측두하악관절에서의 골관절염 유도 동물모델 비교연구

유선녕,이영철,박혜련,유미현,전혜미,김광연,김상헌,옥수민,고명연,안용우,안순철,정성희,Yu, Sun-Nyoung,Yi, Young-Chul,Park, Hae-Ryoun,Ryu, Mi-Heon,Jeon, Hye-Mi,Kim, Kwang-Youn,Kim, Sang-Hun,Ok, Soo-Min,Ko, Myung-Yun,Ahn, Yong-Woo,Ahn, Soon- 대한안면통증구강내과학회 2011 Journal of Oral Medicine and Pain Vol.36 No.4

Osteoarthritis in patients with temporomandibular disorders(TMDs) induces pain, limitation of mouth opening, occlusal problems, and most commonly affects their life quality. Control method and progressive process of osteoarthritis are being extensively researched. The researchers focus on histologic changes, synovial changes, muscular and ligamental changes and observed reaction to pain. Therefore most of them developed the animal model for osteoarthritis in TMD patients. In this study, we applied several methods which induces osteoarthritis of temporomandibular joint(TMJ) in rats or mice. For locally induce osteoarthritis in TMJ, Monosodium iodoacetate(MIA) or interleukin-$1{\alpha}$(IL-$1{\alpha}$) were injected into TMJ joint space for 5 or 3 weeks. Other groups are chosen for osteoarthritis under systemic control including hormonal changes and aging. To observe cellular change, increased collagen, degenerative bony destruction and distribution of proteoglycans (PGs), safranin-O staining and Masson's trichrome staining were used.

Effect of Trans-unsaturated Fatty Acid on Serum Lipid Levels in Mice

Sun Nyoung(유선녕),Jeong Bin Ahn(안정빈),EunYoung Park(박은영),Sun Jung Lee(이선정),Min Gi Tak(탁민지),Kwang Youn Kim(김광연),Sang Hun Kim(김상헌),Ki Dae Kim(김기대),Soon Cheol Ahn(안순철) 한국생명과학회 2012 생명과학회지 Vol.22 No.8

본 연구에서는 각기 다른 형태의 지방산이 ICR mice의 혈중 지질 농도에 미치는 영향을 평가하고자 하였다. 이를 위하여 8주령 수컷 ICR mice를 일반 식이섭취군(C), 10%의 트랜스 불포화 지방산 섭취군(TFA-1), 30% 트랜스 불포화 지방산 섭취군(TFA-2), 50% 트랜스 불포화 지방산 섭취군(TFA-3), 50% 포화 지방산 섭취군(SFA), 불포화 지방산 섭취군(USFA) 으로 나누어 식이 하였다. 혈중 총 콜레스테롤의 수치는 TFA-3 군과 SFA 군의 지질함량이 다른 군에 비하여 높았으며, 중성지방지수 역시 높게 나타났다. 총 콜레스테롤과 중성지방수치를 이용하여 나타낸 LDL 콜레스테롤의 경우에도 50%의 트랜스 지방산을 섭취한 군에서 포화 지방산을 섭취한 군과 유사한 결과가 나타났다. 이에 반해, 10%, 30%의 트랜스 지방산을 섭취한 군에서는 일반식이 섭취군과 비슷한 결과가 나타났다. 이는 많은 양의 트랜스 불포화지방산을 짧은 기간 동안 섭취하더라도 포화지방산을 섭취한 것과 유사한 효과를 나타낸다는 것을 의미한다. The purpose of this study was to investigate the effects of trans-unsaturated fatty acid (TFA), saturated fatty acid (SFA) and general unsaturated fatty acid (USFA) on serum lipid levels in ICR mice. Male ICR 8-week-old mice were divided into six groups; the control group (C) fed with normal diet, the TFA-1 group fed with 10% trans-unsaturated fatty acid, the TFA-2 group fed with 30% trans-unsaturated fatty acid, the TFA-3 group fed with 50% trans-unsaturated fatty acid, the SFA group fed with 50% saturated fatty acid, and USFA group fed with 50% general unsaturated fatty acid. The serum total cholesterol of TFA-3 and SFA was higher than those of other fat groups and C. The serum triglyceride (TG) of TFA-3 and SFA showed the highest levels among all of diet groups. Also the serum HDL cholesterol levels of TFA-3 showed the lowest. LDL cholesterol and atherogenic indices (AI) were remarkedly increased in TFA-3 and SFA, as compared with other fat fed groups and C. Taken together with results, the TFA-3 group showed serum lipid levels similar to the SFA and different from the USFA. These results suggest that intake of high level of trans-unsaturated fatty acid increased serum triglyceride, LDL cholesterol and atherogenic indices, which may affect risk on serum lipid level for lipid metabolism syndrome.

Euglena gracilis 추출물의 면역조절 및 생리활성 분석

유선녕(Sun Nyoung Yu),박보배(Bo Bae Park),김지원(Ji Won Kim),황유림(You Lim Hwang),김상헌(Sang Hun Kim),김선아(Sunah Kim),이태호(Taeho Lee),안순철(Soon Cheol Ahn) 한국생명과학회 2021 생명과학회지 Vol.31 No.2

본 연구에서는 다양한 생리활성을 나타내는 compound를 함유하고 있는 것으로 알려진 Euglena gracilis를 hot water로 추출하고(HWE), 그 잔존물을 methanol로 추출(HWME)한 후, murine macrophage RAW 264.7 cell에 처리하여 면역활성을 측정하였다. Murine macrophage RAW 264.7 cell에서 HWE 처리로 IL-1β와 TNF-α가 농도의존적으로 증가되었고, lipopolysaccharide에 의해 유도되는 IL-6와 TNF-α 생성이 HWME 처리에 의해 유의적으로 억제되는 것을 확인하였다. 또한 α-glucosidase, protein tyrosine phosphatase (PTP1B), tyrosinase, xanthine oxidase(XO), angiotensin converting enzyme (ACE) 등에 대한 저해활성을 조사하였다. 그 결과, E. gracilis HWE 추출물에서는 α-glucosidase, tyrosinase, ACE에서 약한 억제 활성을 보였으나, HWME 추출물에서는 PTP1B와 XO에서 유의적인 억제활성을 나타냈다. 따라서 본 연구를 통하여 E. gracilis 추출물의 면역조절 활성 뿐 만 아니라 당뇨와 심혈관 질환에 대한 유의적인 억제활성을 통해 다양한 건강기능성 식품의 소재로 활용될 수 있을 것으로 사료된다. Euglena gracilis is a microalga of great biotechnological interest that can create high levels of bioactive compounds, such as tocopherol, paramylon, and folic acid. The objective of this study was to investigate the biological activities of extracts from E. gracilis, especially those focused on immunological activity. E. gracilis biomass was extracted with hot water (HWE) and the remaining pellet was continuously extracted with methanol (HWME). First, we examined the effect of two extracts from E. gracilis on the production of nitric oxide (NO) and the expression of pro-inflammation cytokines, including IL-1β, IL-6, and TNF-α in murine macrophage RAW 264.7 cells. HWE treatment dose-dependently increased the production of IL-1β and TNF-α. On the other hand, treatment with HWME significantly decreased the generation of NO and pro-inflammatory cytokines (IL-6 and TNF-α) in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated macrophage cells. In addition, other biological activities of the extracts were further analyzed: α-glucosidase inhibition, protein tyrosine phosphatase (PTP1B) inhibition, tyrosinase inhibition, xanthine oxidase (XO) inhibition, and angiotensin-converting enzyme (ACE) inhibition. Analysis of these biological activities showed that HWE has more inhibitory effects than HWME against α-glucosidase, tyrosinase, and XO agents. However, the inhibition of PTP1B and ACE with HWME were higher than with HWE. Taken together, the results suggested that E. gracilis possesses various biological activities-especially immunological capabilities-through regulation of cytokine production. Therefore, E. gracilis extract may be potentially useful for food material with immune-regulating effects.

A PCR Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE) Analysis of Intestinal Microbiota in Gastric Cancer Patients Taking Anticancer Agents

Sun Nyoung Yu(유선녕),Soon Cheol Ahn(안순철) 한국생명과학회 2017 생명과학회지 Vol.27 No.11

인체의 장내에 존재하는 장내 미생물은 서로 공생 또는 길항 관계를 유지하며 우리 몸의 면역 방어 기전에 중요한 요소로 작용한다. 본 연구는 항암제가 위암 환자의 장내 미생물 생태계에 미치는 영향을 조사 하였다. 항암치료를 받는 환자의 분변에서 genomic DNA를 추출하고, 16S rDNA 유전자에 대한 denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE)를 수행하였다. 분석된 균주는 개체간의 차이가 있었으나, 대부분 사람의 장내에 살고 있는 normal flora로 동정되었다. 모든 분변에 존재하는 5 개 밴드의 서열 분석 결과에 의하면 Faecalibacterium prausnitzii, Morganella morganii 및 Uncultured bacterium sp.가 나타났고, 항암제 처리 후 Sphingomonas paucimobilis, Lactobacillus gasseri, Parabacteroides distasonis 및 Enterobacter sp.가 증가하였다. 이 연구에서 probiotic으로 알려진 Bifidobacterium과 Lactobacillus 를 특이적 PCR primer를 이용하여 동정한 결과, 항암제 투여로 인해 Bifidobacterium과 Lactobacillus의 개체군이 현저하게 줄어들어 diarrhea와 같은 부작용의 원인을 예상하게 하며, 장내 생태계의 주요 박테리아 집단에도 중요한 영향을 미치는 것을 알 수 있었다. 이러한 결과는 항암제 투여와 같이 시간의 흐름에 따른 균총의 변화를 시각적으로 모니터링하기 위하여 PCR-DGGE 분석법이 유용하다는 것을 나타낸다. Intestinal microbiota is an important factor in the development of immune defense mechanisms in the human body. Treatments with anticancer agents, such as 5-Fluorouracil, Cisplatin, and Oxaliplatin, significantly change the temporal stability and environment of intestinal bacterial flora. The anticancer treatment chemotherapy often depresses the immune system and induces side effects, such as diarrhea. This study investigated the effects anticancer agents have on the intestinal microbial ecosystems of patients with gastric cancer. An exploration of the diversity and temporal stability of the dominant bacteria was undertaken using a DGGE with the 16S rDNA gene. Researchers collected stool samples from patients zero, two and eight weeks after the patients started chemotherapy. After the treatment with anticancer agents, the bacteria strains Sphingomonas paucimobilis, Lactobacillus gasseri, Parabacteroides distasonis and Enterobacter sp. increased. This study focused on the survival of the beneficial microorganisms Bifidobacterium and Lactobacillus in the intestines of cancer patients. The administration of antigastric cancer agents significantly decreased Lactobacillus and Bifidobacterium populations and only moderately affected the main bacterial groups in the patients" intestinal ecosystems. The results showed the versatility of a cultivation independent–PCR DGGE analysis regarding the visual monitoring of ecological diversity and anticancer agent-induced changes in patients" complex intestinal microbial ecosystems.

염촉매 전기분해 공기살균기의 효능 평가

유선녕(Sun Nyoung Yu),전호연(Ho-Yeon Jeon),김부경(Bu Kyung Kim),김애리(Ae-Li Kim),정경일(Kyung Il Jung),전계록(Gye Rok Jeon),안순철(Soon Cheol Ahn) 한국생명과학회 2024 생명과학회지 Vol.34 No.7

최근 현대인들의 다중이용시설 사용 빈도가 증가하면서 실내 공기 질, 특히 실내공기 오염원인 공기매개 전염성 세균 및 바이러스 불안에 대한 관심이 높아져 다양한 형태의 공기청정기와 공기살균기의 보급이 확산되고 있다. 따라서 공기 내 미생물을 살균할 수 있는 기술에 대한 연구 필요성이 대두되고 있다. 본 연구에서는 염촉매 전기분해 공기살균기를 개발하여 공기살균기의 항균활성과 인간 세포주(HaCaT, BEAS-2B, THP-1)에 대한 세포독성을 통한 안전성을 조사하였다. 공기살균기에서 분무되는 증기를 각각 1, 3시간 동안 분무한 결과, Staphylococcus aureus는 각각 24.01, 57.34%, Bacillus subtilis는 10.89, 57.76%, Escherichia coli는 30.79, 36.59%, Pseudomonas aeruginosa는 34.80, 49.51%, Salmonella typhimurium는 39.40, 73.98%, 진균인 Candida albicans는 36.59, 53.05%의 높은 항균활성을 보여 염촉매 전기분해 공기살균기의 살균효능이 모든 종류의 시험균주에서 시간 의존적인 항균활성을 보였다. 공기살균기의 분무액을 0.1, 0.3, 1.0%의 농도로 처리하고 세포 생존율을 측정한 결과, 1.0%의 농도에서도 BEAS-2B 세포는 93.88%, HaCaT 세포는 97.01%, THP-1 세포는 86.56%로 관찰되어 인체 정상 세포주에서는 유의적인 세포독성을 나타내지 않았다. 또한 분무액을 1.0%의 농도로 처리하고 현미경으로 관찰한 세포주의 형태학적 변화, PCR을 이용한 세포사멸관련 유전자(Bcl-2, Bax)의 발현 분석, FACS를 이용한 세포 내 ROS의 생성 변화 등에서 분무액을 처리하지 않은 대조군과 비교하였을 때 유의적인 변화가 없었다. 따라서 시험균주에 대한 항균활성, 3가지의 인간 세포주에 대한 세포독성, 세포의 형태적 변화, 유독한 반응성 산소(ROS) 생성, 세포사멸관련 유전자의 발현 등에서 유의미한 변화가 확인되지 않아 공기살균기의 살균 효능과 사용상 안전성을 확인할 수 있었다. 최종적으로 다중이용시설에서의 공기살균기의 효능을 조사하기 위하여 밀폐된 실내에서 공기살균기를 20시간 동안 가동한 후, 공기 중의 낙하균을 포집하여 배양한 결과, 총세균은 89.4%, 대장균과 진균은 100.0% 제거되는 것을 확인하였다. 결론적으로 개발된 염촉매 전기분해 공기살균기는 인체에 대한 독성이 없으면서 실내 오염원인 미생물들을 효과적으로 제거할 수 있음을 확인하였다. Recently, there has been increasing interest in enhancing the indoor air quality, particularly in response to the growing utilization of public facilities. The focus of this study was on assessing the efficacy and safety of an air sterilizer equipped with electrolytic salt catalysts. To that end, we evaluated the antimicrobial activity of the vapor spraying from the air sterilizer and its cytotoxicity in condensed form on human cell lines (HaCaT, BEAS-2B, and THP-1). Against the test organisms, which comprised five bacterial strains (Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium) and one fungal strain (Candida albicans), the air sterilizer exhibited relatively high antimicrobial activities ranging from 10.89 to 73.98% following 1 and 3 hr of vapor spraying, which were notably time-dependent. Importantly, cytotoxicity assessments on human cells indicated no significant harmful effect even at a 1.0% concentration. Comprehensive safety evaluations included morphological observations, gene expression (Bcl-2, Bax) tests, and FACS analysis of intracellular ROS levels. Consistent with previous cytotoxicity findings, these estimates demonstrated no significant changes, highlighting the air sterilizers safety and antimicrobial activities. In a simulated 20-hr operation within an indoor environment, the air sterilizer not only showed an 89.4% removal of total bacteria but also a 100.0% removal of Escherichia sp. and fungi. This research outlines the potential of the developed electrolytic salt catalyst air sterilizer to effectively remove indoor microbial pollutants without compromising human safety, underscoring the solution that it offers for improving indoor air quality.

Aspergillus niger로 발효한 감귤과피 추출물의 항염효과

이선이(Sun Yi Lee),현주미(Ju Mi Hyun),김상숙(Sang Suk Kim),박석만(Suk Man Park),박경진(Kyung Jin Park),최영훈(Young Hun Choi),김상훈(Sang Hun Kim),유선녕(Sun Nyoung Yu),안순철(Soon Cheol Ahn) 한국생명과학회 2014 생명과학회지 Vol.24 No.7

본 연구에서는 미생물을 이용하여 감귤과피 발효를 실시하고, 발효 추출물의 생리활성 변화를 확인하였다. 분말화시킨 온주밀감 과피에 Aspergillus niger를 첨가하고 5일간 진탕 배양하고 감귤발효물을 ethyl acetate로 추출하였다. 대조구는 발효 전 감귤과피 추출물을 사용하였으며, 각 추출물의 성분변화는 HPLC를 이용하여 분석하였다. 그 결과, neohesperidin 함량이 현저히 증가하면서, 발효에 의해 compound 1, 2가 생합성되었다. 감귤발효 추출물의 항염 활성은 LPS로 염증을 유발시킨 RAW 264.7 macrophage cell에서 확인하였다. 감귤발효 추출물이 대조군에 비해 NO (Nitric oxide) 생성이 유의적으로 감소하였으며, 염증반응과 관련된 단백질 iNOS와 COX-2 의 발현도 감귤발효 추출물에서 유의적으로 감소하였다. 감귤발효 추출물은 pro-inflammatory cytokine인 TNF-α와 IL-6 생성을 억제하는 효과도 나타내었다. 본 연구 결과를 통하여 감귤 과피의 flavonoid 배당체 화합물들을 aglycone 형태로 전환함과 동시에 유효 생리활성 성분의 효능을 증대시켜 부산물로서 발생되는 감귤의 새로운 활용 방안으로 기대된다. Citrus, yield of which is the highest among fruits produced in Korea, is extensively consumed for processed food items. The amount of by-products of citrus produced from the processing within a short period after the harvest is tremendous. These by-products are mostly dumped into land or neglected because of cost involved in processing them. The aim of the present study was to explore the usefulness of the by-products as a new material by examining the anti-inflammatory activity of fermented extracts of citrus peels. The peels of ‘unshu’ (Citrus unshiu) was fermented with Aspergillus niger and their extracts before or after fermentation were analyzed using HPLC. The analysis showed that neohesperidin level considerably increased and the two new compounds were synthesized after fermentation. The anti-inflammatory activity of the fermented extracts was examined on RAW 264.7 murine macrophage cells stimulated with lipopolysaccharide. Fermented unshu extracts significantly enhanced the decrease of nitric oxide (NO) production, iNOS and COX-2 expression, comparing with those of unfermented extracts. Also TNF-α and IL-6 production, both of which are pro-inflammatory cytokine, were more inhibited in fermented extracts. These results showed that the fermentation and promotion of the function of the by-products of citrus peels will help find a new application.

Screening and Purification of an Anti-Prostate Cancer Compound, Deoxypodophyllotoxin, from Anthriscus sylvestris Hoffm

Hyo-Jin Cho(조효진),Sun-Nyoung Yu(유선녕),Kwang-Youn Kim(김광연),Jae-Hak Sohn(손재학),Hyuncheol Oh(오현철),Soon-Cheol Ahn(안순철) 한국생명과학회 2009 생명과학회지 Vol.19 No.1

전립선암은 현대 남성들에게 걸리기 쉬운 질병으로 나이가 들수록 발병의 위험이 증가하는 질환으로 현재 우리나라에서도 점점 증가하는 추세이다. 전립선암 치료법들은 치료영역이 제한적이고 재발할 가능성이 높아 근본적인 치료법으로는 사용되지는 못하므로 새로운 전립선암 치료 방법이 필요하다. 이에 본 연구에서는 100 여 가지의 한약재 methanol 추출물을 이용하여 MTT 방법으로 전립선암 세포주인 PC-3 세포에 대한 항증식 효과를 탐색하였으며 그 결과, A. sylvestris가 가장 강한 항증식 활성을 보였다. A. sylvestris의 methanol 추출물로부터 저해물질을 분리하기 위하여 100% methanol에서 2-3일 추출하고 난 뒤, ethyl acetate로 추출하고 silica gel, reverse phase-18, Sephadex LH-20 등의 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 분리하였다. 최종적으로 활성분획을 HPLC로 분리하고 4℃에서 methanol 용액에서 입방체 형태의 결정을 얻었으며 NMR 분광법과 이화학적 특성을 분석한 결과, deoxypodophyllotoxin으로 동정되었다. 순수 분리된 deoxypodophyllotoxin은 전립선암의 세포주 PC-3 세포에서 처리농도와 처리 시간 의존적인 항증식 효과를 보였다. The prostate cancer is the critical health problem, increasing of its related death in worldwide. Unfortunately present surgery and chemotherapeutic choices seem to be impossible in curing or controlling prostate cancer, because metastasis occasionally advances even after these potentially curative therapies. Therefore, there is immediate need to alternative chemoprevention and chemotherapeutic agents. Over one hundred species of dried medicinal herbs were tested for proliferation inhibitory effects on prostate cancer cell line, PC-3. One of them, Anthriscus sylvestris was selected because of potent anti-proliferation effect. The dried root of A. sylvestris was extracted with 100% methanol for 2-3 days and its extract was fractionated by using ethyl acetate. And ethyl acetate layer was subjected to column chromatographies on silica gel, reverse phase-18 (RP-18) and Sephadex LH-20, in turn. Finally, the pure compound was obtained by crystallization in methanol at 4℃ for overnight and identified as deoxypodophyllotoxin by NMR spectorscopic and physico-chemical analyses. In addition, it was confirmed that deoxypodophyllotoxin clearly inhibits the proliferation of PC-3 cells in a doseand time-dependent manner.

사료 첨가제에 의한 대하의 혈액학적 특성

김영진,이선이,조효진,유선녕,김광연,최원철,허문수,안순철,Kim, Yeong-Jin,Lee, Sun-Yi,Cho, Hyo-Jin,You, Sun-Nyoung,Kim, Kwang-Youn,Choi, Won-Chul,Heo, Moon-Soo,Ahn, Soon-Cheol 한국생명과학회 2006 생명과학회지 Vol.16 No.7

Shrimp has efficient non-specific defense mechanisms based on activities of the hemocytes against pathogens. Up to now, it has been known that one of the non-specific immune reactions is related to mutual association among types of hemocyte, granular cell, semi-granular cell, and hyaline cell. In this study, we tried to know the effectiveness of feed-additives such as 5-aminolevulinic acid(ALA), chitosan, and hot-water extract of herb on immunity of shrimp (Penaeus chinensis) by hemocytic observation and SDS-PAGE analysis. Finally, we suggest a principle of the examination system for effects of various feed-additives.

견우자의 생리활성 분석과 추출물로부터 항암 활성물질의 분리

최현덕(Hyeun Deok Choi),유선녕(Sun Nyoung Yu),박슬기(Sul-Gi Park),김영욱(Young Wook Kim),남효원(Hyo Won Nam),안현희(Hyun Hee An),김상헌(Sang Hun Kim),김광연(Kwang-Youn Kim),안순철(Soon Cheol Ahn) 한국생명과학회 2017 생명과학회지 Vol.27 No.2

견우자는 한의학에서 사하 작용 및 이뇨 작용 등의 치료 목적으로 사용되어 왔다. 본 연구에서는 견우자를 methanol로 추출하고(PNM), 이를 기본으로 ethyl acetate 분획물(PNE), butanol 분획물(PNB), water 분획물(PNW)로 나누었으며 각 분획물을 이용하여 mushroom tyrosinase 저해활성, pancreatic lipase 저해활성, DPPH free radical 소거활성 및 암세포주의 증식 저해활성 등을 조사하였다. 특히, 전립선암 세포주 PC-3 세포에서 강력한 세포 증식 저해활성을 보였으며, 용매 분획물 중, butanol 분획에서 가장 높은 암세포의 증식 저해활성을 보였다. 따라서 견우자의 methanol 추출물을 Diaion HP-20 column chromatography, reverse phase column chromatography, Sephadex LH-20 column chromatography를 순차적으로 실시하여 최종적으로 저해활성이 가장 높은 compound PN을 얻었으며 HPLC를 통해 그 순도를 확인하였다. Compound PN을 이용하여 cell cycle arrest과 annexin V/PI를 측정한 결과, 세포의 sub-G1기를 축적되면서 apoptosis가 유발되어 전립선암 세포주 PC-3 세포의 세포사멸이 유도되는 것을 확인하였다. 따라서 본 연구를 통하여 견우자에 대한 항산화 활성, 미백 활성 등의 효과 뿐 만 아니라 항암 활성에도 활용할 수 있을 것으로 사료된다. This study aimed to evaluate several biological activities of Pharbitis nil and to isolate an anticancer agent from its methanol extract. Pharbitis nil seeds were extracted with methanol (PNM). Then, PNM was fractionated into solvent layers such as ethyl acetate fraction (PNE), butanol fraction (PNB), and water fraction (PNW). The biological activities of the fractions were analyzed for tyrosinase inhibition, lipase inhibition, DPPH-free radical scavenging, and cell growth inhibition. PNM showed strong growth inhibition of prostate cancer PC-3 cells. PNM was subjected to Diaion HP-20 and eluted stepwise with 50%, 80%, and 100% methanol. Then, for activity-guided fraction, each fraction was analyzed for growth inhibition of prostate cancer PC-3 cells by using an MTT assay. Because the 100% fraction showed significantly strong inhibitory activity, the fraction was further separated in the reverse phase C18, which was eluted with 80% and 90% methanol. The 90% fraction was further subjected to Sephadex LH-20 using a mobile solvent of 100% methanol. Finally, the compound PN was partially purified for HPLC analysis. PN showed cell growth inhibitory activity and induced the apoptosis and cell cycle arrest of prostate cancer PC-3 cells, as measured by flow cytometry. The results together suggest that Pharbitis nil possesses various biological activities, especially the inhibitory activity for the proliferation of prostate cancer PC-3 cells, suggesting the possibility of its use as an anticancer agent.

Production and Characterization of Alkaline Protease of Micrococcus sp. PS-1 Isolated from Seawater

Young-Rang Jin(진영랑),Sun-Nyoung Yu(유선녕),Kwang-Youn Kim(김광연),Sang-Hun Kim(김상헌),Seul-Ki Park(박슬기),Hyeun-Kyeung Kim(김현경),Yong-Seok Lee(이용석),Yong-Lark Choi(최용락),Jae Hoon Ji(지재훈),Soon-Cheol Ahn(안순철) 한국생명과학회 2013 생명과학회지 Vol.23 No.2

본 연구는 부산 인근의 해수욕장에서 얻은 해수에서 protease를 생산하는 균주를 분리하여 동정하고 균주의 배양학적인 특성과 protease의 효소학적 특성을 확인하였다. 해수에서 분리한 protease를 생산하는 미생물은 16S rDNA sequencing을 통해 Micrococcus sp. PS-1으로 동정하였다. Protease 생산의 최적조건은 2% skim milk와 1% NaCl이 포함된 pH 7.0의 LB배지에 48시간 배양이었다. 효소의 부분정제를 위해 ultrafiltration 과 acetone 침전법을 사용하였고, zymography를 통해 분자량이 35.0 kDa과 37.5 kDa인 protease를 확인하였다. 또한 효소의 최적 활성은 pH 9.0와 37℃에서 나타났고, 효소는 pH 8.0에서 11.0까지, 25℃에서 37℃까지 80% 이상의 효소활성이 유지되어 안정한 것으로 확인되었으며 PMSF, EDTA 처리시 protease가 저해되는 것을 통해 alkaline metallo-serine protease로 확인되었다. The purpose of this research was to investigate the production and characterization of alkaline protease from Micrococcus sp. PS-1 newly isolated from seawater. Micrococcus sp. PS-1 was grown in Luria- Bertani (LB) medium. Its optimal temperature and pH for growth were 30°C and 7.0, respectively. The effect of nitrogen sources was investigated on optimal enzyme production. A high level of alkaline protease production occurred in LB broth containing 2% skimmed milk. The protease was purified in a 3-step procedure involving ultrafiltration, acetone precipitation, and dialysis. The procedure yielded a 16.43-purification fold, with a yield of 54.25%. SDS-PAGE showed that the enzyme had molecular weights of 35.0 and 37.5 kDa. Its maximum protease activity was exhibited at pH 9.0 and 37°C, and its activity was stable at pH 8.0?11.0 and 25?37°C. The protease activity was strongly inhibited by PMSF, EDTA, and EGTA. Taken together, the results demonstrate that the protease enzyme from Micrococcus sp. PS-1 probably belongs to a subclass of alkaline metallo-serine proteases.