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Bacillus sp. SUH4-2로부터 생산되는 말토올리고당 생성 α-Amylase의 정제 및 특성
윤상현,김묘정,김정완,권기성,이인원,박관화 한국산업미생물학회 1995 한국미생물·생명공학회지 Vol.23 No.5
토양에서 분리된 내열성 균주인 Bacillus sp. SUH 4-2가 생산하는 maltose, maltotriose 생성 amylase를 (NH_4)_2SO_4 침전 분획, DEAE-Toyopearl 및 Mono-Q HR 5/5 column 크로마토그래피로 16.1배 정제하였으며 수율은 13.5%이었다. 이 효소의 최적 반응온도는 60∼65℃이며 60℃에서 40분간 방치된 후에도 50% 이상의 역가가 유지되었다. 최적 반응 pH는 5.0∼6.0이며 pH 5.0∼8.0에서 안정하였다. 이 효소의 등전점은 5.8이었으며 SDS-PAGE로 분석한 결과 분자량은 약 63.6 kD이었다. 이 효소를 가용성 전분과 반응시켜 생성된 당류를 TLC로 조사하여 maltose와 maltotriose가 선택적으로 많이 생성되는 것을 확인할 수 있었으며 HPIC로 정량하여 당들이 glucose : maltose : maltotriose : maltotetraose=11 : 59 : 25 : 5의 비율로 생성됨을 알 수 있었다. A Bacillus strain capable of producing an extracellular malto-oligosaccharides forming α-amylase was isolated from soil and designated as Bacillus sp. SUH4-2. The enzyme was purified by ammonium sulfate fractionation, DEAE-Toyopearl and Mono-Q HR 5/5 column chromatographies using a FPLC system. The specific activity of the enzyme was increased by 16.1-fold and the yield was 13.5%. The optimum temperature for the activity of α-amylase was 60∼65℃ and more than 50% of initial activity was retained after the enzyme was incubated at 60℃ for 40 min. The enzyme was stable over a broad pH range of 5.0∼8.0 and the optimum pH was 5.0∼6.0. The molecular weight of the enzyme was determined to be about 63.6 kD and isoelectric point was around 5.8. The enzyme activity was strongly inhibited by Mn^(2+), Ni^(2+), and Cu^(2+); slightly by Ca^(2+). The purified enzyme produced starch hydrolyzates containing mainly maltose and malto- triose from soluble starch. The starch hydrolyzates were composed of 11% glucose, 59% maltose, 25% maltotriose and 5% maltotetraose.
( Suhrid Banskota ),( Jaya Gautam ),( Sushil C Regmi ),( Pallavi Gurung ),( Myo Hyeon Park ),( Seung Joo Kim ),( Tae Gyu Nam ),( Byeong Seon Jeong ),( Jung Ae Kim ) 영남대학교 약품개발연구소 2016 영남대학교 약품개발연구소 연구업적집 Vol.26 No.-
5-Hydroxytryptamine (5-HT) induces proliferation of cancer cells and vascular cells. In addition to 5-HT production by several cancer cells including gastrointestinal and breast cancer, a significant level of 5-HT is released from activated platelets in the thrombotic environment of tumors, suggesting that inhibition of 5-HT signaling may constitute a new target for antiangiogenic anticancer drug discovery. In the current study we clearly demon-strate that 5-HT-induced angiogenesis was mediated through the 5-HT, receptor-linked Gβγ/Src/PI3K pathway, but not through the MAPKIERKlp38 pathway. In addition, 5-HT induced production of NADPH oxidase (NOX)-derived reactive oxygen species (ROS). In an effort to develop new molecularly targeted anticancer agents against 5-HT action in tumor growth, we demonstrate that BJ-11 08, a derivative of 6-amino-2,4,5-trimethylpyri-oln-3-ol, significantly inhibited 5-HT-induced angiogenesis. In addition, BJ-11 08 induced a significant reduction in the size and weight of excised tumors in breast cancer ceil-inocu-lated CAM assay, showing proportionate suppression of tumor growth along with inhibition of angiogenesis. In human umbilical vein endothelial cells (HUVECs), BJ-11 08 signifi-cantly suppressed 5-HT-induced ROS generation and phosphorylation of P13K1Akt but not of Src. Unlike NOX inhibitors, BJ-11 08, which showed better antioxidant activity than vita-min C, barely suppressed superoxide anion induced by mevalonate or geranylgeranyl pyrophosphate which directly activates NOX without help from other signaling molecules in HUVECs, implying that the anti-angiogenic action of BJ-11 08 was not mediated through direct action on NOX activation, or free radical scavenging activity. In conclusion, BJ-1108 inhibited 5-HT-induced angiogenesis through PI3K1NOX signaling but not through Src, ERK, or p38.
엄상준,김은영,김묘경,이봉경,이현숙,김태완,윤산현,박세필,정길생,임진호,Uhm, Sang-Jun,Kim, Eun-Young,Kim, Myo-Kyung,Yi, Bong-Kyung,Lee, Hyeon-Sook,Kim, Te-Oan,Yoon, San-Hyun,Park, Se-Pill,Chung, Kil-Saeng,Lim, Jin-Ho The Korean Society for Reproductive Medicine 1997 Clinical and Experimental Reproductive Medicine Vol.24 No.2
체외성숙과 수정된 돼지 난자의 체외발달능이 체외배발생 배양액인 NCSU 배양액에 0.4% BSA, 10% 혈청 혹은 아미노산 (2% BME 아미노산 용액과 1% MEM 아미노산 용액)을 첨가함으로서 조사되었다. 본 실험에 공시된 난자는 체외수정 추 30시간 (2-세포기)혹은 48 시간 ($2{\sim}4$-세포기)에 회수하였다. 실험I에서 0.4% BSA가 첨가된 NCSU 배양액에서 2-세포기 난자들의 배양경과시간에 따른 발달능을 조사한 결과, 배양 후 72 시간 (체외수정 후 102 시간)에 상실배기와 배반포기 배가 나타났으며, 배양 후 120 시간째 (체외수정 후 150 시간)에도 팽창된 배반포기 배까지만 발달하였다. 실험II는 체외수정 후 48 시간의 분할된 ($2{\sim}8$-세포기) 난자들의 핵과 외관적 분할구와의 수적 차이를 조사한 결과, $2{\sim}4$-세포기보다는 5-세포기 이상에서 핵과 분할구의 조화에 차이가 많았다. 실험III에서는 $2{\sim}4$-세포기 난자들을 배양후 5일째의 배반포들의 투명대의 두께, 난자 크기 그리고 inner cell mass (ICM)과 trophectoderm (TE)의 세포 배열을 조사한 결과, 난자의 크기가 커짐에 따라서 투명대가 얇아지고 전체 세포수가 증가하였지만, ICM의 비율은 차이가 없었다. 실험IV에서는 BSA, 혈청 혹은 아미노산이 첨가 혹은 무첨가된 배양액내에서 $2{\sim}4$-세포기 난자들의 배반포 후 부화능력을 조사한 결과, 모든 군에 있는 난자들은 팽창된 배반포기 배까지 발달할 수 있었던 반면, 난자의 부화는 아미노산 혹은 혈청이 포함된 배양액에서만 일어났다. 더우기 상실배기와 배반포기 시기에 혈청의 첨가는 부화 배반포기 배의 발달을 현저히 증가시켰다. 또한 아미노산과 혈청의 영향을 받은 팽창 배반포기 배는 얇은 투명대, 팽창된 난자의 크기 그리고 ICM과 전체 세포수의 증가를 보였다. 이상의 결과로 미루어 볼때, 배양액내에 대한 아미노산과 혈청의 첨가는 돼지 배반포기 배의 부화를 유도할 수 있다고 보며, 더우기 이들 요소들은 투명대의 두께, 난자의 크기 그리고 ICM과 전체 세포수에 영향을 미친다.