Aniline 을 분해하는 Flavimonas oryzihabitans 균주의 분리 , 동정 및 분해특성

홍성갑(Seong Karp Hong),박용근(Yong Keun Park),이영록(Yung Nok Lee) 한국환경생물학회 1998 환경생물 : 환경생물학회지 Vol.16 No.3

Novel strains degrading aniline were isolated from soils containing many herbicides in Kyonggi-Do, when aniline was provided as a sole carbon and nitrogen source. Among of them, three strains were identified as Flavimonas oryzihabitans KH1, KH2, and KH3. All of these three strains metabolized aniline through ortho-cleavage pathway. F. oryzihabitans KH1, KH2, and, KH3 strains showed narrow substrate-range in their ability on degrading various aromatic compounds containing aniline and catechol derivatives : they were not able to degrade chloroanilines and chlorocatechol , KH1 is superior to the other strains in view of catechol-1,2-dioxygenase activity of 0.42 unit/㎎ at 260 ㎚ absorbance and oxygen consumption of 300 nmol/min/㎎ in oxidizing aniline (2 mM) as a substrate. Complete degradation of aniline (2 mM) with KH1 was identified by GC-Mass analysis.

Efficacy of Gene Transfer and Expression of Novel Recombinant Baculovirus Vector

권태동,홍성갑,Kweon, Tae-Dong,Hong, Seong-Karp The Korea Institute of Information and Commucation 2014 한국정보통신학회논문지 Vol.18 No.8

폴리히드론 프로모터, 수포성구내염 바이러스G, 폴리A, 사이토메가바이러스 프로모터, 강화녹색형광단백질, 단백질전달부위 유전자 등을 포함한 새로운 베큘로바이러스 시스템이 제조되었다. 본 재조합벡터 시스템은 인간 섬유아세포에 적용하여 시험하였고 재조합된 유전자의 전달과 유전자 발현을 대조 벡터시스템과 비교하였다. 본 연구로부터 새롭게 제작된 본 베큘로바이러스 시스템이 유전자의 전이와 유전자 발현 면에서 대조 벡터시스템 보다 고효율을 나타내었다. Novel baculovirus vector systems recombined with coding genes of polyhedron promoter, vesicular stomatitis virus G (VSVG), polyA, cytomegalovirus (CMV) promoter, enhanced green fluorescent protein (EGFP), and protein transduction domain (PTD) were constructed. These recombinant baculovirus vector systems were applied into human foreskin fibroblast cells and compared the effects of gene transfer and gene expression of these recombinant baculovirus vector systems with control vector system. From this study, it showed that these novel recombinant baculovirus vector systems were superior efficacy to control vector system in view of gene transfer and gene expression.

Semliki Forest Virus 감염은 뉴우런의 탈수초를 유발한다

김현주,사영희,홍성갑,Kim, Hyun Joo,Sa, Young-Hee,Hong, Seong-Karp 한국정보통신학회 2017 한국정보통신학회논문지 Vol.21 No.6

척수신경절의 신경 세포와 슈반세포의 공동 배양으로 수초화 형성 세포 집단이 제조되었다. 슈반세포와 뉴런 세포가 쥐의 배아의 척수신경절로 부터 각각 in vitro에서 분리되었다. 배양된 슈반세포와 뉴런 세포는 동일한 평판접시에서 공동배양 되었다. 본 실험과정은 다음과 같은 4 단계로 구성되어 있다 : 첫 번째 단계는 배아의 척수 신경절 세포의 현탁 과정, 두 번째 단계는 안티 mitotic cocktail의 추가 과정, 세 번째 단계는 척수신경절 세포의 정제 과정, 및 네 번째 단계는 척추 신경절 세포에 슈반 세포의 추가 과정이다. 이들 세포들은 때 수초화가 진행되었다. 이렇게 수초화된 공동 배양은 Semliki forest virus에 의해 감염되었고 그 때 탈수초화 과정을 유발시켰다. 우리는 수초화된 뉴런에 존재하는 peripheral myelin protein 22의 항체를 이용하여 수초화 과정과 탈수초화 과정을 확인하였다. We constructed a population of myelinated cells with co-culture of neuronal cells and Schwann cells from DRG. Schwann cells and neuronal cells were isolated from dorsal root ganglion (DRG) in embryos of rat in vitro respectively. The cultured Schwann cells and cultured neuronal cells, respectively were co-cultured in a same plate. This procedure contains following four steps: first step of suspension of the embryonic dorsal root ganglion cells, second step of addition of anti-mitoticcocktail, third step of purification of dorsal root cells, and fourth step of addition of Schwann cells to dorsal root ganglion cells. These cells were performed accomplishment of myelination. This myelinated co-culture system was infected by Semliki forest virus and then induced demyelination processing in this myelinated co-culture. We identified myelination and demyelination processing using antibody of peripheral myelin protein 22 (PMP 22) meaning presence of myelinated neuron.

약제내성 Mycobacterium tuberculosis의 rpoB 유전자 분석과 클로닝 발현

최은경,권태동,배선준,조해선,홍성갑,Choi, Eun Kyeong,Kweon, Tae-Dong,Bai, Sun-Joon,Cho, Hae Sun,Hong, Seong-Karp 한국정보통신학회 2013 한국정보통신학회논문지 Vol.17 No.4

마산병원과 결핵연구원에서 rifampin 내성균주를 확보하여 기존의 전통방법으로 검사된 항결핵제 내성균의 rifampin 내성관련 유전자인 rpoB (RNA polymerase beta subunit)의 변이를 DNA 염기서열 분석방법에 의하여 분석하였다. 그 결과 국내에서 분리되는 결핵균에서는 기존에 보고된 rpoB 변이부위와는 다른 위치의 DNA 염기 변이가 확인되었고 국내에서 여러 내성 결핵균주에서 변이가 발견되고 있지만 이러한 변이가 리팜핀 내성을 실제로 유발하는지 실험적으로 검증된 바는 없었다. 따라서 이러한 특이 부위의 rpoB변이들이 실제로 리팜핀 내성을 유발하는가를 확인하기 위하여 내성 결핵균주들의 rpoB 변이유전자를 polymerase chain reaction(PCR)으로 증폭하고 이것을 리팜핀 감수성 결핵균주에 cloning(클로닝)하고 발현시켜 rpoB 변이가 리팜핀에 대한 내성을 발생시켰음을 실험적으로 확인하였다. Using DNA sequencing method, we analyzed mutations of rpoB (RNA polymerase beta subunit) rifampin-resistant Mycobaterium tuberculosis strains which were identified by conventional test at Masan National Hospital and The Korean Institute of Tuberculosis. Though it has been reported different mutations of rpoB region of rifampin-resistant M. tuberculosis strains in the south of Korea, it is not confirmed whether these mutations of rpoB region actually express rifampin resistance through experiment. We confirmed experimentally these mutations of rpoB region of M. tuberculosis strains induced rifampin-resistance through ampified rpoB by polymerase chain reaction (PCR) and cloning of mutant rpoB into rifampin sensitive-M. tuberculosis strain.

Effects of Recombinant pOPINEneo-3C-GFP Vectors Containing Cancer Suppressor Genes

Young-Hee Sa(사영희),Chang-Shik Choi(최창식),Ki Hwan Lee (이기환),Seong-Karp Hong(홍성갑) 한국정보통신학회 2019 한국정보통신학회 종합학술대회 논문집 Vol.23 No.2

Baculovirus System은 곤충세포에서 단백질을 발현하는 viral system으로 baculovirus가 곤충세포에 감염되어 증폭되는 특성을 이용한 벡터시스템이다. 곤충세포는 대부분의 mammalian protein-targeting sequence를 인식하기 때문에 다양한 단백질을 발현시킬 수 있고, mammalian cell에서 수행되는 많은 post-translational modification이 일어난다는 장점이 있다. 베큘로 바이러스 시스템은 안전성, 대규모 및 높은 수준의 유전자 발현 관점에서 중요한 이점을 갖는다. 본 연구에서는 사이토 메갈로 바이러스 (CMV) 프로모터, 강화녹색 형광 단백질 (EGFP) 및 암억제유전자 p53 등이 포함된 pOPINEneo-3C-GFP 벡터를 재조합하였다. pOPINEneo-3C-GFP 재조합 벡터를 다양한 세포 및 세포주에 감염시키고 유전자의 전이 및 발현을 일반적인 벡터를 대조군으로 비교하여 분석하였다. 본 연구의 결과, pOPINEneo-3C-GFP 재조합 벡터가 유전자 전이 및 발현 면에서 대조군 벡터보다 더 높은 효율을 보여주었다. 본 연구는 과학 기술부, 한국 정보기술 진흥 기금 (MSIP)이 후원하는 한국 연구 재단 (NRF)을 통해 중견 연구원 프로그램 (NRF-2016R1A2B4016552)을 통해 지원되었다. Baculovirus System is a viral system that expresses proteins in insect cells. It is a vector system that uses baculovirus to infect and amplify insect cells. Since insect cells recognize most mammalian protein-targeting sequences, they can express a variety of proteins and have many post-translational modifications that occur in mammalian cells. The baculo virus system has important advantages in terms of safety, large scale and high levels of gene expression. In this study, pOPINEneo-3C-GFP vectors containing cytomegalovirus (CMV) promoter, enhanced green fluorescent protein (EGFP) and cancer suppressor gene p53 were recombined. The pOPINEneo-3C-GFP recombinant vector was infected with various cells and cell lines and the metastasis and expression of the genes were analyzed by comparing common vectors with controls. As a result of this study, pOPINEneo-3C-GFP recombinant vector showed higher efficiency in gene transfer and expression than control vector. This work was supported by a grant from Mid-Career Researcher Program (NRF-2016R1A2B4016552) through the National Research Foundation of Korea(NRF) funded by the Ministry of Science, ICT & Future Planning(MSIP).

Identification of demyelination formation caused by JCvirus infection

Young-Hee Sa(사영희),Hyun Joo Kim(김현주),Bae Hwan Lee(이배환),Sun Joon Bae(배선준),Seong-Karp Hong(홍성갑) 한국정보통신학회 2020 한국정보통신학회 종합학술대회 논문집 Vol.24 No.1

JCvirus의 감염에 의해 유발되는 탈수초성 신경질환은 인간의신경계에서 다양한 신경의탈수초과정을 일으키며 통증을 동반하는 진행성 다병성 뇌병증 질환(Progressive multifocal encephalopathy (PML)) 등 많은 신경질환을 발생시킨다. 이러한 바이러스 감염반응은 인간의 신경세포의 탈수초화를 유발하여 신경세포의 파괴로 발생하는 병원성 기작으로 예상된다. 쥐의 배아 조직으로부터 슈반세포(Schwann cell)와 뉴런 세포(neuronal cell)를 각각 분리하여 각각 배양한 후에 두 세포군을 합쳐 공동배양을 하였고 몇주간 배양을 통해 수초(myelin)를 형성시켰다. 형성된 수초는 수초단백질인 MPZ(myelin protein zero), MBP(myelin basic protein)의 항체를 사용하여 western blot과 confocal microscope 등으로 분석하였다. 연구결과 JC 바이러스로 감염된 myelin 형성배양 세포들은 MPZ과 MBP 등 수초단백질이 전혀 발견되지 않았다. 따라서 myelin 형성배양 세포들은 JC 바이러스 감염에 의해 myelin 형성이 파괴된 것으로 확인되었다. 본 연구는 과학 기술부, ICT 및 미래 계획(NRF-2017R1A2B3005753)이 자금을 지원하는 국립 연구 재단(NRF)을 통한 기초 연구 프로그램과 연세의과대학교 교수연구 2019(CJ기업후원)의 지원을 받았다. Demyelination neuropathy caused by the infection of JCvirus causes various nerve demyelination processes in the human nervous system and causes many neurological diseases such as progressive multifocal encephalopathy (PML) accompanied by pain. This viral infection response is expected to be a pathogenic mechanism caused by the destruction of nerve cells by causing demyelination of nerve cells in humans. Schwann cells and neuronal cells were isolated from mouse embryonic tissues and cultured separately, and the two cell groups were combined and co-cultured. Cells co-cultured for some weeks formed myelin. Myelin formation was analyzed with western blot and confocal microscope using an antibody of myelin proteins, MPZ(myelin protein zero), MBP(myelin basic protein). From the result, Myelin-forming cells infected with JC virus were not found by MPZ and MBP. Therefore, we confirmed that myelin-forming cells were destroyed after JC virus infection. The study was supported by a Basic Research Program through the National Research Foundation (NRF) funded by the Ministry of Science and Technology, ICT and Future Plans (NRF-2017R1A2B3005753) and a faculty research grant of Yonsei University College of Medicine for 2016(6-2016-0161).

Myelin Formation by Coculture with Schwann Cells and Neuronal Cells and Myelin Degradation by JC Virus Infection

Young-Hee Sa(사영희),Hyun Joo Kim(김현주),Bae Hwan Lee(이배환),Sun Joon Bae(배선준),Seong-Karp Hong(홍성갑) 한국정보통신학회 2019 한국정보통신학회 종합학술대회 논문집 Vol.23 No.2

쥐의 배아 조직으로부터 슈반세포(Schwann cell)와 뉴런 세포(neuronal cell)를 각각 분리하여 각각 배양한 후에 두 세포군을 합쳐 공동배양하였다. 2주 동안 공동배양한 세포들은 myelin을 형성하였다. myelin 형성은 myelin 단백질인 myelin basic protein(MBP)의 항체를 사용하여 동초점 현미경으로 확인하였다. myelin 형성배양 세포들은 JC 바이러스를 3일 동안 감염시켰다. JC 바이러스 감염 후 myelin 형성배양 세포들은 MBP 항체를 사용하여 동초점 현미경으로 확인하였다. 그 결과 JC 바이러스 감염된 myelin 형성배양 세포들은 MBP가 거의 발견되지 않았다. 따라서 myelin 형성배양 세포들은 JC 바이러스에 의해 myelin 형성이 파괴 혹은 분해된 것으로 확인되었다. 본 연구는 과학 기술부, ICT 및 미래계획(NRF-2017R1A2B3005753)이 자금을 지원하는 국립 연구 재단 (NRF)을 통한 기초 연구 프로그램과 연세의과대학교 교수연구 2019(CJ기업후원)의 지원을 받았다. Schwann cells and neuronal cells were isolated from mouse embryonic tissues and cultured separately, and the two cell groups were combined and co-cultured. Cells co-cultured for 2 weeks formed myelin. Myelin formation was confirmed by confocal microscopy using an antibody of myelin protein, myelin basic protein (MBP). Myelin-forming cells were infected with JC virus for 3 days. Myelin-forming cells after JC virus infection were identified by confocal microscopy using MBP antibody. As a result, myelin-forming cells infected with JC virus had almost no MBP. Therefore, myelin-forming cells were found to be destroyed or degraded by the JC virus. The study was supported by a Basic Research Program through the National Research Foundation (NRF) funded by the Ministry of Science and Technology, ICT and Future Plans (NRF-2017R1A2B3005753) and a faculty research grant of Yonsei University College of Medicine for 2016(6-2016-0161).