Streptoverticillium olivoverticillatum에서 분리한 새로운 Type II 제한효소 SolI의 특성 연구

황혜연,임정빈,Hwang, Hye-Yeon,Yim, Jeong-Bin 한국미생물학회 1994 미생물학회지 Vol.32 No.3

토양으로부터 분리한 방선균주로부터 새로운 type II 제한효소를 분리하여 그 특성을 연구하였다. 이 균주는 수리분석 결과, Streptoverticillium olivoverticillatum으로 동정되었으며, 정제한 제한효소는 SolI이라 명명하였다. SoII은 BamHI의 isoschizomer로서 여섯 개의 염기서열 5'-G $\downarrow$ GATCC- 3'을 인지하며 두 개의 G 염기 사이에서 절단하여 4 base가 돌출된 5'말단을 생성한다. 그러나 BamHI과는 달리, dam methylation 되어 있는 인식 염기서열에는 작용하지 못하였다. Ammonium sulfate 분획(30-65%)과 heparin-agarose, Affi-gel Blue column chromatography를 거쳐 SolI을 부분 정제하였다. SolI은 활성을 보이기 위하여 0.2mM 이상의 $MgCl_2$를 반드시 필요로 하였으며, 다른 cofactor는 요구하지 않았다. NaCl이 없을 때 가장 높은 활성을 가지며 120 mM 이상의 NaCl이 있으면 활성이 완전히 억제되었다. 이 효소의 반응 최적 온도는 $40^{\circ}C$, 최적 pH는 8.6으로 나타났다. Gel filtration chromatography에서의 용출부피 비교로부터 이 효소의 분자량은 약 43,000Da인 것으로 추정된다. We screened many species from a wide variety of bacterial genera for a new type II restriction endonuclease. The purification and characterization of SolI from a soil isolate, Streptoverticillium olivoverticillatum are described here. The enzyme turned out to be an isoschizomer of BamHI. It recognized the hexanucleotide sequence of 5'-G$\downarrow$GATCC-3' and cleaved as in dicated by the arrow, generating a 4 base 5' extension. Unlike its isoschizomer, BamHI, the activity was sensitive to dam methylation within the recognition sequence. Following ammonium sulfate fractionation of the crude extract, heparin-agarose and Affi-gel Blue column chromatography were employed to purify the enzyme. SolI required at least 0.2 mM of $MgCl_2$ for the cleavage to occur. The enzyme exhibited its maximal activity in the absence of NaCl, but was inhibited completely in the presence of 120 mM NaCl. The pH and temperature optima for activity were pH 8.6 and $40^{\circ}C$, respectively. The molecular weight of SolI was estimated to be 43,000 Da by Superose-12 gel filtraion chromatography.

지치(Lithospermum erythrorhizon S.)의 캘러스배양에서 Shikonin 유도체 생산에 미치는 저선량γ선의 효과

황혜연,김재성,이영복,Hwang, Hye-Yeon,Kim, Jae-Sung,Lee, Young-Bok 한국식물생명공학회 2003 식물생명공학회지 Vol.30 No.3

The effects of low dosage ${\gamma}$-radiation on the cell growth and the formation of shikonin derivatives were investigated in callus cultures of Lithospermum erythrorhizon under different medium and light conditions. Gamma radiation significantly affected the cell growed and formation of shikonin derivatives, depending on the culture conditions. In the cell cultures grown on M-9 medium, 2Gy and 16Gy of ${\gamma}$-radiation increased the calli growth and the formation of shikonin derivatives, respectively under 16hr day light condition. When calli were cultured for 60 days in the dark after irradiation of ${\gamma}$-radiation, cell growth was increased at low dosage of 1Gy and 2Gy in LS medium containing BA 2mg/L and IAA 0.2mg/L. Interestingly, calli grown in M-9 medium by 2Gy irradiation for 60 days significantly stimulated the formation of shikonin derivatives(13.21mg/g cell fresh wt), which was approximately 6 times higher than untreated cells.

감자절간 기내배양에서 소괴경의 형성과 형태적 발달

황혜연,이영복,Hwang, Hye-Yeon,Lee, Young-Bok 한국식물생명공학회 2007 식물생명공학회지 Vol.34 No.4

기내에서 배양되고 있는 감자 (Solanum tuberosum L.)로부터 액아와 완전히 전개된 잎이 부착된 약 1 cm 크기의 절간을 채취하였다. 절간의 잎은 제거한 후 온도, 일장, sucrose, CCC의 처리가 소괴경의 형성과 비대에 미치는 영향에 관하여 확인하기 위해 MS배지에서 배양을 하였다. 기내 소괴경의 형성에 있어 $20^{\circ}C$와 $28^{\circ}C$의 두 처리간에 있어 배양 80일 후에 형성된 괴경의 크기나 생체중 모두 $28^{\circ}C$에 비해 $20^{\circ}C$에서 유의성 있는 효과를 보였으며, 배지에 첨가되는 sucrose의 영향에 있어서도 농도에 따른 차이가 뚜렷하여 8% sucrose가 3% 보다 괴경의 비대 발육을 촉진하였다. 일장의 영향은 배지의 sucrose의 농도의 영향을 많이 받았다. $20^{\circ}C$에서는 sucrose가 8%일 때 일장에 관계없이 괴경의 형성이 양호하였지만 sucrose의 농도가 3%일 경우에는 일장과 관계없이 액아는 신초로 발달하였다. 그러나 $28^{\circ}C$의 고온에서는 8% sucrose와 8시간의 단일에서만 괴경의 비대에 효과가 있었다. CCC의 영향에 있어서 괴경의 구중은 sucrose 농도가 8%의 배지에서는 모든 일장에서 괴경의 형성이 양호하였으며 일장이 짧을 수록 효과는 더 양호하였다. 배양온도에 따른 감자의 액아부위 세포의 조직학적 변화에 있어서는 저온조건에서 괴경이 형성이 촉진되어 세포의 조직은 신장생장보다 비후생장을 함을 관찰할 수 있었다. 일장조건에 따른 변화에 있어서는 암조건에서 조직의 비후 생장이 뚜렷함을 관찰할 수 있었으며, CCC의 첨가 유무에 따른 변화에 있어서는 CCC를 첨가한 조건에서 양호한 현상을 관찰 할 수 있었다. 또한 조직의 변화에 있어서 배양한지 9일이 되었을 때 pith, cortex 및 perimedullary tissue에 있는 parenchyma 세포의 수와 크기가 증가된 것으로 확인할 수 있었다. 특히 조직내 위치별 세포분열의 가시적 비율에서는 pith부위 보다 cortex부위에서 세포비후의 비율이 큰 것으로 보였다. Sucrose, CCC 및 일장차이에 따른 AGPase 활성의 변화에 있어서 암처리에서는 sucrose 농도 3%보다 8%에서 양호하였고 sucrose 3%, 8%에서도 각각 CCC의 효과를 볼 수 있었다. 8시간 처리에서는 sucrose 농도 3%보다 8%에서 양호하였고 sucrose 3%, 8%에서는 CCC의 효과가 나타나지 않았다. 16시간 처리 sucrose 농도 3%보다는 8%에서 양호하였고 sucrose 3%에서는 CCC의 효과가 나타나지 않았으나 8%에서는 CCC의 효과를 볼 수 있었다. 결과적으로 sucrose의 농도가 높고, CCC와 암처리의 괴경형성의 촉진조건에서 AGPase의 활성이 양호함을 볼 때, AGPase가 starch 합성에 중요한 물질이라는 사실이 확인되었다. One-node stem pieces ca. 1 cm in length containing a axillary bud and a fully expanded leaf were obtained from it in vitro plants of potato (Solanum tuberosum L.). Leaves were removed and the nodes were cultured on the MS medium to investigate the effects of temperature, day length, sucrose, and CCC in microtuber formation and development. The fresh weight of microtubers after 80 days increased significantly at 8% sucrose and $20^{\circ}C$ compared with $28^{\circ}C$. The tuberization and development were reduced at $28^{\circ}C$ except short-day treatment of 8 hours at 8% sucrose. The fresh weight and diameter were increased on the culture medium added CCC 500 mg/L. The potato tuberization was promoted under short daylength, and it showed great effect by treatment with the CCC. Though the tuberization was promoted at low temperature of $20^{\circ}C$ in a histologic change of an axillary bud part cell of a potato, the cells were able to observe the swelling growth. Swelling growth of tissue was stimulated in the darkness and was more remarkable by addition of CCC. In particular, in the visual ratio of cell division for each position in the tissue, the cortex part showed larger ratio of cell expansion than that of the pith part. The effect of CCC was identified at 8% sucrose in the darkness. The effect of CCC was not showed in sucrose 3% under long daylength of 16 hours. As a result, the fact of a substance with AGPase important for starch composition was certified by the result with the inclose of AGPase activity on high concentration of sucrose, CCC, and dark treatment by which tuber formation and development are promoted.

대구지역 학생들의 싱겁게 먹기 행동변화단계에 따른 짠맛 미각판정치, 짜게 먹는 식태도와 식행동 비교

황혜연(Hwang, Hye-Hyun),신은경(Shin, Eun-Kyung),이혜진(Lee, Hye-Jin),황태윤(Hwang, Tae-Yoon),김영애(Kim, Young Ae),이연경(Lee, Yeon-Kyung) 한국영양학회 2016 Journal of Nutrition and Health Vol.49 No.1

본 연구는 초중등학생들을 대상으로 싱겁게 먹기 행동 변화단계별로 짠맛 미각판정치, 짜게 먹는 식태도 및 식행동의 차이를 분석하고 추후 이들을 위한 싱겁게 먹기 영양교육을 위한 기초자료로 제공하고자 하였다. 싱겁게 먹기 행동변화단계별 비교 결과, “싱겁게 먹으려고 생각해 본적이 없다” (고려전단계, n = 492)와 “앞으로 6개월 이내 싱겁게 먹으려고 생각하고 있다 (고려단계, n = 686)”는 학생들이 “싱겁게 먹기를 실천하고 있다 (행동단계, n = 351)”와 “싱겁게 먹은 지 6개월이 지났다 (유지단계, n = 60)”는 학생들보다 짠맛 미각판정치가 유의하게 높았다 (p < 0.001). 짠맛 선호도는 유지단계 학생들의 경우 고려전과 고려단계의 학생들보다 가장 낮은 두 염도에 대한 선호도가 더 높았으며 (p < 0.001, p < 0.001), 높은 두 염도에 대한 선호도는 더 낮은 것으로 나타났다 (p < 0.001, p < 0.001). 또한 싱겁게 먹기 행동단계별 짜게 먹는 식태도와 식행동 점수는 고려전단계 학생들이 가장 높은 점수를 보였고, 유지단계 학생들이 가장 낮은 점수를 나타내었으며, 각 단계 간에 모두 유의한 차이를 나타내었다 (p < 0.001, p < 0.001). 이상의 결과, 싱겁게 먹기 행동변화단계에서 고려전과 고려단계 학생들의 짠맛 미각판정치, 짜게 먹는 식태도와 식행동 점수가 행동단계나 유지단계의 학생들보다 모두 유의하게 높은 것으로 나타났다. 따라서 나트륨 저감화 교육을 실시할 때 학생들의 싱겁게 먹기 행동변화단계를 먼저 파악하여 행동변화단계에 맞는 행동수정전략을 적용하는 것이 필요함을 시사한다. Purpose: This study was conducted for comparison of salty taste assessment, salty taste preference, high-salt dietary attitude, and high-salt dietary behavior by stages of behavior change among school-aged children and adolescents. Methods: A total of 1,595 students (1,126 school- aged children, 469 adolescents) from 43 elementary schools and 17 middle and high schools in Daegu were tested using salty taste kits and surveyed using questionnaires on stages of behavior change, high-salt dietary attitude, and behavior. Results: Adolescents showed a significantly higher result for salty taste assessment than school-aged children (p < 0.01). In salty taste assessment, the students of pre-contemplation stage (n = 498) and contemplation stage (n = 686) showed higher scores than students of action stage (n = 351) and maintenance stage (n = 60). Regarding the salty taste preference, students of maintenance stage preferred the lower two samples (0.08%, 0.16%) and students of pre-contemplation stage preferred the higher two samples (0.63%, 1.25%). High-salt dietary attitude scores and dietary behavior scores were highest for students of pre-contemplation stage and were lowest for students of maintenance stage. Conclusion: Salty taste assessment, high-salt dietary attitude, and high-salt dietary behavior were significantly different by stages of behavior change among school-aged children and adolescents. This study suggests the need for examination of the stages of behavior change before nutrition education for effective education.

치매예방 프로그램 운영 및 효과검증 연구

황옥남(Hwang Ok Nam),윤숙례(Yoon Sook Rye),황혜연(Hwang Hye Yeon),남기석(Nam Ki Seok) 한국재활간호학회 2002 재활간호학회지 Vol.5 No.2

Enterobacter agglomerans CBNU45로부터 분리된 제한효소 EagBI 의 특성

최영주,김성재,황혜연,임정빈,김영창,Choe, Yeong-Ju,Kim, Seong-Jae,Hwang, Hye-Yeon,Im, Jeong-Bin,Kim, Yeong-Chang 한국미생물학회 1994 미생물학회지 Vol.32 No.1

토양에서 분리된 Enterobacter agglomerans CBNU45는 type II 제한효소인 EagBI을 생산하고 있음을 발견하였다. EagBI을 DEAE-cellulose, phosphocellulose P11, hydroxylapatite column chromatography를 거쳐 부분 정제하여 그 특성을 알아보았다. EagBI은 여섯개의 염기배열 5’-CGAT${\downarrow}$CG-3’을 인식하고 T 와 C 사이를 절단하여 두개의 염기가 3’-말단쪽으로 돌출된 cohesive end를 형성하였다. EagBI의 반응 최적조건은 10mM Tris-HCl(pH 7.8), 6~10mM $MgCl_2$, 37${\circ}C$이었으며 NaCl이 없는 반응 완충용액에서 가장 좋은 활성을 보였다. EagBI은 $dam^-$와 $dam^+$ 메칠화 DNA도 절단할 수 있으며 65${\circ}C$에서 10분 동안 열처리하였을 때 효소의 활성을 상실하였다. 따라서 EagBI은 PvuI의 isoschizomer이나 NaCl 요구성과 열안정성에서 PvuI보다 편리한 제한효소로 확인되었다. EagBI is a type II restriction endonuclease from Enterobacter agglomerans strain CBNU45 isolated from soil. EagBI was partially purified by DEAE-cellulose, phosphocellulose P11 and hydroxylapatite column chromatography. EagBI recognizes and cleaves the sequence 5'-CGAT${\downarrow}$CG-3' and generates 2-base 3'-protruding cohesive ends. The optimal reaction conditions of EagBI are 10 mM Tris-HCl (pH 7.8), 6-10 mM $MgCl_2$, at 37 ${\circ}C$. The enzyme is maximally active in the absence of NaCl, able to cleave both $dam^-$ and $dam^+$ DNAs, and sensitive to heat treatment (at 65 ${\circ}C$ for 10 min). Therefore, although EagBI is an isoschizomer of PvuI, it is more useful than PvuI in respect of the NaCl requirement and heat-stability.

Streptomyces diastatochromogenes로부터 분리된 SdiI의 특성에 관한 연구

배무,송은숙,황혜연,임정빈,Bae, Moo,Song, Eun-Sook,Hwang, Hye-Yeon,Yim, Jeong-Bin 한국미생물학회 1994 미생물학회지 Vol.32 No.4

토양분리 방선균 Streptomyces diastatochromogenes로부터 분리된 제한효소 SdiI은 넓은 범위의 pH(7.0~12.5)와 온도 ($-60^{\circ}C$)에서 활성을 보였으며, 고농도 (-500mM) NaCl이 있어도 작용하였다. 또한, $20~60^{\circ}C$ 온도에서 안정하며, 활성을 갖기 위해서는 $MgCl_2$를 필요로 하였다. Lambda DNA에 대한 지도 작성으로부터 XhoI의 isoschizomer로 추정되었으며, DNa 염기서열 분석 결과, 인식, 절단 서열은 다음과 같이 결정되었다. 5‘-C${\downarrow}$TCGA G-3' 3'-G AGCT${\uparrow}$C-5' In catalytic properties of the restriction enonuclease, SdiI, which was purified from Streptomyces diastatochromogenes, this enzyme was active at wide range between pH 7.0 and 12.5, and up to $60^{\circ}C$ and 500 mM of NaCl concentration. It was stable between 20^{\circ}C$ and $60^{\circ}C$, and essentially requires $MgCl_2$ for endonuclease activity. The restriction map of lambda DNA which was obtained by double digestion with various enzymes suggested SdiI to be an isoschizomer of XhoI. From the determination of restriction site based on DNA sequencing method, recognition and cleavage specificity of SdiI was concluded as: 5‘-C${\downarrow}$TCGA G-3' 3'-G AGCT${\uparrow}$C-5'

노인주간보호시설의 운영을 위한 기초조사

남기석(Nam Ki Sook),황옥남(Hwang Ok Nam),황혜연(Hwang Hye Yeon),윤숙례(Yoon Sook Rye) 한국재활간호학회 2002 재활간호학회지 Vol.5 No.2

토마토 양액재배 시 이상줄기 발생방지를 위한 적정 유인방법

김학헌(Hak-Hun Kim),임엄량(Um-Ryang Im),황혜연(Hye-Yeon Hwang),이영복(Young-Bok Lee) 한국원예학회 2002 한국원예학회 학술발표요지 Vol.2002 No.3

일반토마토 접목재배 시 시비량이 생육, 수량 및 품질에 미치는 영향

이환구(Hwan-Gu Lee),임엄량(Eum-Ryang Im),황혜연(Hye-Yeon Hwang),이영복(Young-Bok Lee) 한국원예학회 2002 한국원예학회 학술발표요지 Vol.2002 No.3