포도와 오이즙액을 이용한 동충하초(Paecilomyces japonica) 균사체 배양액의 피부 주름개선효과

이영훈,최우식,박기훈,최영주,갈상완,Lee Young-Hoon,Choi U-Sic,Park Ki-Hoon,Choi Young-Ju,Gal Sang-Wan 한국생명과학회 2006 생명과학회지 Vol.16 No.3

포도와 오이즙액에 동충하초 균사체 배양액을 화장품으로서의 이용가능성을 조사하였다. 콜라겐 생성촉진 효과에서는 사람의 섬유아세포에서 시험물질 $0.1{\sim}0.5%$ 농도에서 콜라겐 생합성을 증가시키는 것을 관찰하여 동충하초 균사체 배양액은 적절한 농도에서 세포내 콜라겐 생성을 증가시키는 것으로 판단하였다. 포도와 오이즙액에 동충하초 균사체 배양액의 항산화효과에서는 항산화제인 Vit. C와 함께 SOD 활성능을 측정한 결과 동충하초 균사체 배양액이 0.01% 부터 1.0% 범위에서 농도의존적으로 SOD 활성을 증가시켜 0.1% 에서는 약 50% 정도 1.0% 에서는 90% 정도의 슈퍼옥사이드 라디칼을 소거시키는 것으로 나타났다. 항 혈액응고제로 알려진 퀘르세틴의 함량증가에서는 최초 포도와 오이즙액보다 배양 후의 농도가 약 15배 이상 증가하여 피부의 항 혈액응고에도 효과가 있을 것으로 판단되며, 이를 인체에 대한 자극시험을 실시한 결과 30명의 피검자 모두에게서 피부자극이 전혀 일어나지 않음을 확인하여 인체에 무해한 것으로 판단되었다. 따라서 포도와 오이즙액에 동충하초 균사체 배양액은 피부에 대한 부작용이 전혀 없으며 주름개선효과 및 항산화 활성을 갖는 기능성 화장재료로서의 이용 가치가 매우 높을 것으로 사료된다. The possibility of usage as cosmetic resource of the mycelial culture broth of P. japonica in the mixture of cucumber and grape extracts was investigated. In the effect of collagen synthesis promotion in human fibroblast cells, the culture broth of P. japonica of 0.1, 0.5 and 1.0% concentration increased the amount of collagen synthesis than that of control cells. The culture broth increased the SOD activity in the concentration dependant manner of 0.01% to 1.0% in the antioxydation activity test. About 90% of superoxide radical was eliminated by 0.5% concentration of the culture supernatant in the antioxydation test. Anticoagulant quercetin in the course of mycelial growth in the mixture of cucumber and grape extract was accumulated to 15 folds than that of pre-culture. In the skin safety test of the culture broth, there is no any skin damage signal in the tested 30 people. Taken together, we concluded that the culture broth of P. japonica in the mixture of grape and cucumber extracts can be used as a cosmetic resource.

Bacillus subtilis BB-1으로부터 나토키나아제 유전자 크로닝 및 대량발현

이영훈,이성호,박기훈,최영주,정영기,갈상완,Lee Young-Hoon,Lee Sung-Ho,Park Ki-Hoon,Choi Young-Ju,Jeong Yong-Kee,Gal Sang-Wan 한국생명과학회 2006 생명과학회지 Vol.16 No.2

흑두청국으로부터 분리된 혈전용해력이 우수한 Bacillus subtilis BB-1(KFCC 11344P)으로부터 혈전용해효소 유전자를 PCR법에 의해 크로닝하였고 이를 BCF-1으로 명명하였다. BCF-1의 DNA 염기서열결정 결과 1,145 bp 크기의 혈전용해 효소로, 일본의 natto로부터 분리된 nattokinase 유전자와 99%의 상동성을 보임을 확인하였다. 혈전용해효소 유전자의 발현을 위하여 Bacillus 발현계인 Bacillus-E. coli의 shuttle vector인 pEB vector에 크로닝 하고 host로서 B. subtilis 168에 형질전환시켜 대량 발현시켰다. 생산된 혈전용해효소의 최 적활성 pH와 온도는 7.0과 $35^{\circ}C$로 확인되었다, 기질에 대한 분해양상을 조사한 결과 fibrin에서만 특이적으로 강한 분해가 일어났으며, skim milk에서 아주 약한 분해능을 보였으나 blood agar, gelatin, casein에서는 전혀 분해능을 보이지 않았다. 특히 blood agar plate에서 분해능이 없는 것으로 보아 혈액 내에서의 적혈구 파괴현상과 같은 부작용에 대한 위험을 배제할 수 있을 것으로 사료된다. BCF-1에 의해 생산된 혈전용해효소는 fibrin 특이적으로 활성을 나타냄을 확인할 수 있으며, 이는 임상적이나 산업적으로 적용하였을 때 부작용에 대한 위험적인 문제는 배제될 수 있으리라 생각된다. A fibrinolytic enzyme gene was isolated from Bacillus subtilis BB-1 by PCR method. Primers for PCR cloning were designed according to pre-identified gene for fibrinolytic enzymes from B. subtilis. The primer sequences were 5'-CGG ATC CGT GAG AGG CAA AAA GGT G-3' and 5'-TGA ATT CTT AAT GTG CTG CTG CTT GTC C-3' as concensus sequences of the fibrinolytic genes of Bacillus species. The PCR product was 1,145 bp and the sequence homology was 99% with nattokinase gene isolated from Japanese natto. The cloned fibrinolytic gene was reconstructed in Bacillus-E. coli shuttle vector, pEB for bulk-production. The fibrinolytic enzyme was purified by FPLC from the cloned B. subtilis 168. The optimum pH and temperature of the enzyme were 7.0 and $35^{\circ}C$, respectively. The fibrinolytic enzyme did not show any activity toward to skim milk, gelatin, casein and blood agar plate. The enzyme specific polyclonal antibody was prepared in rabbit for further assays such as detection of the gene expression in plant cells. This means that the enzyme may be used for health-care such as thrombosis without any hamful effects in the blood vessel.

Antitumor Sterol Isolated from the Fruiting Body of Pleurotus eryngii

이영훈,박기훈,이병원,조용운,최영주,갈상완,Lee Young-Hoon,Park Ki-Hun,Lee Byong-Won,Cho Yong-Un,Choi Young-Ju,Gal Sang-Wan Korean Society of Life Science 2006 생명과학회지 Vol.16 No.2

새송이버섯으로부터 활성추적법으로 항암활성이 있는 물질인 에르고스테롤 프록사이드를 분리하였다. 이 스테롤의 구조는 분광법과 NMR법으로 확인하였으며 분자식은 $C_{28}H_{44}O_3$이었다. 폐암과 난소암에 $IC_{50}$값은 각각 $7{\mu}M$과 $14{\mu}M$이었다. DNA단편화 실험에서 이 화합물은 암세포의 chromosimal DNA 를 사닥다리모양으로 분해하였고, 세포 분열주기의 억제실험에서 G1단계를 억제함을 관찰하였다. Activity-guided fractionations led to the isolation of antitumor compound, ergosterol peroxide ($5{\alpha},\;8{\alpha}-epideoxy-24(R)-methylcholesta-6,\;22-dien-3{\beta}-ol$) from the fruiting body of Pleuratus eryngii that was cultivated artificially. This sterol structure was established by using spectroscopic methods ($^1H\;and\;^{13}C$ nuclear magnetic resonance and high resolution mass spectra). The purified compound showed a molecular formular of $C_{28}H_{44}O_3$ displaying characteristic features of epidioxy sterols. The 50% inhibitory concentrations ($IC_{50}$) of ergosterol peroxide against human lung cancer cell line (A549) and human ovarian cell line (SK-OV3) were $7{\mu}M\;and\;14{\mu}M$, respectively. In the DNA fragmentation assay, the compound showed the programmed cell death causing the chromosomal DNA fragmentation. It reveals that ergosterol peroxide arrests G1 phase of the cell division cycle.

포도와 오이즙액을 이용한 동충하초(Paecilomyces japonica) 균사체 배양액의 미백효과

이영훈,박상상,이상원,이성호,박기훈,최영주,갈상완,Lee, Young-Hoon,Park, Sang-Sang,Lee, Sang-Won,Lee, Sung-Ho,Park, Ki-Hoon,Choi, Young-Ju,Gal, Sang-Wan 한국생명과학회 2006 생명과학회지 Vol.16 No.5

포도와 오이즙액에 동충하초 균사체 배양액의 미백화장품 원료로서의 이용가능성을 조사하였다. B16BL6 mouse melanoma cell에 동충하초 균사체 배양액을 배양기간 및 농도별로 처리했을 때, 15일 동안의 배양조건과 $50\;{\mu}l/ml$ (5%)의 농도로 처리하였을 때 멜라닌 생성억제 효과가 가장 높은 것을 확인하였다. In vitro tyrosinase 활성억제효과에서는 포도와 오이즙액에 동충하초 균사체 배양액을 10% 농도로 첨가시 50%의 멜라닌 생성 억제율을 보였으며, 30% 농도에서는 100% 억제를 확인하였다. 결과적으로 포도와 오이즙액에 동충하초 균사체 배양액은 멜라닌 생성의 주 효소인 tyrosinase의 작용을 억제함으로써 미백 효과를 나타내는 것을 확인하였다. 또한 세포독성실험에서 포도, 오이즙액과 그 즙액에 동충하초 균사체 배양액을 각각의 농도로 B16BL6 mouse melanoma cell에 처리 한 결과 포도, 오이즙액의 5% 처리 시에는 50% 사멸, 9% 이상에서는 100% 세포가 사멸하는 것을 확인 할 수 있었다. 그러나 포도, 오이즙액에 동충하초 균사체를 배양한 배양액은 20% 까지 처리 시에도 세포독성이 나타나지 않는 것을 확인 하였다. 따라서 포도와 오이즙액에 동충하초 균사체를 배양한 배양액은 세포 독성이 없으며, 미백 효과가 뛰어난 것으로 미백화장품 원료로서 사용가능함을 확인하였다. This study was carried out to investigate the whitening effect of mycelial culture broth of P. japonica in the mixture of cucumber and grape extracts. In the inhibition test of melanin biosynthesis of melanoma cell, B16BL6, the culture broth of P. japonica more then $50\;{\mu}l/ml$ (5%) concentration inhibited the melanin biosynthesis of the cell entirely without cytotoxicity. More then 10 days incubation of P. japonica in the mixture was required to have the inhibition activity. In vitro inhibition test of melanin biosynthesis of the culture broth of P. japonica was investigated in the concentration dependent manner of 10% to 50%. 30% concentration of the culture broth inhibited completely tyrosinase activity. In the cytotoxicity test, cucumber and grape extract itself has a strong cytotoxicity to the melanoma cell, B16Bl6. The value of $IC_{50}$ of the cucumber and grape extracts against the melanoma cells was 5% concentration. However, the culture broth of P. japonica incubated in the cucumber and grape extracts did not show the cytotoxcity up to 20% against melanoma cell, B16BL6. Therefore, we concluded that the culture broth of P. japonica in the mixture of cucumber and grape extracts can be used as a whitening cosmetic resource.

흑두로 제조한 청국에서 분리된 Bacillus subtillus BB-1으로 부터 혈전용해효소 유전자 크로닝 및 특성규명

이영훈,이성호,전주미,김홍출,조용운,박기훈,최영주,갈상완,Lee Young-Hoon,Lee Sung-Ho,Jeon Ju-Mi,Kim Hong-Chul,Cho Yong-Un,Park Ki-Hoon,Choi Young-Ju,Gal Sang-Wan 한국생명과학회 2005 생명과학회지 Vol.15 No.4

흑두로 제조한 청국으로부터 혈전용해력이 우수한 균을 선발하여 동정하였으며, 그를 Bacillus subtilis BB-1로 명명하였다. 이 균은 혈전용해효소 isozyme을 적어도 5개이상 생성하는 균주로 확인되었다. 이 균으로부터 크로모좀을 분리하여 shot gun법으로 혈전용해효소 유전자를 크로닝하였으며, 이 유전자를 BSF-1이라 명명하였다. 이 유전자는 714개의 아미노산을 암호화하고 있으며 기존에 밝혀진 혈전용해효소 유전자와 상동성은 검출되지 않은 새로운 혈전용해효소 유전자였다. 혈전용해효소활성 최적 pH 및 온도는 5.0과 $35^{\circ}C$였다. 기질특이성은 적혈구 배지 또는 skim milk, gelatin등에 전혀 분해활성이 없었다. 이는 혈전만을 특이적으로 분해하는 기질특이성을 보였으며, 혈전분해효소로서의 이용가능성이 충분한 것으로 판단된다. A bacterium producing five fibrinolytic isozymes was isolated from black bean chung kuk. The bacterium was identified as Bacillus subtilis BB-1 by 16s rDNA sequence homology search. A gene out of five fibrinolytic genes in the Bacillus subtilis BB-1 was cloned by shot-gun method. A Cla I DNA fragment of B. subtilis BB-1 chromosome was cloned in to pBluescript II SK(-) and showed the fibrinolytic activity to bacterial cells. The Cla I DNA fragment was sequenced and the sequences did not show homology with gene for protease or fibrinolytic enzyme genes in other organisms. The Cla I DNA fragment was reduced to 2,142 bp by activity-guided PCR cloning method. The optimum pH and temperature of the enzyme were 5.0 and $35^{\circ}C$, respectively. Substrate specificity of the fibrinolytic enzyme was detected in skim milk, casein, gelatin and blood agar plates. The activity of the enzyme was not detected with these substrates. Taken together, this enzyme is a new fibrinolytic enzyme and may be used to prevent thrombosis and arteriosclerosis.

다양한 수술방법에 의한 진성악관절강직증의 치험례

이영훈,이상철,김여갑,류동목,이백수,윤옥병,Lee, Young-Hoon,Lee, Sang-Chull,Kim, Yeo-Gab,Ryu, Dong-Mok,Lee, Baek-Soo,Yoon, Ok-Byung 대한악안면성형재건외과학회 1999 Maxillofacial Plastic Reconstructive Surgery Vol.21 No.3

TMJ ankylosis is defined as a mobile disorder of jaw such as mouth opening limitation, limitation of anterior or/and lateral movement of TMJ. Kazanjian published first clinical report about classification of TMJ ankylosis dividing with intracapsular ankylosis and extracapsular ankylosis. TMJ ankylosis is resulted from trauma, infection, metastatic tumor, irradiation, burn and etc. When TMJ ankylosis is manifested in growing period, it affects to functional disorder and development and position of mandible, so it can result in maxillofacial deformity such as facial asymmetry, micrognathia, malocclusion. For treatment of TMJ ankylosis, various surgical interventions were devised ; condylectomy, gap arthroplasty, interpositional arthroplasty and TMJ reconstruction. So, we report our results with documental study and cases of true ankylosis in our department.

한우태자의 기관연골 발생에 관한 형태학적 연구

이영훈,김인식,양홍현,백영기,Lee, Young-hoon,Kim, In-shik,Yang, Hong-hyun,Paik, Young-ki 대한수의학회 1997 大韓獸醫學會誌 Vol.37 No.1

This study was undertaken to obtain basic data on the histological changes in the tracheal cartilage of the embryos and fetuses of the Korean native cattle. Twenty-two embryos and fetuses of the Korean native cattle, ranging from 30mm(peesumptive fetal age 44 days) to 440mm(presumptive fetal age 168 days) in crown-nump(C-R) length, were used for present study. The results were summerized an follows; 1. Mesenchymal cells differentiated as chondroblasts were condensed into tracheal cartilage in the CRL 30mm of the Korean native cattle embryo, and the chondrocytes begun to appear in the tracheal cartilage in the CRL 40mm fetus. 2. The tracheal cartilage in the CRL 70mm fetus was composed of the large number of chondrocytes. The histochemi8cal reactions for glycosaminoglycans showed strong positive reaction in the CRL 380mm, and for collagen substance showed mildly in the 6th experimental group.

고열충격반응에 영향을 미치는 초파리 hsp70 유전자의 DNA 염기배열

이영훈,전은순,박충웅,Lee, Young-Hoon,Jeon, Eun-Soon,Park, Chung-Ung 생화학분자생물학회 1988 한국생화학회지 Vol.21 No.4

The DNA sequences required for heat shock regulated expression were examined in Drosophila melanogaster. Various hsp70-YP1 fusion constructs where D. melanogaster hsp70 gene and YPI gene were used as a heat shock promoter and as a target gene, respectively, were transfected into D. melanogaster Schneider line 2 cells and their heat inducibility was determined by Northern analysis. The sequences containing two HSEs between -89 and -38 of the hsp70 were not sufficient to induce YP1 RNA upon heat shock whereas the sequences between -89 and +34 including the TATA box and the transcription start region of the hsp70 besides the HSEs were able to drive YP1 transcription during heat shock. The small deletion of the sequences near the transcription start region of the YP1 gene was also observed to repress the heat induced transcription of YP1 RNA by the sequences between -89 and +34 of the hsp70. 초파리 Drosophila melalnogaster에서 고열충격 유발을 조절하는데 필요한 DNA 염기배열을 조사하였다. hsp 70 유전자를 고열충격 촉진자로, YP1 유전자를 표적유전자로 하여 hsp70-YP1 융합유전자를 제조하고 이들 융합유전자를 이용하여 초파리 Schneider line 2 세포를 형질변환시키고 Northern 분석을 함으로써 hsp70-YP1 융합유전자의 고열충격 유발성을 결정하였다. 두개의 HSE (heat shock element) 가 존재하는 hsp70 유전자의 -89에서 -38까지 염기배열만으로는 고열충격에 의해 YP1 RNA를 유발시킬 수 없었지만 두 개의 HSE 이외에 hsp70 유전자의 TATA 박스와 전사시작점을 포항하고 있는 -89에서 +34까지 염기배열은 고열충격에 의해 YP1 RNA를 유발시킬 수 있었다. 또한 YP1 유전자의 전사시 작정 근처의 염기배열이 조금 결실되었을 때 hsp70 유전자의 -89에서 +34까지 염기배열에 의한 YP1 RNA의 고열충격 유발이 억제되는 것이 관찰되었다.

구강종양 골절제 환자의 임플란트 수복 시 연조직에 대한 고려사항

이영훈,고경호,허윤혁,박찬진,조리라,Lee, Young-Hoon,Ko, Kyung-Ho,Huh, Yoon-Hyuk,Park, Chan-Jin,Cho, Lee-Ra 대한치과보철학회 2017 대한치과보철학회지 Vol.55 No.4

구강종양을 절제한 경우 악안면 구조의 상실로 인해 발음, 저작, 심미 등 기능장애를 유발하게 되므로 기능회복을 위해 보철 수복이 필요하다. 이때 임플란트를 이용하면 보철물의 효과적인 기능 향상을 기대할 수 있다. 하지만 골절제술을 시행한 후, 이식골의 성공률과는 별개로 연조직이 감염에 취약한 형태를 갖기 쉬우며 이식골은 염증에 이환된 경우 빠른 속도로 파괴가 발생할 수 있다. 성공적인 보철치료를 위해서는 보철치료에 앞서 적절한 연조직 처치와 보철수복 후 잦은 정기검진을 통해 임플란트의 예후와 연관된 각별한 주의가 필요하다. After the resection of oral tumor, defected maxillofacial structure caused functional difficulties including phonetics, mastication and esthetic aspects. In this cases, implant retained prosthesis can contribute to the functional enhancement. Regardless of the success rate in grafted bone, however, the soft tissue usually had a shape which was susceptible to inflammation. Moreover, infected graft bone presented rapid destruction. For success of the prosthetic treatment, adequate soft tissue treatment and frequent recall check are the essential factors to the successful implant prognosis.

몬테카를로 시뮬레이션을 이용한 휴대용 의료기기 누적공차분석에 대한 사례연구

이영훈,문덕희,Lee, Young Hoon,Moon, Dug Hee 한국시뮬레이션학회 2016 한국시뮬레이션학회 논문지 Vol.25 No.2

Tolerances are defined as the allowable variations in the geometry and positioning of parts in a mechanical assembly for assuring its proper functionality. Tolerance analysis is the activity related to estimating the potential accumulated variation in assemblies. If the estimated variances go out of the specified ranges, it causes the quality problem. Thus, we should adjust the tolerances and this activity is called as tolerance design. In this paper, a case study on the accumulated tolerance analysis and design using Monte Carlo simulation is introduced, which is applied for developing a portable medical device. Using the simulation study, we can improve the assemblability and functionality of the product. 공차란 각 부품들이 기구적으로 조립되었을 때 원하는 수준의 기능성을 확보할 수 있도록 각 부품의 기하학적 형상이나 위치에 대해 허용하는 치수의 변동량을 의미한다. 또한 공차해석이란 부품들이 조립되었을 때, 각 부품의 공차가 조립품에서 어떻게 누적되어 미치는 영향을 분석하는 일련의 절차를 의미한다. 만일 누적된 공차의 분산이 규정된 일정 수준의 범위를 벗어나면 조립품의 품질에 문제가 발생하기 때문에 당초 설정한 부품의 공차를 수정해야 하며, 이러한 과정을 공차설계라고 한다. 이 논문에서는 휴대용 의료기기의 설계단계에서 공차해석과 공차설계를 위해 몬테카를로 시뮬레이션 기법을 활용한 사례를 소개한다. 이러한 시뮬레이션 연구를 통하여 제품의 조립성과 기능성을 개선시킬 수 있다.