Anti-Inhibin Serum 및 Bovine Follicular Fluld 처리가 한우 난소의 난포 발달과 혈중 호르몬 변화에 미치는 영향

성환후,양병철,황성수,박성재,고응규,노환국,양보석,Seong, H.H.,Yang, B.C.,Hwang, S.S.,Park, S.J.,Ko, Y.G.,Rho, W.K.,Yang, B.S. 한국수정란이식학회 2006 한국동물생명공학회지 Vol.21 No.4

본 연구는 한우 난소의 난포 발달에 있어서 bFF 또는 anti-inhibin serum(AI)의 생리적 역할을 검토하기 위해 수행하였다. Saline(0.95%, control), bFF 또는 AI를 경정맥 주사 처리한 9마리의 한우 암소에서 채혈하여 혈중 estradiol-17$\beta$(E2), inhibin 및 progesterone(P4) 농도를 분석하였으며, 이들 처리에 의한 난포의 발달은 초음파 진단기를 이용하여 관찰하였다. 본 연구에서 얻어진 결과는 다음과 같다. 혈중 inhibin 농도는 bFF 처리구에서 배란 후 102시 간부터 유의적으로 증가하여(p<0.05) 지속적으로 높은 수준을 유지하였다. 혈중 E2 농도는 saline 처리구의 경우 bFF 처리구와 비슷한 수준으로 배란 후부터 낮은 농도를 유지하였으나, AI 처리구는 배란 후 36시간 이후부터 108시간까지 유의적으로 높은 수준을 유지하다가(p<0.05) 점차적으로 감소되는 경향을 나타내었다. 혈중 P4 농도는 saline 처리구와 AI 처리구에서 배란 후 68시간째부터 증가하기 시작하였으나, bFF 처리구에서는 배란 후 84시간부터 180시간까지 saline 또는 AI 처리구에 비해 유의적으로 낮은 농도를 나타내었다(p<0.05). 한편, AI 또는 bFF 처리가 난포 발달에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 초음파 진단기를 이용하여 난소의 난포 발달을 조사한 결과, bFF 처리구에 비해 AI 처리구에서 발달 난포가 많은 것을 확인할 수 있었다. 이상의 결과를 종합해 보면, 외인성 AI는 한우난소에서 분비하는 inhibin을 특이하게 억제하여, inhibin에 의해 분비가 억제되어 있던 FSH 분비를 촉진시킴으로써 난포 발달과 estrogen의 분비 증가를 유발하는 것으로 사료된다 따라서 한우에 있어서 배란 직후 새롭게 발달하는 난포에는 적어도 inhibin이 관여하고 있는 것으로 사료된다. This study was performed to investigate the physiological effects of bovine follicular fluid (bFF) or anti-inhibin serum (AI) on follicular development in Hanwoo. Saline (0.95%), bFF or AI (total of 40 ml) were administered into the jugular vein in 9 Hanwoo cows. The plasma inhibin, estradiol-17 $\beta$ (E2), and progesterone (P4) levels were measured using RIA or ELISA kit and the number of ovarian follicles was observed by ultrasonography at 72 hr after ovulation. The plasma inhibin level in bFF treatment group was significantly increased and maintained higher level from 102 hr after ovulation compared to that of saline and AI groups (p<0.05). In plasma E2 level, AI treatment group showed significantly higher level from 36 hr to 108 hr after ovulation than that of saline and bFF groups (p<0.05). After that it showed decreasing tendency. The plasma P4 level was increased in control and AI treatment groups at 68 hr after ovulation. However, it was maintained significantly lower level in bFF group from 84 hr to 180 hr compared to that of saline and AI group (p<0.05). As a result of ultrasonography at 72 hr after ovulation, higher number of follicles was shown in AI treatment group compared to bFF groups, although the difference was not statistically significant. Taken together, it can be postulated that a treatment of synthesized AI inhibits the secretion of inhibin, stimulates FSH secretion inhibited by inhibin, and induces follicular development and estrogen secretion. According to these results, a development of ovarian follicle immediately after ovulation is associated closely with inhibin in Hanwoo heifers.

착상전 포유동물 배발생 과정에서 후성적 조절

황규찬(K. C. Hwang),권정숙(J. S. Kwon),허영남(Y. N. Xu),이승은(S. E. Lee),손소침(S. C. Sun),이성현,양병철(B. C. Yang),박창은(C. E. Park),이재달(J. D. Lee),김남형(N. H. Kim) 충북대학교 동물생명과학연구소 2010 동물생명과학연구 Vol.3 No.-

착상전 난자의 발달은 유전적 요인과 후성학적 요인들에 의해 조절되며, 복제 난자에서 이들간의 부조화는 난자 발달율와 복제동물 생산율 저하를 초래하게 된다. 하지만, 포유동물 초기 난자발달에서 유전체 메틸레이션(genome methylation), 히스톤단백질 아세틸레이션 및 메틸레이션(histone acethylation/methylation), 그리고 마이크로알앤에이 (miRNA) 등과 같은 후성학적 연구(epigenetics)에 대해서는 알려진 것이 부족한 실정이다. 본 연구에서, 초기 난자의 후성학적 변화를 조사하기 위해 microRNA활성 기작에 중요한 Dicer1 유전자를 knockdown(유전자 발현 억제) 시키기 위한 siRNA injection, qRT-PCR, immunofluorescence microscopy기법을 활용하여 pluripotency에 관련된 유전자들과 단백질의 발현을 조사하였다. 그 결과, Dicer1 유전자의 발현을 억제 시키면 배아 줄기세포의 다능성과 관련된 oct4, nanog, 그리고 sox2의 유전자 발현과 Oct4 단백질 발현이 뚜렷이 억제됨을 확인하였다. 또한, microRNA인 miR-127과 miR-136의 발현 패턴을 착상전 난자들에서 분석하였을 때 핵이식란(NT)과 수정란(IVC)에 비해 단일발생란(parthenote)에서 매우 높게 발현함을 알 수 있었고 이러한 결과는 miR-127의 프로모터 서열에 존재하는 CpG 메틸레이션 패턴과 반비례함을 알 수 있었다. 이러한 결과들에서 미루어 볼 때, 착상전 난자에서 후성학적 리프로그램은 난자의 발달율에 매우 중요하며 본 연구를 토대로 재생의학 및 바이오신약 생산을 위한 SCNT의 산자 생산율을 높이는데 기여하리라 사료된다.

염분오손도 자동측정 방법에 관한 연구

강연욱(Y.W. Kang),장태인(T.I. Jang),정선철(S.C. Jung),양병모(B.M. Yang),강지원(J.W. Kang),조성배(S.B. Jo) 대한전기학회 2000 대한전기학회 학술대회 논문집 Vol.2000 No.7

Matrigel이 첨가된 배양액에서 소 체외수정란의 발달

김동훈 ( D. H. Kim ),김세웅 ( S. W. Kim ),이민정 ( M. J. Lee ),황인선 ( I. S. Hwang ),배성훈 ( S. H. Bae ),양병철 ( B. C. Yang ),임기순 ( G. S. Im ),성환후 ( H. H. Seong ),양보석 ( B. S. Yang ) 한국동물자원과학회 2006 한국축산학회지 Vol.48 No.6

Microdrop과 Straw 방법으로 초자화 동결한 소 난자의 생존율에 관한 연구

양병철,양보석,성환후,임석기,박수봉,장원경,이창규 한국동물자원과학회 2002 한국축산학회지 Vol.44 No.6

본 연구는 소 난자의 초자화 동결 방법을 설정하기 위하여 체외성숙 소 난자에서 난구세포가 부착된 상태 또는 제거한 상태로 microdrop (MD)방법과 straw (Straw) 방법을 이용하여 초자화 동결하여 생존율을 검사하였다. 동결 융해난자는 a) 단위발생을 유도하였고 b) 체외수정 후 전핵 형성을 관찰하였으며 c) 체외수정 후 수정란 발달을 검사하였다. 초자화 동결 난자의 생존율은 MD 방법을 이용하였을 때가 Straw를 이용하였을 때 보다 높았다 (92.50 vs. 74.19%, p<0.05). MD 방법을 이용하였을 때 대부분의 난자가 생존을 하였다. 단위발생을 유도하였을 때 난할율과 배반포 발달율은 MD (45.05%, 10.81%, p<0.05)가 Straw 방법 보다 높았다 (27.17%, 6.52%, p<0.05). 난구세포의 부착 유무에 따라 동결 융해 후 체외수정 하여 자웅 전핵 형성을 각각 검사하였다. 난구세포 제거 난자에서는 MD와 Straw 방법으로 동결 융해하였을 때 차이가 없었다(80.36% vs. 67.31%, p<0.05). 정상 수정율 (2PN)에서는 세 처리간에 차이가 없었다. (Fresh; 54.55% vs. MD; 42.22% vs. Straw; 37.14%, p>0.05). 그러나 미수정란 (<1PN)은 Fresh 난자가 동결융해 난자보다 유의적으로 낮았다 (Fresh; 32.47% vs. MD; 57.78% and Straw 62.86%, p<0.05). 다정자 침입은 (3PN) 신선란 (12,99%)에서 발생하였으나 동결 융해 난자에서는 발생하지 않았다. 난구세포가 제거된 난자에서, 정상 수정율 (2PN)은 Fresh와 동결 융해 난자간에 유의적인 차이를 보였다 (Fresh; 59.38% vs. MD; 17.31% and Straw; 30.43%, p<0.05). 또한 미수정율 (<1PN)에 있어서도 신선란과 동결 융해난은 유의적인 차이를 보였다 (Fresh; 23.44% vs. MD; 73.08% and Straw 58.70%, p<0.05). 다정자 침입 (3PN, >4PN)은 신선란과 동결 융해란 모두에서 나타났다. 체외수정 후, 난구세포가 부착된 난자의 2세포기 발달율은 신선란에 비하여 MD 또는 Straw 처리구에서 유의적으로 낮았다 (Fresh; 81.76% vs. MD; 22.22% and Straw; 11.36%, p<0.05). 동결융해난자는 배반포 발달율에 있어서도 신선란에 비하여 유의적으로 낮았다 (Fresh; 28.38 vs. MD; 1.71% and Straw 0%, p<0.05). 난구세포가 제거된 난자에서 2세포기 발달율은 신선란과 MD에서 차이가 없었다 (27.59% vs. 19.25%, p<0.05), 그러나 배반포 발달율에 있어서는 신선란이 MD 또는 Straw 처리구보다 유의적으로 높았다 (4.31% vs. 0.62% and 0%, respectively; p<0.05). 이상의 결과에서, 초자화 동결융해한 소 난자는 체외수정 후 배반포로 발달이 가능함을 나타내주고 있다. To establish vitrification method for bovine oocytes, mature bovine oocytes were vitrified by microdrop (MD) or straw (Straw) method and the viability of vitrified oocytes with or without cumulus cells (CC) were examined by several methods; a) parthenogenetic activation; b) pronuclear formation after in vitro fertilization (IVF); and c) embryonic development after IVF. The survival rate of vitrified oocytes by MD was significantly higher than by Straw (92.50 vs. 74.19%, p<0.05). Most of the oocytes survived from vitrification using the MD methods. Cleavage and blastocyst development of parthenogenetically activated oocytes were higher in MD (45.05% and 10.81%, respectively; p<0.05)) than those in Straw method (27.17% and 6.52%, respectively; p<0.05). Male and female pronuclear formation of vitrified-thawed oocytes with or without cumulus cells (CC) after IVF were examined, respectively. The survival rate of vitrified oocytes by MD without CC was no difference between MD and Straw (80.368.14% vs. 67.31%). Normal fertilization (2PN) rates were not different among groups (Fresh; 54.55% vs. MD; 42.22% vs. Straw; 37.14%, p>0.05). While no fertilization (<1PN) rates were significantly different between fresh and vitrified-thawed groups (Fresh; 32.47% vs. MD; 57.78% and Straw 62.86%, p<0.05). The polyspermy (3PN) was appeared in the fresh (12.99%), but no appeared in the vitrified-thawed groups. In the without CC, normal fertilization (2PN) rates were significantly different between fresh and vitrified-thawed oocytes (Fresh; 59.38% vs. MD; 17.31% and Straw; 30.43%, p<0.05). Moreover, no fertilization (<1PN) rates were significantly different between fresh and vitrified-thawed groups (Fresh; 23.44% vs. MD; 73.08% and Straw 58.70%, p<0.05). The polyspermy (3PN, >4PN) was appeared not only fresh but vitrified-thawed groups. After IVF, two-cell developmental rates of vitrified oocytes with CC by MD and Straw were significantly low compared to fresh oocytes (Fresh; 81.76% vs. MD; 22.22% and Straw; 11.36%, p<0.05). Blastocyst developmental rates of vitrified oocytes also were significantly low compared to fresh oocytes (Fresh; 28.38 vs. MD; 1.71% and Straw 0%, p<0.05). In the without CC, two-cell developmental rates were no differnce between Fresh and MD (27.59% vs. 19.25%, p<0.05), while blastocyst rates were difference between Fresh and MD or Straw (4.31% vs. 0.62% and 0%, respectively; p<0.05). In conclusion, the results indicate that the vitrified bovine oocytes have the ability to develop to the blastocyst stage after IVF.

哺乳動物 卵胞卵의 琉璃化凍結後 FDA-test에 의한 生存性 判定

康珉秀,張德支,梁柄哲,金重桂,高敬來,高赫辰 제주대학교 방사능이용연구소 1995 연구보고 Vol.9 No.-

本 實驗은 琉璃化凍結 融解된 포유동물 卵胞卵의 生存性을 FDA-test에 의한 판정을 규명하기 위하여 실행되었으며 Oocytes는 卵丘細胞의 부착 상태에 따라 3 group 분류하였다. A oocyte는 卵丘細胞가 밀착되어 부착된 것(tight oocytes)이며 B oocyte는 卵丘細胞가 部分的으로 부착된 것(partial oocytes) 그리고 C oocyte는 卵丘細胞가 빈약하게 부착된 것(poor oocytes)이다. 琉璃化 凍結液은 1992년 金 등에 의한 연구에서 개발된 것으로서 glycerol 20 %, ethylene glycol, 10%, Ficoll 30% 와 sucrose 10% 로 구성되어 있다. Oocyte(7-10)는 10분의 평형시간을 경과한 후 0.25 ㎖ straw에 넣어 상온에서 직접 액체질소 container(-196℃)에 침지시켜 동결을 완료시켰다. 凍結融解한 A 그룹 난자의 FDA-score는 rat(4.2)에서 rabbit(3.9), cow(3.8), mouse(3.4)와 porcine(2.4)보다 높았지만 cumulus cell의 경우는 rabbit(4.7)에서 rat(4.1), cow(2.9), porcine(2.6)과 mouse(1.4)보다 높았다. 凍結融解한 B 그룹 난자들의 FDA-score는 각각 3.1(cow), 2.9(rabbit), 2.9(mouse), 2.6(rat) 그리고 2.5(porcine)이였다. 하지만 cumulus cell의 경우는 rabbit(3.7)에서 porcine(2.6), rat(2.3), cow(1.7) and mouse(0.3)보다 높았다. 凍結融解한 C 그룹 난자의 FDA-score는 mouse(4.1)에서 cow(2.9), rabbit(2.6), rat(1.3)과 porcine(1.1)에서 보다 높았다. 以上의 結果에서 mouse를 제외하고 일반적으로 난포난의 琉璃化 凍結融解 후 group A의 난자가 group B와 C에서 난자보다 生存率이 높았으며 FDA-test를 하였을 때 oocytes는 물론 cumulus cell에서도 발광을 나타내어 卵丘細胞의 생존판정여부를 확인할 수 있는 가능성을 제시하였다. This experiment was carried out to study the determination of survival of vitrified and thawed mammal follicular oocytes by FDA-test. Oocytes were divided into 3 groups according to attachment of cumulus cell. Group A oocytes were tightly surrounded by cumulus cell, group B oocytes were partially surrounded by cumulus cell, and group C oocytes were poorly surrounded by cumulus cell. Vitrification solution developed by our previous study (Kim et al, 1992) which consisted of permeable agent (20% glycerol + 10 % ethylene glycol) and nonpermeable agent (30 % Ficoll + 10 % sucrose). Oocytes (7-10) loaded into 0.25 ㎖ straw after 10 min equilibration were plunged into liquid nitrogen (-196℃) directly. The FDA-score of vitrified and thawed group A oocytes was higher in rat (4.2) than in rabbit (3.9), cow(3.8), mouse (3.4) and porcine(2.4), however that of cumulus cell was higher in rabbit (4.7) than in rat (4.1), cow(2.9), porcine(2.6) and mouse (1.4). The FDA-score of vitrified and thawed group B oocytes were 3.1(cow), 2.9 (rabbit), 2.9 (mouse), 2.6 (rat) and 2.5(porcine), respectively. However that of cumulus cell was higher in rabbit (3.7) than in porcine(2.6), rat(2.3), cow(1.7) and mouse(0.3). The FDA-score of vitrified and thawed group C oocytes was higher in mouse (4.1) than in cow(2.9), rabbit(2.6), rat(1.3) and porcine(1.1). As shown in the above results, The survival rates of oocytes were higher in group A than in group B and C except in mouse and cow. These results suggest that the survival of cumulus cell as well as follicular oocytes can be reliably judged by their fluorescence with FDA-test.

子宮頸部癌의 放射線治療에 關한 考察

楊秉喆,李道行,崔炳肅 최신의학사 1976 最新醫學 Vol.19 No.3

From 1969, four hundred forty four carcinoma of the cervix patients were received radiotherapy and 378 patients were treated by Co-6O Teletherapy unit and 66 patients were by 10 MeV. Linear accelerator. The base line study of the staging were consists of pelvic examination. IVP cystoscopy and sigmoidoscopy. An analysis of 444 patients were as follow; 1. Age incidence-most common in 40-50 2. Squamous cell carcinoma accounted for 94.7% of the lesions and 5.3% was adenocarcinoma. 3. Incidence of staging were; stage I 13.8 II 49.1 III 21.5% IV 7.2% Other 5.6% 4. Most common complications are sigmoiditis (28.3%) and cystitis (29.3%) 5. High incidence complications were noted in parallel AP & PA, lateral opposing portsis compare with 4 oblique portals. 6. Post-operative (TAH) irradiation revealed high incidence of complication. Three year survival rate was 84.3% in stage II.

동결속도와 평형시간이 소 미성숙 난자의 동결 융해후 생존율에 미치는 영향

양병철,양보석,성환후,임기순,최선호,장원경,진동일,임경순 한국가축번식학회 2001 Reproductive & developmental biology Vol.25 No.1

The present study was undertaken to investigate the effects of cooling rate and equilibration time on the survival, in vitro maturation and development to embryos of frozen-thawed bovine immature oocytes(Germinal Vesicle Stage). The cryoprotectants are used 10% ethylene glycol(EG) as permeating cryoprotectant and 0.05M sucrose(S) or trehalose(T) as low molecular weight nonpermeating cryoprotectants and 5% ficoll(F) or polyvinylpyrrolidone(PVP) as high molecular weight nonpermeating cryoprotectants. Four freezing solution were uysed in this experiment(EFT: 10% EG + 5% F + 0.05M T, EFS: 10% EG + 5% F + 0.05M S, EPT: 10% EG + 5% P + 0.05M T, EPS: 10% EG + 5% P + 0.05M S). The best equilibration time and freezing solution was 15 min in EPT(83% survival rate of frozen-thawed bovine immature oocytes). When frozen-thawed bovine oocytes were cultured following IVM and IVF, there was no significant difference in cleavage and development rates among the EFT, EFS, EPT and EPS solutions. When 9 blastocysts derived from frozen bovine oocytes were transferred to 6 recipients, two recipients were pregnant. And one was aborted at 45 days of pregnancy and the other had a stillbirth.

^(169)Yb-DTPA를 이용한 Cisternography

도종웅,김상철,이규창,이헌재,양병철,박창윤,최병숙 대한신경외과학회 1977 Journal of Korean neurosurgical society Vol.6 No.1

The radioactive nucleid cisternography is being used as a diagnostic adjunct of CSF rhinorrhea and otorrhea, hydrocephalus, patency after ventricular shunt operation, brain tumor and cangenital anomalies of the central nervous system. In numerous radioactive nucleids, ^(169)Yb-DTPA is known to have moderately effective half life, high energy level for scintilation, and pure r-emitter in subarachnoid space. Authors review some clinical advantage of cisternography using ^(169)Yb-DTPA applied in the diagnosis of CSF rhinorrhea and otorrhea, hydrocephalus, CSF fistula and patency after ventricular shunt operation.