈청형이 일치하는 결과를 보였다. 결 론 : 기존의 Quellung 반응의 경우 혈청형 분석에 많은 시간과 노력이 소요되며 일정량의 오차가 발생하는 문제가 있어, 이를 보완하기 위한 새로운 방법들이 시도되고 있다. 향후 보다 많은 혈청형을 대상으로 multiplex latex bead를 이용한 혈청형 분석을 시행할 필요가 있으며 이를 통해 multiplex assay와 Quellung 반응을 비교하며, Quellung 반응의 정확도를 올리기 위한 노력이 함께 수반되어야 할 것이다. 현재까지의 예비 결과로 볼 때 새로운 방법의 적용 가능성은 매우 높다고 할 수 있다.

      • KCI등재후보

        한국인 IgA 신병증 환아에서 MHC Class II유전자형과 예후와의 관계 분석

        김병길,육진원,김지홍,장윤수,신전수,최인홍,Kim Pyung Kil,Yook Jinwon,Kim Ji Hong,Jang Yoon Soo,Shin Jeon-Soo,Choi In-Hong 대한소아신장학회 2000 Childhood kidney diseases Vol.4 No.1

        Purpose: Our study was designed to investigate the association of MHC Class II (DR, DQ) allele with IgA nephropathy and its significance as a prognostic factor for progression to ESRD Material and Methods: 69 children with IgA nephropathy with normal renal function(serum creatinine $\leq$ 1.5mg/dL) was classified as group A and 70 patients who received renal transplantation due to IgA nephropathy were selected as group B. The HLA-DQB1 and HLA-DRB1 alleles were studied by polymerase chain reaction using sequence specific primers. We have compared the difference in alleles between these two groups and with normal control and also examined any possible effect of the MHC class II genes on the histopathological severity and prognosis of IgAN. Results: Mean age was $8.8{\pm}2.9$ years in group A and $35.0{\pm}15.5$ years in group B. Male to female ratio was 2.8:1 in group A and 2.5:1 in group B. There was a significantly higher frequency of HLA-$DQB1^*03\;and\;DQB1^*05$ in Group B. The frequency of HLA-$DQB1^*0302\;and\;^*05031$ allele had increasing tendency in Group B(P<0.05). HLA-$DRB1^*03\;and\;^*05$ were more common in Group B(P<0.05). HLA-$DRB1^*04$ allele was the most common DR alleles in both group, but there was no statistical significance. There were no significant correlation with MHC class 13 genes on the hjstopathological severity in Group A. Conclusion: In conclusion, $HLA-DQB1^*0302\;and\;HLA-DQB1^*05031 $ allele seemed to be more common in transplanted patients compared to group with normal renal function suggesting that this allele is associated with poor prognosis in IgAN. However larger studies and follow up are required to confirm this due to uncharacterized heterogeneity in etiopathogenesis of IgA nephropathy and possibly one or more than one gene may exert influence in determining susceptibility to the diseases. 목 적 : IgA 신병증은 혈뇨와 단백뇨를 보이는 사구체 질환으로 세계적으로 가장 빈도가 높은 질환중의 하나 이며 우리 나라를 포함한 아시아 지역에서도 높은 발생율을 보이고 있으나 아직 정확한 발생기전이나 원인은 불분명한 상태이다. IgA 신병증은 발병 10년 후 $20-30\%$가 말기 신부전증으로 진행됨이 보고되고 있으나 신부전으로 진행속도는 환자에 따라 매우 다양하기 때문에 특이적인 조직적합항원을 찾아냄으로서 치료 및 예후 결정에 도움을 주기 위하여 본 연구를 시행하였다. 대상 및 방법 : 세브란스 병원에 입원하여 IgA 신병증으로 진단 받은 환자를 대상으로 정상 신기능을 유지하고 있었던 소아환아 69명(Group A)과 이미 신부전으로 진행하여 신이식을 시행 받은 70명(Group B)을 포함한 신기능 저하군으로 분류하여 HLA대립유전자의 결정은 SSOP (sequence specific oligonucleotide probe)법으로 분석하여 HLA-class II(DR, DQ)대립유전자의 발현빈도와 IgA 신병증의 예후와의 관계를 분석하였다. 결 과 : 대상 환자의 진단 당시의 평균나이는 A군은 $8.8{\pm}2.9$세, B군은 $35.0{\pm}15.5$세였고, 남녀비는 각각 2.8:1과 2.5:1이었다. HLA-DQB1 유전자중 139명중 $47.5\%$로 $03^{**}$의 발현빈도가 가장 증가되어 있었고 $06^{**}(32.4\%),\;04^{**}(28.7\%),\;05^{**}(20.1\%),\;02^{**}(8.6\%)$순이 었다. DQ7의 HLA-DQB1*0301 이 전체 환자의 20.1$\%$(28/139)로 가장 흔한 대립유전자였으나 두군간에 유의한 차이는 없었다. 대립유전자중 HㄴA-$DQBI^*03^{**}과\;DQB1^*05^{**}$가 이미 말기신부전으로 진행된 Group B에서 유의하게 증가되어 있었으며(P<0.05), $03^{**}$ 아형중 $DQB1^{*}0302와\;05^{**}중\;DQB1^{*}05031$이 신기능이 정상인 A군에 비해 유의하게 증가되어 있었다(P<0.05). DR 유전자형의 low-frequency type상 HLA-$DRB1^*03과\;HLA-DRB1^*15$가 Group B에서 유의 있게 증가되어 있었으나, high-frequency type상에서는 양군 사이에 유의한 차이가 없었다. A군의 경우 신조직 검사의 소견에 따라 4등급으로 분류하여 대립유전자의 발현빈도를 분석하였으나 의미 있는 관계가 없었다. 곁 론 : IgA신병증의 예후를 예측하기 위한 여러 조사에서 발병 초기의 심한 단백뇨, 고혈압, 조직 병리학상의 심한 변화 등이 있을 경우 예후가 나쁘다고 하였으며 이런 위험 인자외에 유전적 요인에 대해 알아보고자 하였다. 본 연구에서 신부전으로 진행하여 신대체요법을 받은 IgA신병증환자군에서 HLA-$DQB1^*0302와\;^*05031$ 대립유전자의 발현빈도가 유의하게 증가되어 있어 이 결과를 바탕으로 치료후의 경과 및 예후를 진단초기에 예측하여 환자의 관리에 적용할수 있는 중요한 자료로 이용될 수 있을 것으로 사료된다.

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