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돼지의 난포액 내 단백질인자의 탐색과 변화에 관한 연구
지미란,정희태,양부근,이채식,박춘근,Ji, Mi-Ran,Cheong, Hee-Tae,Yang, Boo-Keun,Lee, Chae-Sik,Park, Choon-Keun 한국동물번식학회 2010 Reproductive & developmental biology Vol.34 No.3
When fully grown oocytes are removed from their follicles, they can resume meiosis and mature spontaneously under in vitro conditions. However, nuclear maturation under in vitro condition is not accompanied by complete cytoplasmic maturation, which is essential for successful fertilization and the initiation of zygotic development. This study analyzed change of proteins in follicular fluids during the porcine follicular development. Follicular fluids were collected from follicles of diameter 1~2 mm, 2~6 mm and 6~10 mm in ovary of slaughtered pigs. Total proteins were extracted from follicular fluids by M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent. We confirmed totally 27 same spots, 1 spot from follicle fluid of 2~6 mm follicle and 5 spots from follicle fluid of 6~10 mm in diameter were analyzed by MALDI mass spectrometry and searched on NCBInr. In results, spot No. 28 from 2~6 mm follicle was Ig lambda chain C region, and spot No.32 and 33 from 6~10 mm was Apolipoprotein A-(APOA4). Spot No.29 and 31 were failed to analyze. These results indicate that the porcine oocyte during in vitro maturation depend on specific different expressed proteins may play an important roles in the sequence of molecular events in porcine oocyte maturation and follicular development.
지미란,장예진,황아인,김점순,김경운,이휘철,정학재,양병철,류재규,박진기,변승준 사단법인 한국동물생명공학회 2011 Reproductive & developmental biology Vol.35 No.3
In this study, we generated transgenic chickens expressing the human lactoferrin(hLTF) gene driven by promoter region of chicken ovalbumin gene using lentiviral vector system that is efficient vehicles for the delivery of exogenous genes in chicken embryo. Lactoferrin is well known as an iron-binding protein that was originally isolated from milk. The recombinant lentiviruses containing the hLTF gene were injected into the subgerminal cavity of freshly laid eggs. Subsequently, the embryos were incubated to hatch using phases II and III of the surrogate shell ex vivo culture system. From 240 injected embryos, the 16 chicks(G0) were hatched and screened for the human lactoferrin gene with PCR. Two chicks were identified as transgenic birds(G0) containing the transgene in their semen. Using these founders,we produced transgenic chickens. In the generated transgenic hens, expression of the hLTF gene was identified in the oviduct. These results show the potential of the chicken as a bioreactor.
장예진,지미란,전미향,김점순,김경운,한덕우,정학재,양병철,류재규,박진기,김태완,변승준 韓國家禽學會 2012 韓國家禽學會誌 Vol.39 No.3
본 연구는 형질전환 닭에서 주입한 외래 유전자의 세대간 전이와 발현 양상을 조사하고자 하였다. 외래 유전자 전이 양상 조사는 제3세대(G2) GFP 형질전환 수탉을 최초 부계로 사용하여 최종적으로 제9세대(G8) 형질전환 닭을 연속적으로 생산하면서 GFP 유전자 전이 양상을 조사하였다. 형질 전환 병아리 유전 분석은 자외선 램프 아래에서 부화한 병아리들의 날개, 부리와 다리에서 녹색형광단백질을 발현하는 병아리들만을 형질전환으로 선발하였다. 형질전환 닭에서 외래 유전자 전이율은 대략 38~58%이었다. 이는 유전자 전이가 멘델의 유전 법칙을 따르고 있음을 보여주고 있다. 연구결과는 GFP 유전자가 유전자 침묵 없이 멘델의 유전 법칙에 따라 다음 세대로 계속 전이와 발현된다는 것을 보여 주고 있다. This study was performed to analyze the generational transmission and the expression of the foreign gene in the GFP transgenic chickens. The transmission rate and the expression of the GFP gene was investigated from the GFP transgenic rooster (G2) as the first founder to the ninth (G8). Analysis of GFP expression in hatched chickens was used the UV lamp. When GFP was expressed in the wings, bill and legs of a chick, the bird only was selected as a transgenic chick. The average transmission rate of the overall transgenic was 38~58%. These results showed that the transmission of the GFP gene in the transgenic chickens in accordance with the laws of Mendel's continues to the next generation without gene silencing.
3D8 ScFv 형질전환 닭의 항-바이러스성 기능 검증
장예진,지미란,전미향,김점순,정학재,한덕우,김경운,김동훈,양병철,박춘근,류재규,박진기,변승준 한국동물번식학회 2012 Reproductive & Developmental Biology(Supplement) Vol.36 No.2s
본 연구는 핵산가수분해 기능이 있는 항체인 3D8 scFv(single-chain variable fragment) 유전자를 형질전환 닭에서 발현시키고 3D8 scFv 항체의 항-바이러스 기능을 검증하고자 한다. 연구는 in vitro(형질전환 닭유래 세포)와 in vivo(형질전환 닭)로 나누어서 수행하고자 한다. 먼저 닭 태아섬유아세포는 형질전환 닭과 일반 닭을 각각 인공수정을 시킨 후 생산된 10일차 수정란의 태아에서 CEF(Chicken Embryo Fibroblast)를 수집하였다. 3D8 scFv 유전 자가 삽입된 CEF 세포는 항생제(puromycin)를 이용하여 형질전환 세포만을 선발하였다. 그 리고 선발된 CEF 세포는 면역염색을 이용하여 3D8 scFv 유전자가 세포내에서 단백질로 발현됨을 확인하였다. 그리고 선발된 세포들의 항-바이러스 기능 검증은 GFP 유전자로 표 지된 재조합 NDV(Newcastle Disease Virus)를 세포에 직접 감염시키고, 세포내에서 발현 하 는 GFP의 발현량을 FACS를 이용하여 정량하는 방법으로 항-바이러스 기능을 조사하였다. 이들 가운데 항-바이러스 기능이 있을 것으로 예상되는 형질전환 2계통에 대하여 항-바이러스 기능을 검증을 준비하고 있다.
3D8 ScFv 형질전환 닭의 항-바이러스성 기능 검증
장예진,지미란,전미향,김점순,정학재,한덕우,김경운,김동훈,양병철,박춘근,류재규,박진기,변승준 한국동물번식학회 2012 Reproductive & developmental biology Vol.36 No.2
본 연구는 핵산가수분해 기능이 있는 항체인 3D8 scFv(single-chain variable fragment) 유전자를 형질전환 닭에서 발현시키고 3D8 scFv 항체의 항-바이러스 기능을 검증하고자 한다. 연구는 in vitro(형질전환 닭유래 세포)와 in vivo(형질전환 닭)로 나누어서 수행하고자 한다. 먼저 닭 태아섬유아세포는 형질전환 닭과 일반 닭을 각각 인공수정을 시킨 후 생산된 10일차 수정란의 태아에서 CEF(Chicken Embryo Fibroblast)를 수집하였다. 3D8 scFv 유전 자가 삽입된 CEF 세포는 항생제(puromycin)를 이용하여 형질전환 세포만을 선발하였다. 그 리고 선발된 CEF 세포는 면역염색을 이용하여 3D8 scFv 유전자가 세포내에서 단백질로 발현됨을 확인하였다. 그리고 선발된 세포들의 항-바이러스 기능 검증은 GFP 유전자로 표 지된 재조합 NDV(Newcastle Disease Virus)를 세포에 직접 감염시키고, 세포내에서 발현 하 는 GFP의 발현량을 FACS를 이용하여 정량하는 방법으로 항-바이러스 기능을 조사하였다. 이들 가운데 항-바이러스 기능이 있을 것으로 예상되는 형질전환 2계통에 대하여 항-바이러스 기능을 검증을 준비하고 있다.