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- 저자 : Zu-An Lee(이주안) (검색결과 4 건)
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이주안,김형석,임채완,김해영,박영두 경희대학교 생명자원과학연구원 2002 硏究論文集 Vol.22 No.-
사람 H-chain ferritin 유전자를 Agrobcterium-mediated transformation 방법으로 담배(Nicotiana tabaccum L)에 전이시켰다. 이를 위하여 사람 H-chain ferritin 유전자를 C_(S)VMV promotor와 NOS terminator를 운반하는 plant binary vector, pILTAB 357에 도입하였다. pILTAB 357를 포함하는 Agrobcterium tumefaciens LBA4404로 담배 잎 절편체를 감염시킨 후 형질전환 신초는 MS배지에 1 5 ㎎/L BA, 50 ㎎/L kanamycin 그리고 200 ㎎/L cefotaxim이 첨가된 1차 선발배지에서 유도하였다. 유도된 신초는 MS배지에 100 ㎎/L kanamycin과 200 ㎎/L cefotaxim이 포함된 2차 선발배지에서 뿌리를 유기하였다. 뿌리가 형성된 재분화 개체는 온실에서 재배하였으며 자가수분하여 종자를 수확하였다. 사람 H-chain ferritin유전자의 담배 genome내로의 전이여부를 H-chain ferritin 유전자내의 primer를 이용하여 PCR 방법으로 확인한 바 형질전환 개체에서 예상했던 560bp 단편을 볼 수 있었으나 형질전환을 시키지 않은 식물체에서는 PCR 산물을 확인할 수 없었다. Kanamycin 저항성 분석은 전이유전자의 후대로의 안정적인 유전을 보여 주었으며 저항성 종자들은 homozygous개체를 확보하기 위해 온실에서 재배 중에 있다. A human H-chain ferritin gene was introduced into tobacco (Nicotiana tabaccum L.) plants by Agrobcterium-mediated transformation. To introduce this gene, human ferritin gene was cloned into plant binary vector, pILTAB 357, horboring CsVMV promotor and nopalin synthase terminator (3' NOS). After infection with Agrobacterium tumefaciens LBA4404 containing pILTAB 357, transformed shoots were induced from first selection media (MS media + 1.5 ㎎/L BA + 50 ㎎/L kanamycin + 200 ㎎/L^(1) cefotaxim). Induced shoots were rooted in second selection media (MS media + 100 ㎎/L kanamycin + 200 ㎎/L cefotaxim). Rooted shoots were cultivated, selfed, and seeds were harvested in the green house. To confirm the transfer of the human H-chain ferritin gene in the genome of tobacco plants, PCR was conducted using specific primers of the H-chain femritin gene. A PCR fragment of 560 bp was obtained from each transformed plants, which is the predicted size of the H-cham ferritin gene but not from nontransformed plants. Kanamycin resistance assay showed that transgenes were stably inherited to next generation in all lines. These resistance seeds from each line were cultivated in the green house to obtain homozygous lines for further study.
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Dihydroflavonol 4-reductase 유전자를 이용한 담배의 형질전환
유정아,이원숙,이주안,김영채,박영두 경희대학교식량자원개발연구소 2006 硏究論文集 Vol.25 No.-
본 연구는 화색과 관련된 DFR 유전자를 Agrobacterium을 이용한 형질전환 방법으로 담배(Nicotiana tabaccum L.)에 형질전환 시키기 위해 수행되었다. 이를 위하여 배추의 DFR 유전자를 CaMV 35S promotor와 nos terminator를 운반하는 식물 발현용 vector, pCAMBIA 1302에 삽입하였다. 재조합된 벡터 pCAMBIA 1302-DFR은 Agrobacterium tumfaciens LBA4404를 이용하여 담배 식물체 잎 절편체를 형질전환한 후 MS 배지에 1.5 mg·L^(-1) BA, 50 mg·L^(-1) hygromycin 및 200 mg·L^(-1) cefotaxim이 첨가된 1차 선발배지에서 신초를 유도하였다. 유도된 신초는 100 mg·L^(-1) hygromycin과 200 mg·L^(-1) cefotaxim이 첨가된 2차 선발 배지에서 뿌리를 유기하였다. 뿌리가 형성된 재분화 개체는 온실에서 재배하였으며 재배된 담배로부터 genomic DNA를 추출하고 DFR 유전자의 담배 genome내로의 전이여부를 hygromycin primer를 이용하여 PCR 방법으로 확인한 바 형질전환 개체에서 예상했던 365 bp 단편을 볼 수 있었으나 형질전환을 시키지 않은 식물체에서는 PCR 산물을 확인 할 수 없었다. PCR 검정으로 확인된 담배는 화색변이 여부를 관찰하기 위해 온실에서 재배 중에 있다. Dihydroflavonol 4-reductase (DFR) gene was introduced into tobacco (Nicotiana tabaccum L.) plants using Agrobacterium mediated transformation. To introduce this gene, DFR gene was cloned into plant binary vector, pCAMBIA 1302, harboring CaMV 35S promotor and nos terminator. After infection with Agrobacterium tumefaciens LBA4404 containing pCAMBIA 1302, transformed shoots were induced from first selection medium (MS medium + 1.5 mg·L^(-1) BA + 50 mg·L^(-1) hygromycin + 200 mg·L^(-1) cefotaxim). To confirm the transfer of DFR gene in the genome of tobacco plants, PCR was conducted using primers of the hygromycin gene. A PCR fragment of 365 bp was obtained from each transformed plants, which is the predicted size of the hygromycin gene but not from nontransformed plants. Transformed tobacco plants are growing in the greenhouse to analyze phenotypic variation, especially flower color.
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