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생쥐 대동맥에서 혈관 내피세포 및 민무늬근육세포의 효과적 분리
김경곤(Kyung Gon Kim),성언기(Eon-Gi Sung),김주영(Joo-Young Kim) 대한해부학회 2009 Anatomy & Cell Biology Vol.42 No.2
특정 유전자들이 없는 생쥐 또는 정상적인 생쥐의 대동맥으로부터 각각 분리된 세포들을 이용하여 서로 비교분석하면 죽상경화증 등의 질병 기전을 밝히는 데 유용한 모델로 쓰일 수 있다. 본 실험에서는 4~6주된 C57BL/6J 정상 생쥐 대동맥에서 혈관 내피세포와 민무늬근육세포를 효과적으로 분리하는 방법을 확립하기 위해서, 바깥막만을 제거하여 내막과 중간막으로 구성된 대동맥조직을 얻었다. 이 조직을 제1형 또는 제2형 아교질분해효소용액으로 처리하여 각각에서 분리된 내피세포와 민무늬근육세포의 특성을 조사하였다. 이들 세포의 성장 양상은 도립현미경으로 관찰하였다. 내피세포의 표지자인 CD31과 민무늬근육세포의 표지자인 α-smooth muscle actin은 공초점현미경으로 검경하였고, 효소용액의 종류에 따른 이들 세포의 분리 효과는 전체세포 수 중각 표지자에 양성반응을 보인 세포 수를 백분율로 표시하였다. 제1형 아교질분해효소용액으로 분리된 내피세포들은 배양 10일에 배양용기의 70~80%를 세포들이 덮었고, 제2형 아교질분해효소용액의 경우 40~50%가 세포들로 덮였다. 민무늬근육세포들은 배양 13일에 제1형 및 제2형 아교질분해효소용액 모두에서 배양용기의 70~80%가 세포들로 덮였다. 제1형 아교질분해효소용액으로 분리된 세포 중 CD31 양성반응인 내피세포의 백분율은 91.1±2.865%**였고, 제2형 아교질분해효소용액을 처리한 경우는 86.4±3.641%였다(**p⁄0.05, n=5). α-smooth muscle actin 양성반응인 민무늬근육세포의 백분율은 제1형 아교질분해효소용액을 사용하였을 경우 87.9±5.713%, 제2형 아교질분해효소용액의 경우 86.6±4.778%로 두 군 사이에 유의한 차이가 없었다. 이상을 요약하면 대동맥조직을 제2형 아교질분해효소용액으로 처리하는 것에 비해 제1형 아교질분해 효소용액을 사용하는 것이 혈관내피세포를 분리하는 데 있어 더욱 효과적이었다. The mechanism of the disease such as artherosclerosis is easily elucidated by the comparison among cells isolated from each aorta of knockout mouse and wild type mouse, respectively. This study was aimed at effectively harvesting the endothelial and smooth muscle cells from 4~6 weeks old wild type C57BL/6J mouse aorta. The tunica adventitia was completely removed to get the aortic tissues only consisting of the tunica intima and the tunica media under the stereoscope. These aortic tissues were treated with type I collagenase or type II collagenase solution, respectively, and then the endothelial or smooth muscle cell was isolated. CD31 marker of the endothelial cell and α-smooth muscle actin marker of the smooth muscle cell were identified with confocal microscope. The percentages of the labelled cells by each marker represented the extent of purification of endothelial or smooth muscle cells, respectively, for harvested cells according to the collagenase solutions. 70~80% of culture vessel was covered with the endothelial cells 10 days after the treatment of the type I collagenase solution, while 40~50% of culture vessel covering with the cells after the treatment of the type II collagenase solution. 70~80% of culture vessel was covered with the smooth muscle cell regardless of the type of the collagenase solution on the 13th day. Percentages of the CD31 positive cells after the treatment with the type I or the type II collagenase solution was 91.1±2.865%** and 86.4±3.641%, respectively (**p⁄0.05, n=5). Percentages of the α-smooth muscle actin labelled cells after the treatment with the type I or the type II collagenase solution were 87.9±5.713% and 86.6±4.778%, respectively, and these values were not significantly different. Taken together, the aortic tissues using the type I collagenase solution comparing with using the type II collagenase solution were much more effective in the isolation of the endothelial cells.
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Dae-Kwang Kim(김대광),Tae-Jin Lee(이태진),Eun-Ae Kim(김은애),Ju Hwan Kang(강주환),Kyung Gon Kim(김경곤),Joo-Young Kim(김주영) 대한체질인류학회 2013 해부·생물인류학 (Anat Biol Anthropol) Vol.26 No.3
Gambogic acid (GA)는 강력한 항암효과를 가진다. 민무늬근육세포의 증식과 이동은 죽상동맥경화증의 발병기전에 있어 중요한 역할을 한다. 이 연구는 GA가 대동맥 민무늬근육세포에 대하여 세포사멸 효과가 있는지를 조사하였고, simvastatin에 비해 GA의 효과가 얼마나 유용한지를 연구하였다. 대동맥 민무늬근육세포는 4-6주 된 Sprague-Dawley 흰쥐에서 분리하였다. 이들 세포는 민무늬근육의 α-액틴 항체로 면역형광염색법으로 확인하였다. MTT 방법으로 GA와 simvastatin의 IC50을 결정하였다. 약제 각각의 IC50으로 24시간 처리한 후, 살아있는 세포영상 분석, 형광물질이 표지된 annexin V와 propium iodide로 이중염색하여 세포사멸 정도 분석을 각각 시행하였다. 또한, western blot으로 민무늬근육세포에서 PARP 및 procaspase-3의 감소와 PARP 및 procaspase-3의 분할을 보고, 세포사멸임을 검증하였다. GA의 IC50인 1 μM은 simvastatin의 IC50인 30 μM보다 낮았는데, 이는 IC50만으로 보았을 때 GA가 simvastatin 보다 더 강력한 약제임을 보여주었다. 또한 세포영상에서 약제종류와는 상관없이 약제처리 24시간 후, 처리하지 않은 대조군에 비해 세포의 수가 상당이 감소되었다. GA 처리군 (26.4±2.37%)에서 simvastatin 처리군 (8.3±1.54%)에 비해 세포사멸된 세포들이 더 높은 백분율을 나타냈다 (P?0.05, n=3). 또한 GA를 처리하면 PARP, procapase-3, 그리고 Mcl-1의 발현을 감소시켰지만, simvastatin을 처리 한 경우에는 없었다. z-VAD-fmk로 전처리 후, PARP와 procaspase-3의 분할 뿐만 아니라 GA에 의해 유도된 세포사멸이 감쇄되었다. GA에 의해 유발된 Mcl-1 단백질 발현의 감소는 z-VAD-fmk에 의해 복구되었다. 이들 결과는 GA에 의해 유도된 세포사멸이 caspase 의존성 경로를 통해 일어난다는 것을 의미한다. Gambogic acid (GA) has powerful apoptotic actions. The authors investigated whether GA has apoptotic effects on aortic smooth muscle cells, and compared its potency with that of simvastatin. Smooth muscle cells were isolated from the aortas of Sprague-Dawley rats (4-6 week). Cell purities were confirmed by IF staining using α-smooth muscle actin antibody. The IC50 values for cell death by GA and simvastatin were determined using a MTT assay, and the apoptotic effects of 1 μM GA or 30 μM simvastatin (concentrations correspond to IC50 values) were determined after 24 h of treatment using live cell images and by FITC annexin-V and propidium iodide double-staining. In addition, western blotting was used to evaluate apoptosis by quantifying reductions in the expression levels of the PARP and procaspase-3 as well as cleavages of PARP and procaspase-3 after treatment with 1 μM GA or 30 μM simvastatin. The IC50 of GA (1 μM) was lower than that of simvastatin (30 μM). Cell numbers were markedly reduced by both drugs in live cell images. GA (1 μM) produced a higher level of apoptosis than 30 μM simvastatin (26.4±2.37% vs. 8.3±1.54%, respectively; P?0.05, n=3) by FITC annexin-V & PI double-staining. In addition, 1 μM GA reduced the expressions of PARP, procaspase-3, and Mcl-1 in cells, whereas 30 μM simvastatin did not. Pretreatment with z-VAD-fmk attenuated GA-induced apoptosis and the cleavages of PARP and procaspase-3. The decreased level of Mcl-1 protein induced by GA treatment was recovered by z-VAD-fmk. These results indicate that GA-induced apoptosis was mediated by a caspase-dependent pathway.
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클러스터링을 이용한 이더리움 기반 스캠 코인 탐지 연구
배유진 ( Yujin Bae ),황유나 ( Yuna Hwang ),강명석 ( Myungseok Kang ),이승우 ( Seungwoo Lee ),김성수 ( Sungsu Kim ),최유남 ( Yunam Choi ),김현민 ( Hyunmin Kim ),김경곤 ( Kyung-gon Kim ) 한국정보처리학회 2021 한국정보처리학회 학술대회논문집 Vol.28 No.2
최근 스캠 코인에 의한 피해 사례가 증가함에 따라 대부분의 가상자산 거래소가 상장된 가상자산에 대해 자체적 신뢰도 평가를 수행하고 있으나, 관련 법·제도적 체계의 부재로 인해 여전히 위험이 존재한다. 스캠 코인 여부를 판단하는 기존 서비스는 불명확한 스캠 코인 판별 기준으로 인해 충분히 신뢰하기 어려우며, 지도 학습에 필요한 라벨링 된 데이터셋이 충분하지 않아 관련 연구 또한 한계를 가진다. 본 논문은 클러스터링을 통해 스캠 코인 여부를 판단하는 것을 목표로 한다. 스캠 코인과 정상적인 가상자산을 구분하는 과정에서 유의미한 데이터를 수집하여 클러스터링을 수행하고, 스캠 코인 여부가 라벨링 된 테스트셋을 구성하여 클러스터링 결과를 평가한다. 이를 통해 본 논문이 제시하는 이더리움 기반 토큰에 대한 클러스터링 결과를 기반으로 추후 통일된 스캠 코인 판단 기준을 세울 수 있음을 제안한다.
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