발생중 마우스 배자에서 Epidermal Growth Factor 수용체 발현에 관한 면역조직화학적 연구

길영기,김순옥 대한해부학회 1996 Anatomy & Cell Biology Vol.29 No.2

Changes of glycosylation pattern in aging rat kidneys as revealed with lectin conjugates

길영기,김근하,최병태 대한체질인류학회 2007 대한체질인류학회 학술대회 연제 초록 Vol.50 No.-

카드뮴 중독시 신장의 중탄산염 재흡수의 감소 기전

길영기,임학,안도환 고신대학교(의대) 고신대학교 의과대학 학술지 2005 고신대학교 의과대학 학술지 Vol.20 No.1

Background : We and others have demonstrated that cadmium (Cd) intoxication caused bicarbonaturia, reduced maxium transport of HCO3-, low plasma HCO3- level, and finally renal tubular acidosis. These findings imply that the transporters and/or enzymes that mediate HCO3- reabsorption may be inhibited. Therefore, we examined the changes in sodium-hydrogen exchanger type 3 (NHE3) and carbonic anhydrase4 (CA4) enzyme in Cd-intoxicated rats. Methods : Brush border membrane vesicles (BBMV) from renal cortex were prepared by Mg precipitation method. NHE3 activity in BBMV was measured by spectrofluorometry using acridine orange dye. The expression of NHE3 antigen was determined by immunoblot and immunohistochemistry. CA4 activity was measured by a end-point colorimetric method. Results : Proton (H+) permeability of BBMV prepared from Cd-treated rats was not different from that of control BBMV. Hofstee plot indicated that Vmax of NHE3 activity was decreased in the cadmium group but Kna was not changed. Hill coefficient was also not altered by cadmium. Western blot showed that NHE3 antigen was reduced in Cd-treated rats compared to the control, which was confirmed by immunohistochemistry. CA4 activity was not changed. Conclusion : The results demonstrate that the decreased expression of NHE3 in Cd-treated rats reduces bicarbonate reabsorption in the proximal tubule, which is likely to cause bicarbonaturia and renal tubular acidosis in Cd intoxication.

인진추출물이 lipopolysaccharide주입에 의한 흰쥐 간의 염증반응에 미치는 혈청학적 및 면역조직화학적 영향

길영기,이준혁,최병태 한국생명과학회 2004 생명과학회지 Vol.14 No.2

인진추출물의 LPS에 의한 흰쥐 간의 염증반응에 미치는 영향을 혈청학적, 조직병리학적, 면역조직화학적으로 분석하였다. 혈청 GOT, GTP, LDH 는 LPS에 의해 증가하며 이는 인진추출물의 전처리에 의해 저해되며 특히 150 mg/kg 투여군의 GOT와 50 mg/kg 투여군의 LDH가 대조군에 비해 유의성을 보였다. 조직병리학적으로 보아 인진추출물의 전처리는 LPS에 의해 나타나는 혼탁종창, 수포성변성, 염증성 세포침윤, Kupper세포반응 등을 저해하였다. 염증관련 인자에 대한 면역조직화학적 분석으로 보아 인진추출물의 전처리는 LPS주사군의 NF-kBp65, TNF-$\alpha$, COX-2 면역반응보다 약한 반응을, I-kB$\alpha$는 LPS주사군보다 강한 세포질내 면역반응을 보였다. 이로 보아 인진추출물은 LPS에 의한 간손상에 대해 유효한 기능을 가지며 이에 NF-kB를 비롯한 염증관련 단백질의 발현이 작용함을 알 수 있다. We investigated the anti-inflammatory effects of aqueous extract of Artemisia capillaris Thunb. (AEAC), a traditional Korean herb for remedying liver disease, for suppression in the process of lipopolysaccharide (LPS)-induced inflammation in the liver of rat. Level of glutamate oxaloacetate transaminase (GOT), glutamate pyruvate transaminase (GPT) and lactate dehydrogenase (LDH) was increased in the serum of LPS-treated rats compared to normal, however, in the rats pretreated with AEAC, the increase of GOT, GPT and LDH value was arrested. More severe histological changes of liver such as cloudy swelling, hydropic degeneration, Kupffer cell reaction and inflammatory cells infiltration were demonstrated in the rats challenged with LPS compared with normal. Fewer scores of these changes were observed in rats pretreated with AEAC. Immunohistochemical analysis showed that while the expression of the nuclear factor (NF)-kBp65, inducible nitric oxide synthase (iNOS), tumor necrosis factor (TNF)-$\alpha$ and COX (cyclooxygenase)-2 tended to increase, that of inhibitory (I)-kBa was decreased in the hepatocytes of rats challenged with LPS. A slight decline of NF-kBp65, TNF-$\alpha$ and COX-2, but increase of I-kB$\alpha$ were observed in the hepatocytes of the rats pretreated with AEAC. These results suggest that AEAC may act as a therapeutic agent for liver disease through a regulation of inflammation-related proteins.

화학요법에 의한 설암조직의 CD34의 변화

길영기 고신대학교 의과대학 2010 고신대학교 의과대학 학술지 Vol.25 No.2

Despite enormous progress in current chemotherapeutic approaches for cancer, there is not advances of prognosis in malignant tumor of head and neck. Especially the prognosis in tongue cancer patients with well developed vessel is poor. Therefore, it is very important to distinguish the patient with infiltrating tumor and to find tumor marker which can play key role in effective strategy for cancer treatment. Because there is little report of CD34 as prognostic marker in tongue cancer, this study was performed to investigate the alteration of CD34 expression in tumor specimens from eleven patients with tongue cancers before and after chemotherapy. In this study, CD34 was expressed in endothelial cells of mature vessels, especially in micro-vessels, which located in tumor parenchymal tissue. In the specimens after chemotherapy, the expression of CD34 was decreased, suggest that chemotherapy inhibit the angiogenesis. Taking above, the alteration of CD34 expression in tongue cancer tissue by chemotherapy suggests that CD34 potentially are expected to use in tongue cancer as prognostic factors

카드뮴 중독시 신장의 중탄산염 재흡수의 감소 기전

길영기,임학,안도환 고신대학교 의학부 2005 高神大學校 醫學部 論文集 Vol.20 No.1

카드뮴 중독시 신장의 중탄산염 재흡수의 감소 기전을 밝히기 위해 근위세뇨관 brush border membrane (BBM)에 존재하는 Na-hydrogen exchanger-3 (NHE3)의 변화와 CA Ⅳ 효소의 변화를 측정했다. 카드뮴 처치에 의해 NHE3의 활성도뿐만 아니라 발현량도 감소되었다. 그러나 CA Ⅳ 효소의 활성도에는 변화가 없었다. 이러한 결과는 카드뮴 중독시 BBM의 NHE3 단백질 발현이 감소됨으로써 중탄산염 재흡수가 감소되는 것으로 사료된다. Background We and others have demonstrated that cadmium (Cd) intoxication used bicarbonaturia, reduced maxium transport of HCO^(-)₃, low plasma HCO^(-)₃level, and finally renal tubular acidosis. These findings imply that the transporters and/or enzymes that mediate HCO^(-)₃reabsoption may be inhibited. Therefore, we examined the changes in sodium-hydorgen exchanger type 3 (NHE3) and carbonic anhydrase Ⅳ(CA Ⅳ) enzyme in Cd-intoxicated rats. Methods Brush border membrane vesicles (BBMV) from renal cortex were prepared by Mg precipitation method. NHE3 activity in BBMV was measured by spectrofluorometery using acridine orange dye. The expression of NHE3 antigen was determined by immunoblot and immunohistochemistry. CA Ⅳ activity was measured by a end-point colorimetric method. Results Proton (H^(+)) permeability of BBMV prepared from Cd-treated rats was not different from that of control BBMV. Hofstee plot indicated that Vmax of NHE3 activity was decreased in the cadmium group but Kna was not change. Hill coefficient was also not altered by cadmium. Western blot showed that NHE3 antigen was reduced in Cd-treated rats compared to the control, which was confirmed by immunohistochemistry. Ca IV activity was not changed. Conclusion The results demonstrate that the decreased expression of NHE3 in Cd-treated rats reduces bicarbonate reabsoption in the proximal tubule, which is likely to cause bicarbonaturia and renal tubular acidosis in Cd intoxication.

동면 중 한국산 다람쥐 신장의 복합당질 변화

길영기(Young Gi Gil) 한국생명과학회 2008 생명과학회지 Vol.18 No.9

한국산 다람쥐를 단계적으로 6℃ 온도로 낮추어 인위적 동면을 유도하였다. 동면은 3개월부터 유도되었으며 9개월간 사육하였다. 동면중 급격한 생리적 변화에 따른 형태 및 복합당질의 변화를 관찰하였다. 형태적으로 동면초기 응축된 사구체 구조와 발견되는 것의 동면중에도 유사한 신장 구조를 나타내었다. Lectin조직화학에 대한 반응은 크게 동면 초기에 일시적으로 증가하는 반응군, 동면진행에 따라 증가하는 반응군 및 감소하는 반응군으로 대별할 수 있다. 동면 초기에 일시적으로 증가하는 반응은 근위곡요세관의 Con A, 원위곡요세관의 PNA, Con A, 집합관의 DBA, sWGA가 현저하였다. 동면이 진행됨에 따라 현저히 증가하는 반응은 원위곡요세관의 SBA반응이었으며, 감소하는 반응은 모든 세관의 sWGA반응이었다. 유사한 형태적 구조를 가지나 다양한 lectin반응의 변화는 동면중 나타나는 급격한 신장 생리 변화와 연관성이 있는 것으로 유추되며, 이러한 반응성은 동면중 신장 기능 변화에 대한 마크로 유용할 것이다. Though relatively little is known of the physiology involved, there is reduced kidney activity during hibernation. In this experimental study, male Korean chipmunks (Tamias sibiricus barberi) were maintained in cold conditions (6℃) for 9 months, in an attempt to mimic conditions occurring during seasonal hibernation. The examination was made to determine changes of glycoconjugates on the kidney after hibernation by lectin histochemistry. The changes of lectin affinities in the kidney categorize into three groups: a) increase ones only in the early hibernation stage b) increase ones during hibernation and c) decrease ones during hibernation. The transient increase of Con A affinity in the proximal convoluted tubules were demonstrated only in the early cold-treated stage, and PNA and Con A in the distal convoluted tubules and DBA and sWGA in the collecting tubules. SBA affinity tended to increase with hibernation in the proximal convoluted tubules, but sWGA affinities were significantly decreased in the all tubule examined with hibernation. The present results suggest that the glycosylation pattern of the kidney undergoes profound changes during hibernation, and is probably associated with transiently reduced renal function.

발생중 마우스 배자에서 Transforming Growth Factor-α와 Epidermal Growth Factor의 발현차이

길영기(Kil Young Ki),우재형(Woo Jae Hyung),김강련(Kim Kang Ryune),김순옥(Kim Soon Ok) 대한체질인류학회 1995 해부·생물인류학 (Anat Biol Anthropol) Vol.8 No.1

양생 8일 부터 15일된 마우스 배자에서 TGF α 와 EGF의 분포 차이를 관찰하고자 실험을 시행하였다. 파라핀 포매에 의하여 만든 슬라이드를 TGF α 와 EGF 에 대한 항체를 사용하여 면역조직화학적 연구를 실시하였다. TGF α 의 엽색반용은 발생 제9일 마우스 배자에서 내배엽 중배엽 외배엽 기원의 여러 기관 즉 심장 눈술잔 머리중간엽 신경관 원시장관에서 관찰되었으며 발생 10일에서 15일된 배자에서는 그 염색 저도가 더 강하게 나타났다. EGF의 염색반응은 발생 제9일 마우스 배자에서는 중배엽 기원의 심장과 외배엽 기원의 원시장관에서 나타났으나 발생 10일에서 15일된 배자에서는 염색반응의 정도가 낮았다. 심장 발생에 있어 TGF α.는 EGF 보다 더 강력히 관계하였다. 폐 발생에 있어 TGF α의 염색반응은 기관지와 페싹 둘 다 에서 관찰된 반면 EGF는 단지 기관지에서만 염색반응이 나다났다. 신경계 발생에 있어 TGF α는 EGF 보다 더욱 광범위하고 강하게 나타났다. 골격계 발생에서 TGF α는 EGF 에 비하여 더욱 조기에 그리고 더 강하게 나다났다. 이런 결과는 TGF α와 EGF 가 마우스 발생 조절인자로 작용하며 특히 성장 신경계 중간엽 골격계 발생에서 TGF α가 EGF 보다 강하게 작용함을 추적할 수 있었다.

Impaired Functions of Lymphocytes on Nitric Oxide Production in Endotoxin-Tolerant Mice

Young-Gi Gil(길영기),Mi-Kyung Kang(강미경) 한국생명과학회 2008 생명과학회지 Vol.18 No.11

본 연구에서는 내독소내성 상태에 있는 마우스 세포의 싸이토카인 생성능을 측정하기 위하여 대식세포-림프구 공동배양계를 이용한 nitric oxide (NO) 생성을 조사하였다. 마우스 복강 대식세포에 lipopolysaccharide (LPS)와 interferon-g (IFN-g)를 처리시 NO 생성이 증가되었으며, tumor necrosis factor-a (TNF-a) 또한 LPS처럼 NO 합성을 자극하는 것을 관찰할 수 있었다. 한편, 대식세포를 비장세포와 공동배양시, LPS 단독처리만으로도 NO 합성이 증가되었다. 반면, 2.5 ㎎/㎏ LPS로 전처리하고 치사량의 LPS를 2차 투여한 마우스의 경우, 마우스의 치사 및 혈중 TNF-a와 IFN-g가 증가되지 않았다. 또한 LPS-내성 마우스로부터 분리한 대식세포를 정상 비장세포와 공동배양시 LPS에 의한 NO생성이 일어나지 않았으며, 외래 TNF-a에 의한 NO 생성도 일어나지 않았다. 이와 아울러 정상 대식세포와 LPS 내성 마우스로부터 분리한 비장세포를 공동배양하였을 때, LPS 자극으로 인한 NO 생성이 일어나지 않았으며, 이러한 억제현상은 외래 IFN-g 또는 IFN-g 생성을 촉진시키는 concanavalin A (ConA)에 의해서 다시 역전되었다. 이러한 결과는 대식세포 뿐만 아니라 림프구도 LPS 내성에 관여하는 것을 보여준다고 사료된다. INF-g는 TNF-a 발현을 증가시키기 때문에, 림프구의 INF-g 합성 감소는 LPS에 내성을 보이는 대식세포의 TNF-a 합성 저하와 상호작용으로 내독소내성 상태를 유도하며 과도한 염증반응을 억제하는 것으로 사료된다. 따라서 LPS 내독소내성은 중환자의 심각한 패혈증에 대한 예방법으로 활용될 수 있을 것으로 기대된다. In this study, nitric oxide (NO) production in a macrophage-lymphocyte co-culture system was used to assess the cytokine producing capability of cells during endotoxin tolerance in mice. Incubation of peritoneal macrophages with interferon-γ (IFN-γ) in the presence of lipopolysaccharide (LPS) augmented NO synthesis. Exogenous tumor necrosis factor-α (TNF-α) could also replace LPS for the stimulation of NO production. Macrophages co-cultured with splenic lymphocytes showed augmented NO synthesis by LPS alone. However, pretreatment of mice with 2.5 ㎎/㎏ LPS completely prevented the lethality and the increase of blood TNF-α and IFN-γ after the second challenge with a lethal dose of LPS. In addition, when macrophages prepared from LPS-tolerant mice were co-cultured with normal splenocytes, LPS also could not induce the production of NO, even in the presence of exogenous TNF-α. Moreover, when normal macrophages were co-cultured with splenocytes obtained from LPS-tolerant mice, stimulation with LPS could not evoke the NO production enhancement. However, this down-regulation was able to reverse by exogenous IFN-γ or concanavalin A (ConA), a stimulator of IFN-γ production. Our results indicate that not only macrophages but also lymphocytes contribute to LPS tolerance. As INF-γ can enhance the expression of TNF-α, the decrease of INF-γ synthesis from lymphocytes may orchestrate with the decrease of TNF-α synthesis from LPS-tolerant macrophages for the production of tolerant state and the prevention of excessive inflammation. Therefore, LPS tolerance may be exploited for prophylaxis of severe sepsis in patients at risk.

Changes of Glycosylation Pattern in Aging Rat Kidneys as Revealed with Lectin Conjugates

Young Gi Gil(길영기),Keun Ha Kim(김근하),Byung Tae Choi(최병태) 한국생명과학회 2007 생명과학회지 Vol.17 No.10

성장과정 중 흰쥐 신장에서 나타나는 복합당질의 변화를 알아보기 위해 18일 태자부터 성체에 이르는 신장을 형태적 관찰과 더불어 9 가지 lectin (SBA, DBA, PNA, BSL-1, RCA-1, sWGA, UEA-1, LCA 및 Con A)으로 검색하였다. 신장 발생단계에서 성숙한 신원구조와 함께 미성숙한 구조물 즉 소포와 요관아 등이 생후 14일에 이르기까지 관찰되었으며 생후 21일에 이르러 성체와 유사한 구조적 특성을 보였다. 복합당질의 변화를 보면 사구체에서 RCA-1, LCA 및 Con A에 반응을 나타내며 RCA-1 및 LCA는 태자와 신생쥐에서 일시적으로 증가하다 성체에서 관찰되지 않으나 Con A는 성장과 더불어 증가하였다. 근위곡요세관은 UEA-1을 제외한 모든 lectin에 반응하며 DBA, SBA, PNA, BSL-1, RCA-1 및 Con A반응이 성장과 더불어 증가하며 특히 RCA-1과 BSL-1반응이 현저하였다. 이에 비해 sWGA와 LCA반응은 성장과정에 일시적으로 증가하며 성체에 이를수록 감소하였다. 원위곡요세관도 근위곡요세관 유사하게 DBA, SBA, PNA, BSL-1 및 RCA-1반응은 성숙과 함께 증가하나 LCA반응은 성숙과정에 일시적으로 증가하며 성체에서 감소하였다. 집합관에서는 DBA, SBA, PNA, sWGA반응이 성숙과 동시에 증가하나 BSL-1, RCA-1, LCA반응은 미성숙관에서 일시적으로 증가하였다. 이상의 반응으로 보아 신장발생과정에서 형태적 기능적 성숙과 함께 다양한 복합당질의 변화를 보이는데 대체로 성숙에 따라 반응이 증가하는 복합당질군과 미성숙기에 일시적으로 증가하며 성체에서 감소하는 복합당질군으로 대별할 수 있었다. 이러한 출생전후 복합당질의 변화는 신장의 기능적 성숙과정과 연관성을 가지며 발생과정에서 현저한 변화를 나타내는 복합당질은 정상 신장발생에 대한 표지인자로 유용할 것이다. The changes of glycoconjuagates (GCs) in rat kidney due to maturation were studied from samples of fetal and postnatal kidneys by lectin histochemistry. Rat kidneys of perinatal ages and adults were fixed in 4% paraformaldehyde and were stained with nine kinds of biotinylated lectins. The immature forms of the renal developmental stage such as vesicles and ureteric bud were observed in the cortex as late as day 14 of postnatal life, but the histological appearance of the weaning kidney was similar to that observed in adults. As for histochemical properties of GCs in the glomeruli, Con A affinity tended to increase with aging, but both RCA-1 and LCA affinities showed a transient increase in immature glomeruli of neonatal rats. DBA affinity with SBA, PNA, BSL-1 and RCA-1, additional Con A one in proximal tubule, were increased in both proximal and distal tubules according to maturation. In contrast to this, transient intensive LCA affinity were demonstrated in immature proximal and distal tubule of neonatal rats. In the collecting tubules, DBA, SBA, PNA and sWGA affinities tended to increase according to maturation, but transient increase for BSL-1, RCA-1 and LCA affinities were detected in neonatal rats. The present results suggest that the mature glycosylation pattern of the kidney undergoes profound changes during maturation and is probably associated with functional maturation of the kidney.