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- 저자 : 황유석(Yoo-Seok Hwang) (검색결과 6 건)
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BMP 신호 하부 인자인 PV.1 단백질의 결합 단백질 동정
황유석(Yoo-Seok Hwang),채정필(Jeong-Pil Chae),김동선(Dong-Sun Kim),박권무(Kwon Moo Park),배용철(Yong Chul Bae),박매자(Mae Ja Park) 대한해부학회 2007 Anatomy & Cell Biology Vol.40 No.3
척추동물에서 BMP의 배(ventral)쪽 신호 전달 경로의 하위에 있는 전사조절인자들은 등배(dorsalventral)쪽 축을 따라 형성되는 중배엽에 있어서도 그 기능을 공유 한다는 것이 보고 되었다. 본 연구에서는 BMP 신호 물질의 하위 유전자인 PV.1 단백질이 배쪽과 등쪽에서의 신호전달에 있어서 차별적 기능을 알기 위하여 PV.1과 상호 결합하는 단백질을 검색하였다. 효모 이중 접합법을 이용하여 24개의 PV.1 결합 단백질을 검색하였고, 이중 결합하는 Xvent-2와 Xclaudin-6에 대한 PV.1 단백질의 도메인(domain) 연구를 하였다. PV.1 단백질의 C-terminus인 197-241 지역이 Xclaudin-6와 결합하는 반면에 Xvent-2는 PV.1 단백질의 C-terminus 전반에서 결합한다는 것을 확인하였다. 또한 PV.1과 결합하는 Xvent-2는 동형 이중 결합(Homodimerization)뿐만 아니라 PV.1과 결합하는 Xclaudin-6과도 이형 이중 결합(Heteodimerization)을 한다는 것을 확인하였다. Homeodomain transcription factors functioning downstream of BMP ventral pathway have been reported to share similar domain of roles in mesoderm patterning along the dorsal-ventral axis. To elucidate the differential role of PV.1 in the aspect of relationship between dorsal and ventral region, we tried to screen PV.1- interacting proteins. Twenty-four PV.1-interacting proteins were identified by yeast two-hybrid screening. Xvent-2 and Xclaudin-6 among these, went under domain study. The C-terminus of PV.1, more specifically 197-241 region was found to interact with Xclaudin-6. Meanwhile Xvent-2 has mild affinity to overall C-terminal region of PV.1. At the same time it was found that Xvent-2 homodimerizes and also binds to Xclaudin-6.
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박매자(MaeJa Park),황유석(Yoo-Seok Hwang) 대한해부학회 1998 Anatomy & Cell Biology Vol.31 No.4
본 실험의 목적은 인공 요관 결석 모델과 포르말린 자극에 의한 요관 염증 모델에서 CGRP 면역양성 신경섬유의 분포양 상을 알아보고자 하는 것이다. 인공 요관 결석 모델은 Giamberaldino의 방법에 따라 만들었고 포르말린 자극에 의한 요관염증 모델은 약간 양의 희석 포르말린을 요관 내로 주입하여 만들었다. 이 각 각의 실험모델에서 특이한 내장동통 행동은 CCTV로 녹화하였고 이를 통계학적으로 분석하였다. 특징적인 내장동통 행동을 나타내는 쥐는 인공결석 이식수술 후 3일에 희생시켰고, 포르말린 자극에 의한 요관 염증 모델의 경우에는 다음날 아침에 희생시켰다. 그 후 각 각의 요관을 채취하여 CGRP 항체로 면역염색 하였다. 인공 요관 결석 모델에서는 CGRP 면역 양성 반응 신경섬유의 분포양상이 아주 다양한 변화를 보였는데, 즉 완전히 소실되거나 망상형, 또는 증가된 면역 양성 반응을 나타내는 망상형으로 각 각 관찰되었다. 반대로 포르말린 자극에 의한 요관 염증 모델에서는 좀 더 저명한 CGRP 면역 양성 반응 신경 섬유들이 망상형으로 관찰되었지만 정상 요관에 비하여 그 밀도는 증가하지 않았다. 즉, 요관의 기계적 자극에 의한 경우 요관에서의 CGRP 면역 양성 신경 섬유의 분포 양상과 밀도가 다양한 반응을 나타내는 것으로 생각되며, 이와는 달리 화학적 자극에 의한 염증의 경우에는 CGRP 면역양성 물질의 변화 양상이 일정함을 보여 준다. The aim of the present study was to investigate the CGRP-IR pattern in the ureter in stone-implanted rats and ureteral formalin irritated rats. Artificial ureteral stone rats were made according to Giamberardino's guide lines. For ureteral formalin irritated rats, a small amount of diluted formalin was instilled into the ureter. The behavioral characteristics were observed and recorded with CCTV and analyzed, statistically. The rats showing characteristic visceral episode were sacrificed three days after stone implantation operation and after overnight chemical irritation followed by immunostaining of the ureter with anti-CGRP on the ureter. In the artificial ureteral stone rats, CGRP IR fiber pattern showed variable changes on the upper portion of the stone implanted ureter. i.e., complete depletion, reticular pattern, and reticular pattern with more increased CGRP immunoreactivity were observed. In contrast, more distinct CGRP IR fibers formed a reticular pattern but were not increased in density in the formalin irritated ureter. The results show the variable changing pattern of CGRP immunoreactivity in the ureter after artificial ureteral calculosis, and the constant CGRP immunoreactivity in the ureter after chemical ureteral irritation
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김재봉(Jae-bong Kim),이효상(Hyo-sang Lee),노동현(Dong-Hyun Roh),황유석(Yoo-Seok Hwang),Ren-He Xu, Hsiang-Fu Kung, Yong-Chul Bae, 박매자(Mae-Ja Park) 대한해부학회 2000 Anatomy & Cell Biology Vol.33 No.5
BMP-4 signaling is mediated through Smad proteins which may translocate to the nucleus to activate transcription. Little is known about how BMP-4 signaling regulates the transcription of its target genes, e.g., Xvent genes. Therefore, we isolated the genomic clone of a BMP-4 responsive homeobox gene, Xbr-1a/Xvent-2. This clone contains a promoter and three exons for the entire coding region. Using the primer extension, we identified the transcription initiation site corresponding to position -64 bp upstream to the ATG codon of the Xvent-2 gene. The promoter was linked to the luciferase reporter gene, and promoter activity determined by luciferase assay. The temporal promoter activity peaked between embryonic stages 13~17, in agreement with its temporal mRNA expression in the whole embryo. Through the serial deletion mutation, the upstream -235 bp of the promoter retains the full transcriptional activity, and is regulated by BMP-4 signaling. The present results suggest that the BMP-4 responsive element is located on the upstream 235 bp of the promoter. BMP-4의 세포 내 신호전달은, Smad 단백질이 세포핵내로 이동하여 표적 유전자의 전사를 자극하는 과정에 의하여, 매개되는 것으로 알려져 있지만, BMP-4가 자신의 표적유전자 중의 하나인, Xvent유전자의 전사를 어떻게 조절하는지는 잘 알려져 있지 않다. 본 실험실에서는 BMP-4 responsive homeobox 유전자인, Xbr-1a/Xvent-2의 genomic clone을 분리하였으며, 이렇게 분리된 clone에는 promoter와 coding region의 전부위에 해당하는 세개의 exon이 들어 있다는 것을 알 수 있었다. 또한 primer extension 실험결과, 전사시작 지점이 Xvent-2 유전자의 ATG 코돈에서 상류쪽 -64 bp이란 것을 알 수 있었다. Promoter 부위를 luciferase reporter 유전자에 연결한 다음, promoter 활성을 luciferase assay를 통하여 측정하였다. Promoter 활성은, 개구리 배자에서의 Xvent-2 유전자의 mRNA 발현양상과 비슷하게, 13~17 배자기에 최고치를 나타내었으며, serial deletion mutation실험을 통하여, promoter 부위의 -235 bp 부위에서 BMP-4/Smad1에 의하여 조절되는, 완전한 전사활성이 관찰되었다. 본 실험의 결과는, Xbr-1a/Xvent-2유전자의 promoter부위에서, 상류쪽 -235 bp 부위에 BMP-4 response element가 존재한 다는 것을 보여주는 것으로 사료된다.
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