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Genetic Mapping of the Gene Encoding Major Capsid Protein from Bacteriophage E3
명희준,배수진 한국외국어대학교 외국학종합연구센터 부설 기초과학연구소 1997 기초과학연구 Vol.6 No.-
Bacteriophage E3는 대단히 빠른 성장속도와 커다란 size의 plaque을 나타내는 것으로 미루어 strong promoter를 가질것으로 예상된다. Transcription의 조절이 가능한 late region에 위치한 gene들 중에 가장 copy number가 높은 major capsid protein을encode하는 gene을 mapping하기 위하여, purify된 E3 particle로 부터 major capsid protein을 분리하여 그 N-terminal amino acid sequence를 조사하고, 그에 맞는 degenerate oligonucleotide probe를 만들어 Southetn hybridization으로 E3의 genomic DNA restriction fragment들을 detect한 결과, 49kbp의 E3 DNA에서 약 72%에 해당하는 위치에 gene이 mapping되었다. Bacteriophage E3 grows very fast and shows a large sized plaque, which indicates that it has a strong promoter. To map the gene encoding major capsid protein which is a controlable late protein and has the highest copy number in the virion, the N-terminal amino acid sequence of the protein isolated from purified virion was analyzed. From these sequences, a degenerate oligonucleotide probe was made and hybridized to various restriction digested E3 genomic DNA fragments. The gene was mapped at 72% of 49kbp E3 genomic DNA.
명희준 ( Hee Jun Myung ),류수형 ( Soo Hyung Ryu ),유중호 ( Chung Hao Liu ),유정훈 ( Jung Hoon Yoo ),김서현 ( Seo Hyun Kim ),김승혁 ( Seung Hyuk Kim ),윤원의 ( Won Eui Yoon ),박태영 ( Tae Young Park ),문정섭 ( Jeong Seop Moon ) 대한소화기학회 2021 대한소화기학회지 Vol.77 No.4
The rupture of a pyogenic liver abscess (PLA) with peritonitis is a rare occurrence but a surgical emergency with a high mortality rate in the case of gas-forming PLA. Rare cases of ruptured PLA that recovered completely with only medical treatment have been reported. This paper reports a case of a large PLA rupture with peritonitis. In this case, surgical intervention was too risky because of the patient’s age and poor general condition. The patient recovered fully with appropriate antibiotic therapy and sufficient percutaneous drainage. Therefore, medical treatment may be considered an alternative option in cases of a ruptured large PLA with peritonitis if surgical intervention is too risky. (Korean J Gastroenterol 2021;77:190-193)
Hepatitis C virus NS5B polymerase의 cell-based aassay system의 개발
이상윤,명희준 한국외국어대학교 외국학종합연구센터 부설 기초과학연구소 2002 기초과학연구 Vol.14 No.-
Hepatitis C virus (HCV)는 전 세계적으로 널리 퍼져 있는 C형 간염 virus이다. HCV의 RNA-dependent RNA polymerase인 NS5B는 HCV의 replication에 있어서 제일 중요한 역할을 하는 protein이다. 따라서 이 NS5B가 HCV의 infectivity를 없앨 수 있는 중요한 target으로 많이 연구되어 왔다. 본 실험에서는 NS5B의 activity를 cell 내에서 신속히 측정할 수 있는 system을 개발하였다. NS5B와 NS3가 polycistronic 하게 cloning 되어있는 plasmid와, 5'untranslated region (5'UTR)과 reporter인 luciferase가 cloning 되어있는 plasmid를 E.coli에 CO-transformation 하였다. Reporter assay를 통하여 NS5B의 RNA polymerase activity를 확인할 수 있었다. 또한, Weatern blot으로 NS5B와 NS3가 expression 되는 것을 확인하였고, RT-PCR을 통하여 system이 working 하는 것을 확인하였다.
C형 간염 바이러스 (HCV)의 NS5A protein에 의한 HCV translation의 조절
이지영,명희준 한국외국어대학교 외국학종합연구센터 부설 기초과학연구소 2004 기초과학연구 Vol.17 No.-
C형 간염 바이러스 (HCV)의 nonstructural protein인 NSSA가 cellular factor인 eIF3 subunits (p48)와 상호작용함을 bacterial two hybrid assay를 통하여 확인하였다. 이 상호작용이 가지는 생물학적인 의미를 알아보기 위하여 NS5A가 cap과 IRES-mediated translation에 미치는 영향을 조사하였다. Dual Iuciferase construct를 reporter로 이용하여 cell free lysate과 cell culture에서 각각 실험한 결과, NS5A의 존재하에 cap과 IRES-mediated translation이 모두 감소하는 것을 관찰할 수 있었다. 이 translation의 저해효과는 dose-dependent한 방식으로 나타났다. 또한 p48을 과량 넣어주면 NS5A에 의한 translation의 감소가 역전되는 것을 관찰할 수 있었다.
박테리오파지 E3의 Major Capsid Protein을 만드는 유전자의 Mapping 및 염기서열 분석
배수진,명희준,Bae, Soo-Jin,Myung, Hee-Joon 한국미생물학회 1999 미생물학회지 Vol.35 No.4
박테리오파지 E3가 만드는 plaque은 그 지름이 약 1㎝정도이고 대단히 빠르게 성장한다. 구조 단백질 중 가장 많은 copy를 가지는 major capsid 단백질을 발현하는 유전자를 조절하는 promoter가 가장 효율적일 것이라 생각되며, 이 promoter를 찾기 위하여 먼저 이 유전자를 mapping하였다. 정제한 파지 입자로부터 major capsid 단백질을 분리하여 그 N-terminal amino acid 서열을 확인하였고, 그에 해당하는 degenerate oligonucleotide probe를 이용하여 E3의 genomic library로부터 major capsid 단백질을 발현하는 유전자를 함유하는 clone을 찾았다. 이 clone의 DNA 서열 분석을 통하여 major capsid 단백질을 발현하는 유전자를 확인하였으며, 이는 E3 genome에서 약 72%에 mapping 되었다. 이 gene을 조절하는 promoter의 성질을 고찰하기 위하여 E3의 성장이 rifampicin에 의하여 영향을 받는지 확인한 결과 E3는 자기 고유의 RNA polymerase를 가지고 있음을 알 수 있었다. Bacteriophage E3 grows very rapidly and forms a large size plaque with a diameter of 1 cm. The promoter controlling the expression of the gene encoding the major capsid protein is thought to be most efficient. To find out this promoter, this gene was mapped in the genome according to the following procedure. The major capsid protein was purified from phage particle and the N-terminal amino acid sequence was revealed. Based on this sequence,a degernerate oligonucleotide probe was designed and used for screening of the genomic DNA fragments. From the DNA sequence of the selected clone, the gene encoding the major capsid protein was mapped at 70% of E3 genome. The expression of this gene was not sensitive to rifampicin which indicated the presence of E3's own RNA polymerase.